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诺沃克病毒快速检测卡. Rapid Test of Noroviruses. 汇报内容. 诺沃克病毒的危害 诺沃克病毒特性 国内当前主要检测手段 Bio Focus 诺沃克病毒快速检测. 诺沃克病毒. 诺沃克病毒( Noroviruses / Norwalk-like virus )是一种广泛流行的致泻性病毒,是非细菌性肠胃炎爆发的最常见原因 感染症状: 10-100 个病毒颗粒即可引起感染 潜伏期为 24-48 小时 急性胃肠炎,即水样腹泻、呕吐和腹痛等症状,一般可持续 12-60 小时 轻者影响人体的生长发育,严重者可导致脱水死亡
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诺沃克病毒快速检测卡 Rapid Test of Noroviruses
汇报内容 • 诺沃克病毒的危害 • 诺沃克病毒特性 • 国内当前主要检测手段 • Bio Focus 诺沃克病毒快速检测 诺沃克病毒快速检测卡
诺沃克病毒 • 诺沃克病毒(Noroviruses / Norwalk-like virus)是一种广泛流行的致泻性病毒,是非细菌性肠胃炎爆发的最常见原因 • 感染症状: • 10-100 个病毒颗粒即可引起感染 • 潜伏期为24-48小时 • 急性胃肠炎,即水样腹泻、呕吐和腹痛等症状,一般可持续12-60 小时 • 轻者影响人体的生长发育,严重者可导致脱水死亡 • 病毒散发(Viral shedding)可达 3周以上 诺沃克病毒快速检测卡
传播途径 • 粪-口传播(“Oral-fecal” route) • 食物传播 (39%) • 人-人接触传播 (12%) • 水源传播 (3%) • 环境表面传播: 地毯, 厕所等 诺沃克病毒快速检测卡
病毒危害性 • 诺沃克病毒主要存在于贝类等生物体内 • 1982年,美国纽约州因生食文蛤和牡蜊,爆发了一次大规模的胃肠炎腹泻 • 在美国,每年由诺沃克病毒引起2000万人次的急性肠胃炎,在欧洲、澳洲等地均有类似情况发生 • 2003年,我国南方地区也大规模爆发由诺沃克病毒引起的急性肠胃炎 诺沃克病毒快速检测卡
国际反响 诺沃克病毒快速检测卡
我国贝类出口受阻 • 2002年,美国农业部从进口中国文蛤中检测出诺沃克病毒,导致中国出口到美国的文蛤受阻,使我国的水产养殖业受到损失。 • 2004年5月,新加坡农业食品兽医局从我国三批出口冻牡蛎检出诺沃克病毒,货物被退回。为此国家质检总局专门发出预警通报,要求各局应积极开展出口冻贝及其产品的诺沃克病毒的监控和检测,未经检测的产品不得出口新加坡。 诺沃克病毒快速检测卡
Noruvirus生态学特征 • 无包膜 • 病毒颗粒直径:27-32 nm • 单结构的衣壳蛋白 染色质由7.5kb大小的ssRNA构成 • 蛋白分子量60kD 由180个分子折叠成90个二聚体,构成二十面体 诺沃克病毒快速检测卡
电镜结构 诺沃克病毒快速检测卡
基因组 • (+) ss RNA • 3 Open Reading Frames: ORF1 = 非结构蛋白前体 RdRp(依赖RNA的RNA聚合酶 + helicase(解旋酶) ORF2 = 衣壳蛋白 ORF3 = 功能未知的小蛋白 ORF1 ORF2 ORF3 cap ? hel RdRp 5’ 3’ 诺沃克病毒快速检测卡
Norovirus分类 先前 • Caliciviridae(杯状病毒科) Genus: 1. Norwalk-Like Viruses (NLVs) 2. Sapporo-Like Viruses (SLVs) 近期 • Noroviruses(诺沃克病毒属) (formerly Norwalk-Like Viruses) 诺沃克病毒快速检测卡
Noroviruses系统分支图谱 诺沃克病毒快速检测卡
基因型特性 • 基因型呈现地域性(endemic co-circulation) • 通过粪-口途径(oral-fecal route)传播 • 籍由饮水或饮食途径爆发 • 异型保护作用(heterotypic protection)不明显 • 无法产生长效免疫力(long term immunity) 诺沃克病毒快速检测卡
国内当前主要检测方法 实时荧光RT-PCR检测方法 • 利用PEG沉降和Frezon提取方法,从贝类产品中富集病毒去除干扰物质,通过RT-PCR方法扩增实现病毒的检测 • 缺点: • 操作复杂,需要配套的实验条件,成本较高 • 由于需要提取RNA,所需样品量较大,不利于取样、运输和样品保存 • 由于RNA极易降解,取样后样品易在检测前失效 诺沃克病毒快速检测卡
诺沃克病毒快速检测卡 • 由韩国CDC支持,Bio Focus公司研发出几种独有的单抗 • 快速检测方法设定的目标准确率为90%以上 • Norovirus快速检测将分别以ELISA和速测卡的形式提供 • 快速检测卡将能够在20分钟内获得检测结果,与PCR方法相比,显著有利于病毒的及时有效监测 • Norovirus快速检测产品将于MEDICA 2008 正式发布 诺沃克病毒快速检测卡
基因型分析(韩国) Predominant strain (GII) Predominant strain (GI) 诺沃克病毒快速检测卡
技术路线 诺沃克病毒快速检测卡
原料 • 抗体:由Bio Focus 公司克隆制备出单抗 • 抗原:由Bio Focus 公司制备的Norovirus VLPs (Virus Like Particle) 方法 • 通过Norovirus VLPs进行免疫图谱分析,以此测定抗体的检测限 诺沃克病毒快速检测卡
检测卡构成 Control line: Anti-mouse IgG Gold conjugate: 96-6-11, 2-4-14 Test line: 96-4-2 诺沃克病毒快速检测卡
灵敏度对比测试 日本竞争对手的单抗 Bio Focus 单抗 GII-4 VLP GII-4 VLP 1,000X Dil. 100X Dil. 100,000X Dil. 10,000X Dil. 1,000X Dil. 100X Dil. 诺沃克病毒快速检测卡
灵敏度测试 诺沃克病毒快速检测卡
谢 谢! 诺沃克病毒快速检测卡