温故知新

1. 温故知新 1、植物细胞工程的实际应用包括哪三方面？ 2、微型繁殖的属于什么生殖方式，为什么能保持优良品种的遗传特性？ 3、作物脱毒选择什么部位、什么细胞、原因？ 4、人工种子的组成？人工种皮(胚乳)中应加入什么成分？ 5、人工种子与天然种子相比有何优点？ 6、单倍体育种的过程、优点？ 7、植物组织培养的过程，人工种子和细胞产物的工厂化生产分别利用了哪一阶段的产物？

2. 其它动物细胞工程的基础 动物细胞培养 动物细胞工程常用技术 核移植 动物细胞融合 单克隆抗体技术

3. 学习目标 • 理解并熟记动物细胞培养的原理、过程及条件 • 举例说明动物细胞培养的应用

4. 儿子捡鞭炮严重烧伤感染，父割千块皮肤 2003年，四川少年小林点燃鞭炮， 导致面部、四肢被严重烧伤并感染。 为了挽救儿子的生命小林的爸爸、 妈妈向医生恳求“割皮救儿” 烧伤整形科主任魏平最终同意 进行罕见的亲体皮肤移植手术。 为了全覆盖孩子身体上被深度烧伤 并发生感染的创面，医生把取自父子俩的皮肤全部剪成指甲盖大小的皮块，儿子和爸爸的皮相隔相嵌。估计父亲的皮肤至少能在其儿子身上存活半年甚至更长时间，这就给儿子自身皮肤的生长带来生机，孩子的痊愈指日可待。

5. 思考一下！ 1、小林在皮肤烧伤之后，很容易得病，为什么？ 2、选取植皮时，理论上选择谁的皮肤最好？为什么？ 3、自身的健康皮肤是有限的，能不能通过其他途径获得自身的皮肤？

6. 一、动物细胞培养 读教材44页第五段，回答动物细胞培养的相关问题。 1、概念： 动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的______,将它分散成_________,然后,放在适宜的_____________中,让这些_____________________。 单个细胞 组织 培养基 细胞生长和增殖 2、起点： 止点： 组织细胞 细胞 3、原理： 细胞增殖

7. 二、过程 结合图示试用文字和箭头表示其过程 取动物组织块 剪碎 胰蛋白酶处理 单个细胞 细胞悬液 原代培养 传代培养

8. 1、取材时一般选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织1、取材时一般选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织 做动物细胞培养材料，原因是什么？ 因为上述材料细胞分化程度低，分裂增殖能力强 2、动物细胞培养前对取出的动物组织要做怎样的 处理？处理目的是什么？ 剪碎并用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间 目的是使组织块分散成单个细胞。 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收 营养和排出代谢废物。

9. 4、细胞培养用胰蛋白酶处理说明细胞间的物质是什么成分？用胃蛋白酶可以吗？4、细胞培养用胰蛋白酶处理说明细胞间的物质是什么成分？用胃蛋白酶可以吗？ 细胞间的物质是蛋白质；不可以；因为动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2，胃蛋白酶在PH为7.2-7.4的动物细胞培养液中无活性。 5、胰蛋白酶会把培养的细胞消化掉吗？为什么？ 会，胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外， 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损 伤作用，因此，必须控制好胰蛋白酶的消化时间

10. 强调一：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。

11. 强调二：接触抑制 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 瓶壁上的细胞层数为单层

12. 原代培养 动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 传代培养： 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶处理然后分 瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程 叫传代培养 1、为什么要进行传代培养？ 因为细胞出现接触抑制

13. 2、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的2、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的 主要区别是什么？ 50代以后的细胞，遗传物质发生了改变，带有 癌变的特点，失去接触抑制的特性 3、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代 以内，为什么？ 10代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常 二倍体核型。

14. 二、总结过程 分化程度低， 分裂增殖能 力强 动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官 原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制 剪碎 胰蛋白酶处理 传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 单个细胞 便于吸收营养物质 排出代谢废物 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变） 细胞悬液 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 原代培养 接触抑制 传代培养

15. 总结与思考 1、动物细胞培养过程中细胞生长的特点 贴壁生长，出现接触抑制现象，传代培养一段时间后，大部分细胞死亡，少部分生存，获得不死性，其遗传物质已发生改变。 2、动物细胞培养能否像植物组织培养那样 最终培养成新个体？ 不能，因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制

16. 液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。 4.动物细胞培养的条件: 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 1）无菌无毒 的环境： 2）营养： 3）温度和pH： 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。 适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4 4）气体环境： “95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的PH。

17. 动物细胞培养技术的应用:(P46最后一段） 1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞 3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物

18. 植物组织培养和动物细胞培养的比较 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 水、无机盐、有机物、植物激素 糖、氨基酸、促生长 因子、无机盐、微量 元素、血清、血浆 植物体 细胞或细胞产品 1、生产蛋白质生物制品 2、用与基因工程做 受体细胞 3、检测有毒物质 4、研究病理、药理等 1、植物繁殖的新途径 2、作物新品种的培育 3、细胞产物的工厂化 生产

19. 1、回答下列有关动物细胞培养的问题： ⑴在动物细胞培养的过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面 时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成的细胞层数是，要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是。 ⑵随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成细胞，该种细胞的黏着性 ，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量_____________ 。 相互接触 接触抑制 单层 胰蛋白酶 衰老甚至死亡 不死性 降低 减少

20. 回答下列有关动物细胞培养的问题： ⑷检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到期的细胞用显微镜进行观察。 ⑸在细胞培养过程中，通常在条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中的活性降低，细胞的速率降低。 ⑹给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当作________进行攻击。 中 冷冻 酶 新陈代谢 抗原