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同种免疫性血小板减少症诊断新方法

同种免疫性血小板减少症诊断新方法. Dr. Sentot Santoso PhD 血小板输注讨论会 中国 · 广州 2009.4.27-4.30. 同种免疫性血小板减少综合症. 胎儿 / 新生儿同种免疫性血小板减少 (FNAIT) 血小板输注无效 输注后紫癜 被动性血小板减少症 移植相关性血小板减少. FAINT 的发病机制. 人类血小板同种抗原. 新的人类血小板同种抗原. 中国人群的人类血小板同种抗原. 中国人群的人类血小板同种抗原表统计. 同种免疫性血小板减少症的诊断学. 抗原测定 表型 （ PIFT, MAIPA ）

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同种免疫性血小板减少症诊断新方法

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Presentation Transcript

  1. 同种免疫性血小板减少症诊断新方法 Dr. Sentot Santoso PhD 血小板输注讨论会 中国 ·广州 2009.4.27-4.30

  2. 同种免疫性血小板减少综合症 • 胎儿/新生儿同种免疫性血小板减少(FNAIT) • 血小板输注无效 • 输注后紫癜 • 被动性血小板减少症 • 移植相关性血小板减少

  3. FAINT的发病机制

  4. 人类血小板同种抗原

  5. 新的人类血小板同种抗原

  6. 中国人群的人类血小板同种抗原

  7. 中国人群的人类血小板同种抗原表统计

  8. 同种免疫性血小板减少症的诊断学 抗原测定 表型（PIFT, MAIPA） 基因分型（PCR-RFLP, PCR-SSP, TaqMan） 特异血清，血小板及罕见的HPA基因型 抗体测定 结合测定（PIFT, ELISA, Flowcytometry） 糖蛋白特异免疫测定法(MAIPA血小板抗原单克隆抗体固定法) 新一代血小板抗体试验？

  9. 问题 • 我们如何改进同种免疫性血小板减少症的诊断呢？

  10. 以稳定的细胞系为来源的DNA产品和血小板同种抗原以稳定的细胞系为来源的DNA产品和血小板同种抗原 • 基因分型，来自于人类血小板同种抗原的表型的献血者的Ｂ淋巴细胞系 • 抗体鉴定，转染的CHO细胞稳定表达的人类血小板同种抗原

  11. 以Ｂ淋巴细胞系作为来源获得标准DNA

  12. 人类血小板同种抗原基因分型的Ｂ淋巴细胞系ISTH/ISBT血小板基因型鉴定实验室人类血小板同种抗原基因分型的Ｂ淋巴细胞系ISTH/ISBT血小板基因型鉴定实验室

  13. 特异等位片段细胞系表达人类血小板同种抗原

  14. 被转染的CHO细胞表达ＨＰＡｓ

  15. 鉴定低频抗原HPA-8bw,-11bw,13bw引起的同种免疫反应鉴定低频抗原HPA-8bw,-11bw,13bw引起的同种免疫反应

  16. 问题 血小板抗体测定是否可以进一步改善？

  17. 血小板抗体测定的进展

  18. 血小板抗原单克隆抗体固定法（ＭＡＩＰＡ）

  19. ＭＡＩＰＡ测定的步骤

  20. 抗原捕获测定的优点和缺点

  21. 新的血小板抗体测定？（１） w/o theuseof mab w/o theuseof wholeplatelets w/o anywashingstep 　　快速、敏感、特异、可靠

  22. 新的血小板抗体测定？（２） • 某些血小板同种异体抗体，用现有的技术是检测不到的

  23. 漏检anti-HPA-1a 的胎儿与母亲不相容的疑似ＦＮＡＩＴ

  24. 抗体检测的影响因素 • 血小板抗原 　三维结构　密度　表位 • 血小板抗体 　浓度　亲和力　异质性　 • 其他因素（比如说：配体）

  25. 血小板糖蛋白IIb/IIIa的构象

  26. 两种类型HPA-1a 的同种异体抗体

  27. 抗原密度

  28. 异种表位：单克隆抗体

  29. 抗体表达的稳定性

  30. 新的血小板抗体测定方法 重组血小板抗原在ELISA体系中的应用

  31. 在昆虫细胞中可溶的重组人类血小板抗原产品

  32. 可溶性重组HPA-1a and -1b

  33. 用rGPIIIa抗体检测anti-HPA-1a（ ELISA）

  34. 凝胶抗原特异测定(GASA)

  35. 血小板抗体测定：MAIPA vs. GASA

  36. 抗原-抗体的“锁与钥匙”的概念

  37. 新的血小板抗体测定方法 纯化血小板抗原或者重组血小板抗原 在SPR（表面激元共振，Surface Plasmon Resonance,SPR)中的应用

  38. 借助SPR技术的抗原-抗体相互作用的实时分析

  39. 表面等离激元（SPR）实时蛋白质-蛋白质交互作用表面等离激元（SPR）实时蛋白质-蛋白质交互作用

  40. 在SPR中用Mabs的HPA-1a and HPA-1b抗原的反应

  41. SPR技术的原则

  42. MabSZ21: HPA-1a “Specific” 单克隆抗体SZ-21 和抗PlA1 抗体的竞争性结合及这种结合潜在的临床应用 Xi X，Zhao Y，Jiang H，Wu Q，LI P， RUAN C 中国 ·江苏血液研究所 、苏州医科大学 Nouv Rev Fr Hematol.1992;34(3):239-42

  43. Mab SZ21 (HPA-1a类似体) 与固定的HPA-1a and HPA-1b抗原在SPR中的反应

  44. 严重的NAIT 病例中低亲和力的HPA-1a同种异体抗体（1）

  45. 严重的NAIT 病例中低亲和力的HPA-1a同种异体抗体（2）

  46. 严重的NAIT 病例中低亲和力的HPA-1a同种异体抗体（3）

  47. 人类血小板抗体的分析 动物模型？ 抗体介导的血小板清除和相关 抑制因子的测定

  48. 以NOD/SCID鼠作为模型进行人类血小板抗体的研究以NOD/SCID鼠作为模型进行人类血小板抗体的研究

  49. 在NOD/SCID鼠体内循环期间人类血小板存活的动力学在NOD/SCID鼠体内循环期间人类血小板存活的动力学

  50. FNAIT的病理机制

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