第六章 中药制剂中各类化学成分分析

1. 第六章 中药制剂中各类化学成分分析

2. §1 生物碱类成分分析 • 概述 • 理化性质 • 物理性状（存在的形态，升华性，挥发性，光学活性） • 碱性 • 溶解性 • 沉淀反应 • 沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸 • 显色反应 • +酸性染料（磺酸肽类）→有色配合物 • 紫外光谱特征 游离—易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有机溶剂 生物碱盐—水溶性增强

3. 生物碱类成分的分离 • 溶剂萃取 • 柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱） • 定性鉴别 • 沉淀反应、显色反应 • 多肽、蛋白质、鞣质等→假阳性反应 • 麻黄碱、秋水仙碱等→假阴性反应 马钱子散中生物碱成分的鉴别 取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时， 滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋 钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。

4. 定性鉴别 • 薄层色谱鉴别 • 吸附剂：氧化铝、硅胶 • 展开剂：氯仿、苯等 • 显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等 • 气相色谱 麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定 • 液相色谱

5. 含量测定 • 总生物碱含量测定 • 化学分析法 • 分光光度法 • 直接测定 • 离子对萃取比色法 • 酸性染料比色法 BH十十In－→（BH十In－）→BH十·In－ • 苦味酸盐比色法 • 雷氏盐比色法 • 异羟肟酸铁比色法 （含有酯键结构的生物碱 ）

6. 含量测定 • 单体生物碱含量测定 • 薄层色谱法 • 高效液相色谱法 • 液—液分配色谱法（以反相为主，如ODS或C18） • 改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液） • 固定相改进（封尾技术） • 液—固吸附色谱法 • 离子交换色谱法（阳离子交换树脂） • 检测器 • 气相色谱法

7. §2 黄酮类成分分析 • 概述 • 理化性质 • 物理性状（存在的形态，颜色，挥发性，光学活性） • 溶解性 • 酸碱性 • 酸性：与酚羟基的数目和位置有关 7,4‘- 二羟基> 7-或4‘- 羟基> 一般酚> 5-羟基 • 碱性 游离甙元—易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等 黄酮甙—易溶于水、甲醇、乙醇

8. 理化性质 • 显色反应 • 还原反应（盐酸镁粉反应） • 金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、镁盐） • 紫外光谱特征 I带(300-400nm) →B环桂皮酰基 II带(240-285nm) →A环苯甲酰基

9. 黄酮类成分的分离 • 溶剂萃取 • 柱层析（聚酰胺柱） • 沉淀法 • 定性鉴别 • 显色反应 • 盐酸-镁粉反应 • 金属盐类配合反应

10. 定性鉴别 • 薄层色谱鉴别 • 硅胶--分离弱极性黄酮 • 展开系统：甲苯-甲酸乙酯-甲酸，氯仿-甲醇 • 聚酰胺--分离含游离酚羟基的黄酮及其苷 • 展开系统：醋酸，醋酸乙酯-甲酸-水等 • 纤维素--分离多糖苷混合物 • 展开系统：正丁醇-乙酸-水，甲酸，乙酸

11. 含量测定 • 总黄酮含量测定 • 紫外分光光度法 • 比色法 • 高效液相色谱法 • 正相色谱 • 硅胶固定相—没有羟基或乙酰化黄酮类成分 • 反相色谱（C18或C8） • 流动相：甲醇-水-乙酸（磷酸缓冲液），乙腈-水 • 检测器

12. 银杏叶提取物总黄酮醇苷含量测定 [含量测定]色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素酚峰与异鼠李素峰的分离度应大于1.5。 对照品溶液的制备（略） 供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷19.2mg的粉末，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液，即得。 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮苷的含量。 总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量）×2.51

13. §3 三萜皂甙类成分分析 • 概述 • 理化性质 • 物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性） • 溶解性 • 紫外光谱特征 大多无明显的紫外吸收或仅在200nm附近有末端吸收 人参皂甙(A型) 甘草酸 皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等 皂甙—可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等

14. 理化性质 • 显色反应 • 醋酐-浓硫酸反应 • 五氯化锑反应 • 三铝醋酸反应 • 冰醋酸-乙酰氯反应 • 氯仿-硫酸反应 • 金属盐类反应 • +铅、钡、铜盐→沉淀 酸性皂甙+硫酸铵/醋酸铅/中性盐→沉淀 中性皂甙+碱式醋酸铅/氢氧化钡/碱性盐→沉淀

15. 三萜皂甙类成分的分离 • 溶剂萃取 • 柱层析（大孔树脂柱） • 沉淀法 • 定性鉴别 • 泡沫反应 • 显色反应

16. 定性鉴别 • 薄层色谱鉴别 • 吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土 • 展开剂： • 三萜皂甙—氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-水等极性较大的体系 • 三萜皂甙元--以苯、氯仿、己烷等为主要组分 • 显色剂 • 三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸-醋酸酐、碘蒸气等

17. 含量测定 • 总皂甙含量测定 • 重量法 • 比色法 • 显色剂：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐-硫酸等等 • 三萜皂甙类单体成分含量测定 • 薄层色谱法 • 高效液相色谱 • 甘草酸、远志皂甙→紫外检测器 • 其他→蒸发光散射检测器（ELSD）

18. 概述 • 理化性质 • 物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性） • 溶解性 • 酸碱性 酚羟基→酸性 丹参醌IIA 大黄素 游离—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等 醌甙—可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇

19. §4 醌类成分分析 • 理化性质 • 显色反应 • 羟基蒽醌+碱→橙，红，紫红，蓝 • +Pb2+/Mg2+ →配合物 • +对亚硝基二甲基苯胺→紫，绿，蓝，灰

20. 定性鉴别 • 显色反应 • 升华法 • 薄层鉴别 • 吸附剂：硅胶 • 展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统→分离甙和甙元 不含甲醇或水的混合溶剂系统→分离甙元 • 显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏

21. 含量测定 • 游离蒽醌的测定 弱极性溶剂提取后，加碱比色 • 结合蒽醌的测定 极性溶剂提取，水解测甙元 先酸水解后，非极性溶剂提取甙元后测定 • 醌类单体成分含量测定 • 薄层色谱法 • 高效液相色谱

22. 牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法 对照品溶液测定：以1，8-二羟基蒽醌为对照品，精密称取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（100µg/mL）。取1mL对照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱溶解并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm波长处测定。 样品测定：⑴游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片10片，刮去糖衣，精密称定重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，称重，水浴上回流4小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，滤过，吸取滤液50mL于分液漏斗中，用蒸馏水20mL洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，直至混合碱液无色，合并碱液，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽，冷却，移入100mL量瓶中，并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。

23. 牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定—混合碱液比色法 ⑵总蒽醌的测定：精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置于150mL烧瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小时，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小时，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用蒸馏水洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿液用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，至碱液无色，合并，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入50mL量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。 ⑶结合蒽醌的计算： 每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量—每片含游离蒽醌量。

24. 复方丹参片中丹参酮ⅡA含量测定—高效液相色谱法复方丹参片中丹参酮ⅡA含量测定—高效液相色谱法 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270nm。 对照品溶液的制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹参酮ⅡA40µg） 供试品溶液的制备：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定，即得。

25. §5 挥发性成分分析 薄荷醇 • 概述 • 理化性质 • 物理性状（气味，比重，折光性） • 溶解性：易溶于有机溶剂 • 显色反应 • 酚类+三氯化铁→蓝，蓝紫，绿 • 羰基+苯肼、羟胺→结晶体 • 醛类+硝酸银胺→银镜 • 内酯类+亚硝酰铁氰化钠+NaOH→红色并逐渐消失 • 奧类+浓硫酸→蓝，紫 桂皮醛 柠檬烯

26. §5 挥发性成分分析 • 定性鉴别 • 化学反应 • 氧化反应(高锰酸钾，铬酸） • 香草醛硫酸反应 • 薄层色谱 • 吸附剂：硅胶、氧化铝 • 展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯） • 显色剂 • 气相色谱法 • GC-MS或GC-FTIR

27. §5 挥发性成分分析 • 含量测定 • 总挥发油含量测定 • 挥发油测定器 • 蒸馏法 • 单一成分含量测定 • 气相色谱 • 薄层色谱法 • 高效液相色谱 • GC-MS或GC-FTIR联用技术

28. §4 其他类型成分分析 • 香豆素类 • 显色反应 • 异羟肟酸铁反应 • 与酚羟基反应 • FeCl3 • Gibbs试剂（2,6-二氯苯醌氯亚胺）反应→蓝色 • 重氮试剂化反应

29. §4 其他类型成分分析 • 香豆素类 • 定性鉴别 • 化学反应法 • 荧光法 • 薄层色谱法 七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别 取本品10g，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸0.5ml，超声处 理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解， 作为供试品溶液。 薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷—醋酸乙酯（4:1）， 显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。

30. §4 其他类型成分分析 • 香豆素类 • 含量测定 • 分光光度法 • 荧光光度法 • 薄层色谱法 • 高效液相色谱法 • 气相色谱法

31. §4 其他类型成分分析 • 有机酸 • 概述 • 理化性质 • 物理性状（存在的形态，溶解性，挥发性） • 提取分离 • 有机溶剂提取法 • 离子交换法 • 水蒸气蒸馏法

32. §4 其他类型成分分析 • 有机酸 • 定性鉴别 • 吸附色谱 • 分配色谱 • 含量测定 • 酸碱滴定法→总有机酸 • 分光光度法 • 高效液相色谱法 • 薄层色谱法 • 其他方法

33. §4 其他类型成分分析 • 环烯醚萜类 • 概述—特殊的单萜 • 理化性质 • 物理性状（存在的形态，多苦味，稳定性） • 溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇 • 薄层定性鉴别 • 吸附剂：硅胶、聚酰胺 • 显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液 龙胆苦甙

34. §4 其他类型成分分析 • 环烯醚萜类 • 含量测定 • 高效液相色谱法 • 薄层扫描法 • 荧光分光光度法 • 分光光度法 复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定 精密称取本品3g，置索氏提取器内，加甲醇回流提取6小时， 回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取，提取 液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭-中性氧化铝柱， 用甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用2ml甲醇溶 解，作为供试品溶液。 薄层条件：硅胶GF254薄层板，展开剂氯仿—甲醇—25%氨 水（4:1:0.1），检测波长247nm，参比波长370nm。

35. §4 其他类型成分分析 • 单萜及二萜类 • 含芍药甙中药制剂的分析 • 薄层色谱 • 高效液相色谱 • 含穿心莲内酯中药制剂的分析 • 薄层色谱 • 回滴法 • 比色法—总内酯 • 薄层扫描或高效液相色谱法—单体成分 穿心莲内酯

36. §4 其他类型成分分析 • 多糖（polysaccharides） • 概述 • 理化性质 • 物理性状（存在形式，还原性） • 溶解性：溶于水，低浓度的酸碱，盐溶液，不溶于醇、醚、丙酮 • 提取分离 • 水提醇沉 ※防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响

37. §4 其他类型成分分析 • 多糖（polysaccharides） • 提取分离 • 金属盐沉淀法 • 季胺氢氧化物沉淀 • 柱色谱法（活性炭+等量的硅藻土） • 凝胶色谱法（葡聚糖凝胶sephadex，琼脂糖凝胶sepharose，聚丙烯酰胺凝胶Bio-gel P） • 制备型区域电泳

38. §4 其他类型成分分析 • 多糖（polysaccharides） • 定性鉴别 • 薄层色谱（硅胶、纤维素、硅藻土） • 纸色谱 展开剂：正丁醇、水混合体系 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等 • 电泳法 • 滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳 • 高效液相色谱法 • 气质联用 酸水解→中和→柱前衍生→GC-MS

39. §4 其他类型成分分析 • 多糖（polysaccharides） • 含量测定 • 总多糖的测定 • 3,5-二硝基水杨酸比色法→棕红色（550nm） ※半微量定量法 • 苯酚-硫酸法→蓝绿色（480-490nm） • 蒽酮-硫酸法→黄绿色(620nm) • 单体多糖的含量测定 • 高效凝胶液相色谱法→确定分子量 • 高效液相色谱法→确定组成 色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱 检测器：示差折光检测器

40. §4 其他类型成分分析 • 多糖 灵芝多糖的测定 [含量测定]对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品适量…… 标准曲线的制备(硫酸蒽酮法，λ= 625nm) 供试品溶液的制备 取本品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90ml，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，加入乙醇150ml，摇匀，4 ℃放置12小时，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 （略） 本品按干燥品计算，含灵芝多糖以无水葡萄糖(C6H12O6)计，不得少于0.50%