实验十植物的组织培养

实验十植物的组织培养 指导教师：唐颖生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

1.实验目的 • 学习植物组织培养常用固体培养基的配制。 • 学习和掌握植物外植体表面消毒的常规方法； • 掌握植物无性繁殖技术。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

2.实验原理 • 植物组织培养定义：植物组织培养是指将离体的植物器官，组织，细胞等在模拟机体自然生理条件下在体外进行培养，使之生存或生长成为完整植株的技术。 • 植物组织培养的应用：快速繁殖；去病毒，苗木复壮；改种、育种及保种；基础研究中的应用。 • 理论依据：植物细胞的全能性。细胞或组织脱分化→愈伤组织→再分化。愈伤组织：一团由组织增生的细胞产生的不定形的疏散排列的薄壁细胞团，无明显的组织或器官的分化。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

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3.实验材料、用品 • 实验材料：胡萝卜块根、烟草叶片 • 实验用品 ①仪器及用具电子天平、高压灭菌锅、冰箱、超净工作台、酒精灯、记号笔、镊子、剪刀、解剖刀、无菌烧杯或三角瓶、无菌培养皿、无菌滤纸、装有培养基的培养容器 pH试纸，烧杯，量筒，试剂瓶，三角瓶，洗耳球，刻度吸管，洗瓶。 ②试剂与药品硝酸胺，硝酸钾，磷酸二氢钠，硫酸镁，氯化钙，硫酸铁，乙二胺四乙酸等（见表6-1），2，4-D，BA，盐酸，1 mol/L氢氧化钠、0.1%氯化汞、75%乙醇、无菌水。。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

4.实验步骤 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

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（1）MS培养基的配制与灭菌

（2）植物外植体取材、消毒和接种 • ①接种前，用75%乙醇棉球或用2%苯扎溴铵溶液檫拭超净工作台台面，将培养基及用具放入工作台，开超净工作台紫外灯照射至少20min，然后开送风开关，关闭紫外灯，通风10min后，再开日光灯进行无菌操作。 • ②自大田中选取无病、无虫、生长健壮的烟草叶片及胡萝卜块根，带回实验室，在自来水下冲洗干净，用剪刀剪切去外围组织。 • ③将材料带入工作台，切成小块分别放无菌烧杯或三角瓶中，加入75%乙醇溶液浸泡30s，然后倒出酒精，加入0.1%氯化汞溶液，分别浸泡2、5、10min，期间不断摇动。然后倒去升汞，用无菌水洗涤3-5次。 • ④点燃酒精灯，用酒精棉球擦拭手臂。取出培养皿，剪刀和镊子使用前插入90%乙醇溶液中，使用镊子时在酒精灯火焰上炽烧片刻，冷却后，用镊子将材料取出，放在无菌滤纸上吸干水分；将材料切成0.5×0.5cm大小的小块。 • ⑤将培养容器放在左手中。将塞盖用右手打开。用火焰灼烧瓶口，灼烧时应不断转动瓶口。用镊子将切好的材料接入培养瓶内的培养基上，每瓶放2-3块。重新盖上瓶盖，封口，贴上标签，标明培养基代号、接种时间和材料名称。 • ⑥将培养瓶放入培养室，于25℃±2℃、3000lux光照条件下培养。定期进行观察。实验结果生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

5.实验结果 • 观察接种材料（叶片、或胡萝卜肉质根）接种后2～5天的污染情况。如果培养材料大部分发生污染，说明消毒剂浸泡的时间短；若接种材料虽然没有污染，但材料已发黄，组织变软，表明消毒时间可能过长，组织被破坏死亡；接种材料若没有出现污染，生长正常，即可以认为消毒剂使用的浓度的及消毒时间适宜。 • 培养1周左右，可见沿外植体伤口边缘长出愈伤组织，3-4周后从愈伤组织中分化出许多丛生不定芽。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

6. 注意事项 • 配制MS培养基时要特别注意pH, 若pH小于5.4，则培养基不会凝成固体。 • 要特别注意消毒外植体的时间，它是实验成败的关键。生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

7.思考题 • 简述植物的试管快速繁殖技术的整个过程。 • 外植体用消毒剂消毒后，为什么要用无菌水漂洗?为什么常在消毒溶液中加入1～2滴表面活性剂（如吐温）? 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室

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