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题目：姜辛夏冲剂对哮喘大鼠 免疫功能调节的研究

题目：姜辛夏冲剂对哮喘大鼠 免疫功能调节的研究. 课题负责人：张玉英. 汇报内容：. 研究目的、内容 课题完成时间 具体执行情况 经费使用情况. 一、研究目的、意义及内容. 目的 : 该课题 是在临床观察有效基础上，在进行实验研究已证实该方具有减轻气道炎症，降低气道高反应性，松弛支气管平滑肌痉挛的作用的前提下，通过观察姜辛夏冲剂对哮喘大鼠免疫功能调节作用的影响，进一步探明其作用机理，为研究治疗哮喘的中药新药提供理论和实验依据。

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题目：姜辛夏冲剂对哮喘大鼠 免疫功能调节的研究

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Presentation Transcript

  1. 题目：姜辛夏冲剂对哮喘大鼠 免疫功能调节的研究 课题负责人：张玉英

  2. 汇报内容： • 研究目的、内容 • 课题完成时间 • 具体执行情况 • 经费使用情况

  3. 一、研究目的、意义及内容 目的:该课题是在临床观察有效基础上，在进行实验研究已证实该方具有减轻气道炎症，降低气道高反应性，松弛支气管平滑肌痉挛的作用的前提下，通过观察姜辛夏冲剂对哮喘大鼠免疫功能调节作用的影响，进一步探明其作用机理，为研究治疗哮喘的中药新药提供理论和实验依据。 研究内容：主要研究姜辛夏冲剂对卵蛋白致敏哮喘SD大鼠血清及肺泡灌洗液（BALF）中白介素（IL）-4、IL-5、IL-12、γ-干扰素（IFN-γ）含量及总IgE含量的影响，从免疫调节角度探讨其作用机理，为该方的临床应用提供理论和实验依据。

  4. 二、课题时间： • 1.完成周期：2006.01～2007.12 • 2.计划完成时间： 2006.01～2006.07 • 2006.01～2006.03 预定实验动物，相关试剂及药物等，检验试剂等是否合格。 • 2006.04～2006.06 做必要的技术及预实验准备，检验是否到位。 • 2006.07～2006.09 做预实验，考查造模方法、给药途径等是否合理。预实验提前到五月至六月份进行)，现已结束

  5. 三、执行情况： • 第一阶段： • 调研：（主要是试剂：百日咳杆菌、试剂盒。造模方法、具体操作及标本采集等均做了反复调研。调研方式主要采用：网络、电话、近处直接到现场了解。）

  6. 第二阶段： • 分析调研材料，确定有关实验方法、模型制作、试剂、对照药物等做必要的预实验准备： • 在近阶段（2006.04-2006.6.30），通过对本实验的造模方法、造模试剂、检测指标等进行调研结果如下：

  7. 造模、试剂：通过查阅文献及研究总结以前造模方法发现采用四肢、双侧腹股沟各皮下注射0.1ml抗原液及腹腔注射0.2ml抗原液进行模型制备效果优于其他方法。致敏试剂用百白破杆菌疫苗造模、试剂：通过查阅文献及研究总结以前造模方法发现采用四肢、双侧腹股沟各皮下注射0.1ml抗原液及腹腔注射0.2ml抗原液进行模型制备效果优于其他方法。致敏试剂用百白破杆菌疫苗 • 酶联免疫吸附法：经多方面调查进行研究采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定细胞因子，方法易操作且结果准确，能更好的反映指标 • 试剂盒：决定订购武汉博士德生物科技有限公司IL-4的ELISA试剂盒，上海西唐生物科技有限公司的IL-5、IL-12、IFN-γ的ELISA试剂盒，大连泛邦化工技术开发有限公司IgE的ELISA试剂盒。（以上试剂盒质量较可靠，相比其他公司价廉） • 标本采集：①血清②肺泡灌洗液

  8. 第三阶段：进行预实验： 1.实验动物及分组：清洁级健康雄性SD大鼠40只，体重200±20g（由西安交通大学动物实验中心提供）适应性饲养1周，按体重随机分成4组，每组10只。 • （1）正常对照组（简称A组） • （2）哮喘模型组（简称B组） • （3）必可酮气雾剂治疗组（简称C组） • （4）姜辛夏冲剂治疗组（简称D组）

  9. 2．实验药物及主要试剂 2.1 药物 • （1）姜辛夏冲剂（由陕中附院制剂室制备，每包含生药8g） • （2）必可酮气雾剂（Becotide）每掀含丙酸倍氯米松50μg（重庆葛兰素制药有限公司产品）

  10. 2.2 主要试剂 • （1）卵蛋白（OVA）和氢氧化铝（均选购美国Sigma公司产品） • （2）百白破杆菌疫苗（由咸阳市防疫站提供） 2.3 试剂盒 • （1）IL-4试剂盒（武汉博士德生物科技有限公司提供） • （2）IFN-γ、IL-5、IL-12试剂盒（上海西唐生物科技有限公司提供） • （3）IgE试剂盒（由大连泛邦化工技术开发有限公司提供）

  11. 3 .主要仪器 • （1）JWC-2医用超声雾化器（辽宁省鞍山无线电一厂出品） • （2）TDL-16c台式高速离心机（上海安亭科学仪器厂） • （3）3550型酶联免疫检测仪（美国BIO-RAD产品）

  12. 4 .大鼠模型制作及给药方法 4.1模型复制:（参考迟磊等报道的造模方法）模型组与各治疗组分别于第1天、第8天，每鼠两腹股沟、前足跖共4点分别皮下注射抗原液（含OVA100mg、百白破杆菌疫苗约0.5ml和氢氧化铝干粉100mg制成的混悬液）0.2ml同时腹腔注射0.2ml抗原液致敏；正常对照组以等量生理盐水代替致敏。第15天，每晚8-9时给予超声雾化吸入2%OVA 20min激发哮喘；正常对照组用等量生理盐水以同样方法雾化。观察大鼠反应，若出现呼吸急促、喘息、双肺闻及哮鸣音、躁动、甚则出现口唇、双眼、耳紫绀等改变即为造模成功。

  13. 4.2 给药 实验第15天开始激发后给药，1次/日，全过程共历时28天。（剂量依据文献折算） • （1）A组：每鼠以蒸馏水3ml灌胃； • （2）B组：每鼠以蒸馏水3ml灌胃。 • （3）C组：每鼠雾化吸入必可酮气雾剂1掀； • （4）D组：每鼠以姜辛夏冲剂4.6g/200g用蒸馏水溶化为3ml灌胃；

  14. 5 .标本采集与检测 • 5.1 标本采集: • （1）于末次激发后24h将大鼠行摘眼球取血凝固后分离，在4℃条件下，3000r/min离心10min,取上清液-20℃保存备用。 • （2）取血后，将大鼠脱颈处死，剪开颈部皮肤，顿性分离，暴露气管，在右主支气管上剪一小口，将圆头7号针头进针0.5～1.0cm,以“0”号手术线结扎固定，缓慢注入生理盐水（37℃）3ml,按摩肺脏30s后抽出，重复3次，每例收集肺泡灌洗液6～7ml（回收率＞85%），将肺泡灌洗液（BALF）注入离心管中，3000r/min离心15min，取上清液4ml分装，-30℃保存备用。 • （3）随后取肺组织植于甲醛中固定制成石蜡切片，以观察肺组织病理变化。

  15. 5.2 指标检测 • （1）一般情况：观察实验过程中各组大鼠的呼吸频率、精神、饮食、活动、排便、毛发等变化情况。 • （2）血清及BALF中IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-12、总IgE含量的测定：采用双抗夹心酶联免疫吸附法测定。（具体步骤严格按照试剂盒说明进行操作）

  16. 四、经费使用情况：

  17. 谢 谢

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