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医学检验实验教学中心. 实验项目 酶联免疫吸附试验. 实验目的. 通过临床标本 HBsAg 的检测，使学生掌握酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测抗原的原理、方法。 通过引导学生分析、讨论 HBsAg 的临床意义，培养学生分析和解决问题的能力。 通过介绍临床自动化仪器，开拓学生视野。. 酶联免疫吸附试验原理. 双抗体夹心法检测原理. 酶联免疫吸附试验原理. 竞争法检测原理. 酶联免疫吸附试验类型和原理. 改良竞争法检测原理. 酶联免疫吸附试验原理. 捕获法检测原理. 提出问题、学生思考. 1. 临床怀疑乙型肝炎病毒感染的病人，应该检测哪种免疫学指标？
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医学检验实验教学中心 实验项目 酶联免疫吸附试验
实验目的 • 通过临床标本HBsAg的检测，使学生掌握酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原的原理、方法。 • 通过引导学生分析、讨论HBsAg的临床意义，培养学生分析和解决问题的能力。 • 通过介绍临床自动化仪器，开拓学生视野。
酶联免疫吸附试验原理 双抗体夹心法检测原理
酶联免疫吸附试验原理 竞争法检测原理
酶联免疫吸附试验类型和原理 改良竞争法检测原理
酶联免疫吸附试验原理 捕获法检测原理
提出问题、学生思考 • 1.临床怀疑乙型肝炎病毒感染的病人，应该检测哪种免疫学指标？ • 如果采用ELISA，应该选择哪种类型的ELISA检测？
试剂与器材 • 试剂 • 1.酶标抗体:HRP-抗HBs • 2.抗HBs,待检血清,阳性和阴性对照血清 • 3洗涤液：Tris—HCL---Tween20 • 4辣根过氧化物酶底物液：TMB-过氧化氢尿素溶液 • 5终止液：H2SO4
试剂与器材 • 器材 • 酶标板微量反应板
试剂与器材 器材 酶免分析仪-样品架
操作方法 • 1 包被 • 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。
操作方法 • 1 包被 • 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。 →
操作方法 • 1 包被 • 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。
操作方法 • 2 洗涤 • 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。吸水纸拍干。
操作方法 • 3 加待检样品 • 各孔加待检血清0.1mL，同时做阳性对照，阴性对照，空白对照。37 ℃ 60分钟。 →
操作方法 • 3 加待检样品 • 各孔加待检血清0.1mL，同时做阳性对照，阴性对照，空白对照。37 ℃ 60分钟。 →
操作方法 • 4 洗涤 • 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。吸水纸拍干。
操作方法 • 5 加酶标抗体 • 各孔加HRP-抗HBs-IgG 0.1mL.37 ℃ 60分钟。 →
操作方法 • 6 洗涤 • 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。吸水纸拍干。
操作方法 • 7 加底物液 • 各孔加底物液0.1mL.置黑暗10-20分钟。 →
操作方法 • 8 终止反应 • 各孔加终止液0.05mL，终止反应。
结果判定 • 目测法 • 阳性孔呈桔黄色，阴性孔无色或极浅黄色
结果判定 • 比色法 • 用酶标分光光度计测A492nm，计算P/N值。 • P/N值：待检血清A492nm—空白对照A492nm/阴性对照A492nm—空白对照A492nm • P/N≥2.1,结果为阳性。否则为阴性。
讨论 • 方法评价 • 简便，敏感，特异。 • 临床意义 • HBsAg阳性可见于急性肝炎的潜伏期和急性期。 • 慢性活动性肝炎，重症肝炎，无症状携带者，肝硬化，原发性肝癌。 • 注意事项 • 注意RF的干扰。 • 标本应无溶血。
