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医学检验实验教学中心

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医学检验实验教学中心. 实验项目 酶联免疫吸附试验. 实验目的. 通过临床标本 HBsAg 的检测,使学生掌握酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测抗原的原理、方法。 通过引导学生分析、讨论 HBsAg 的临床意义,培养学生分析和解决问题的能力。 通过介绍临床自动化仪器,开拓学生视野。. 酶联免疫吸附试验原理. 双抗体夹心法检测原理. 酶联免疫吸附试验原理. 竞争法检测原理. 酶联免疫吸附试验类型和原理. 改良竞争法检测原理. 酶联免疫吸附试验原理. 捕获法检测原理. 提出问题、学生思考. 1. 临床怀疑乙型肝炎病毒感染的病人,应该检测哪种免疫学指标?

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slide1

医学检验实验教学中心

实验项目

酶联免疫吸附试验

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实验目的
  • 通过临床标本HBsAg的检测,使学生掌握酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原的原理、方法。
  • 通过引导学生分析、讨论HBsAg的临床意义,培养学生分析和解决问题的能力。
  • 通过介绍临床自动化仪器,开拓学生视野。
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酶联免疫吸附试验原理

双抗体夹心法检测原理

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酶联免疫吸附试验原理

竞争法检测原理

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酶联免疫吸附试验类型和原理

改良竞争法检测原理

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酶联免疫吸附试验原理

捕获法检测原理

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提出问题、学生思考
  • 1.临床怀疑乙型肝炎病毒感染的病人,应该检测哪种免疫学指标?
  • 如果采用ELISA,应该选择哪种类型的ELISA检测?
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试剂与器材
  • 试剂
  • 1.酶标抗体:HRP-抗HBs
  • 2.抗HBs,待检血清,阳性和阴性对照血清
  • 3洗涤液:Tris—HCL---Tween20
  • 4辣根过氧化物酶底物液:TMB-过氧化氢尿素溶液
  • 5终止液:H2SO4
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试剂与器材
  • 器材
  • 酶标板微量反应板
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试剂与器材

器材

酶免分析仪-样品架

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操作方法
  • 1 包被
  • 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。
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操作方法
  • 1 包被
  • 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。

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操作方法
  • 1 包被
  • 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24小时。
slide14
操作方法
  • 2 洗涤
  • 弃去空中液体,洗涤液洗3次,每次1分钟。吸水纸拍干。
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操作方法
  • 3 加待检样品
  • 各孔加待检血清0.1mL,同时做阳性对照,阴性对照,空白对照。37 ℃ 60分钟。

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操作方法
  • 3 加待检样品
  • 各孔加待检血清0.1mL,同时做阳性对照,阴性对照,空白对照。37 ℃ 60分钟。

slide17
操作方法
  • 4 洗涤
  • 弃去空中液体,洗涤液洗3次,每次1分钟。吸水纸拍干。
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操作方法
  • 5 加酶标抗体
  • 各孔加HRP-抗HBs-IgG 0.1mL.37 ℃ 60分钟。

slide19
操作方法
  • 6 洗涤
  • 弃去空中液体,洗涤液洗3次,每次1分钟。吸水纸拍干。
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操作方法
  • 7 加底物液
  • 各孔加底物液0.1mL.置黑暗10-20分钟。

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操作方法
  • 8 终止反应
  • 各孔加终止液0.05mL,终止反应。
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结果判定
  • 目测法
  • 阳性孔呈桔黄色,阴性孔无色或极浅黄色
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结果判定
  • 比色法
  • 用酶标分光光度计测A492nm,计算P/N值。
  • P/N值:待检血清A492nm—空白对照A492nm/阴性对照A492nm—空白对照A492nm
  • P/N≥2.1,结果为阳性。否则为阴性。
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讨论
  • 方法评价
  • 简便,敏感,特异。
  • 临床意义
  • HBsAg阳性可见于急性肝炎的潜伏期和急性期。
  • 慢性活动性肝炎,重症肝炎,无症状携带者,肝硬化,原发性肝癌。
  • 注意事项
  • 注意RF的干扰。
  • 标本应无溶血。