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高效液相色谱 检查 十一酸睾酮其他甾体

高效液相色谱 检查 十一酸睾酮其他甾体. 何伟康 陈忠坚. 过程. 查资料（药典，文献，药物分析及仪器分析课本等）. 进行讨论，确定方法，制定仪器清单. 实验方案进一步修改. 实验. 成果. 查资料. 药典 药物的理化性质，检查方法及具体操作 网络 结构式，功效及一些产品名 文献 同类药物高效液相色谱法的使用情况 分析化学和药物分析教材 高效液相色谱法. 实验方案. 主成分自身对照法 （无杂质对照品）

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高效液相色谱 检查 十一酸睾酮其他甾体

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Presentation Transcript

  1. 高效液相色谱检查十一酸睾酮其他甾体 何伟康 陈忠坚

  2. 过程 查资料（药典，文献，药物分析及仪器分析课本等） 进行讨论，确定方法，制定仪器清单 实验方案进一步修改 实验 成果

  3. 查资料 • 药典 药物的理化性质，检查方法及具体操作 • 网络 结构式，功效及一些产品名 • 文献 同类药物高效液相色谱法的使用情况 • 分析化学和药物分析教材 高效液相色谱法

  4. 实验方案 • 主成分自身对照法（无杂质对照品） • 将供试品稀释成与杂质限度相当的浓度，作为对照溶液。分别取供品试溶液和对照溶液进样，计算供试品溶液色谱图上各杂质峰面积总和，与对照溶液主成分峰面积比较，确定杂质是否超过限量。 • 供试品溶液配制 • 取本品约0.1g，精密称定，加入流动相约20ml，溶解，定容至50ml容量瓶（制成每1ml中含2mg的供试品溶液）。 • 自身对照品溶液配制 • 精密量取供试品溶液1ml至50ml容量瓶，定容（每1ml中含0.04mg）。

  5. 实验清单 • 仪器： • 高效液相色谱仪，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，（柱长？） • 乙腈－异丙醇－水（40:40:20）为流动相；检测温度室温，检测波长为240nm。（灵敏度？流速？） • 50ml容量瓶×2 1ml移液管 电子天平 小漏斗 250ml 烧杯 50ml量筒 滤纸 洗耳球

  6. 方案修改 • 供试品溶液 2mg ∕1ml 0.5mg∕1ml • 自身对照溶液 0.04 mg ∕1ml 0.01mg／1ml • 色谱条件的确定： • 色谱柱：Agilent C185um（150×4.6mm） • 流动相的确定：？ • 流速：1.0ml／min • 灵敏度：0.01档

  7. 溶液配置及仪器操作 供试品溶液配置：0.5mg/1ml 精密称定50.0mg 乙腈定容至10ml 移液管移取1.0ml 流动相定容至10ml（乙腈-水=75：25） 自身对照品溶液配制：0.01mg/ml 移液管移取供试品1.0ml 乙腈溶液定容至50.0ml（乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至100ml）

  8. 液相色谱仪器操作 • 开始：装柱 检漏 甲醇冲洗0.5h流动相冲洗0.5h设定参数 待基线稳定后进样 • 结束：用冲柱水冲洗1h 纯甲醇冲洗1h 收好柱子。

  9. 药典方法 流动相 乙腈-异丙醇-水＝40：40：20下色谱图 主峰 R:1.960 T: 1.258 n:9443

  10. 思考： • 1.主成分峰与杂质的分离度不够（1.960） • 2.主成分出峰时间太长（21.538min） 如何改变条件呢？ 流动相配比

  11. 乙腈-异丙醇-水（90：5：5） R: 1.182 T: 1.329 n: 10321

  12. 乙腈：异丙醇：水（85：10：5） R:3.709 T: 1.834 n: 9309

  13. 乙腈：异丙醇：水（80：15：5） R: 1.591 T: 1.732 n:10495

  14. 第二次思考： • 乙腈价格昂贵，毒性大。 • 而甲醇粘度小，柱压低，价格便宜，适用范围广，常用于色谱分析的流动相，激素类药物中较常用。 • 药典为什么不用甲醇代替乙腈呢？

  15. 甲醇-异丙醇-水=90：5：5 R: 1.225 T: 1.338 n: 8099

  16. 甲醇-异丙醇-水=80：15：5 R：1.208 T : 1.334 n:8564

  17. 结论 甲醇替代乙腈后分离度较低，柱效有所下降，所以在实验中使用乙腈较为合适。

  18. 选取流动相，进行杂质限量检查。 • 乙腈-异丙醇-水=80：15：5 • 1.进溶剂 • 2.进低浓度对照溶液 • 3.进高浓度供试品溶液

  19. 溶剂峰

  20. 高浓度（0.5mg／ml） 低浓度0.01mg／ml

  21. 计算及结论 自身对照溶液主峰峰面积：1691935 样品溶液杂质峰总峰面积：666831 样品溶液杂质峰总峰面积＜自身对照溶液主峰 峰面积 即杂质含量＜2.0％，符合规定。

  22. 心得： • 药典规定的方法可能不实用，需经具体的试验验证 • HPLC法的关键是色谱条件的确定 • 了解实验中常用的仪器和溶剂 • 做实验要又有耐心和恒心，操作要细致

  23. Thankyou

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