LE MILIEU HUGH ET LEIFSON : Recherche de la voie d’attaque du glucose

1. LE MILIEU HUGH ET LEIFSON : Recherche de la voie d’attaque du glucose 1. Intérêt • Les bactéries peuvent attaquer le glucose par : • VOIE OXYDATIVE : le glucose est utilisé uniquement en présence de dioxygène (faible libération d’acides) • VOIE FERMENTATIVE : le glucose est utilisé : • en absence et en présence de dioxygène (forte libération d’acides) • ou seulement en absence de dioxygène (forte libération d’acides) 2. Composition • Ce milieu contient (entre autre) : • une base nutritive avec peu de peptones : apport de facteurs de croissance, de source de carbone d’azote, … • le bleu de bromothymol : indicateur de pH • du glucose stérile à 1% (à ajouter juste avant l’ensemencement) 3. Principe (cf. fiche technique)

2. Ajouter stérilement le glucose pour une Cfinale = 1 % puis refroidir sous l’eau froide Incuber à l’étuve 24h à 37 °C Régénerer le tube 20 min à 100 °C Ensemencer avec une piqûre centrale à l’aide du fil droit LE MILIEU HUGH ET LEIFSON : Recherche de la voie d’attaque du glucose 4. Technique d’ensemencement

3. LE MILIEU HUGH ET LEIFSON : Recherche de la voie d’attaque du glucose 5. Lecture (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube) Acidification révélée par le virage de l’indicateur de pH uniquement en présence de dioxygène : ATTAQUE DU GLUCOSE UNIQUEMENT EN PRESENCE DE DIOXYGENE Acidification révélée par le virage de l’indicateur de pH uniquement en absence de dioxygène : ATTAQUE DU GLUCOSE UNIQUEMENT EN ABSENCE DE DIOXYGENE LES BACTERIES DEGRADENT LE GLUCOSE PAR VOIE OXYDATIVE LES BACTERIES DEGRADENT LE GLUCOSE PAR VOIE FERMENTATIVE

4. LE MILIEU HUGH ET LEIFSON : Recherche de la voie d’attaque du glucose 5. Lecture (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube) Acidification révélée par le virage de l’indicateur de pH en présence et en absence de dioxygène : ATTAQUE DU GLUCOSE EN ABSENCE (ET EVENTUELLEMENT EN PRESENCE) DE DIOXYGENE Alcalinisation révélée par le virage de l’indicateur de pH en présence de dioxygène : PAS D’ATTAQUE DU GLUCOSE MAIS UTILISATION DES PEPTONES COMME SOURCE D’ENERGIE ET DE CARBONE LES BACTERIES DEGRADENT LE GLUCOSE PAR VOIE FERMENTATIVE (VOIE OXYDATIVE NON EXCLUE) BACTERIES INERTES VIS-A-VIS DU GLUCOSE