MIN - Forschungsergebnisse beim Prostatakarzinom

1. MIN - Forschungsergebnisse beim Prostatakarzinom • MIN: Indikator für genomische Instabilität • Marker hoher MIN - Raten ( MIN hot spots ): • - D10S221 auf 10q23-24: 53% (9/17) • - D10S109 auf 10q21 : 37% (7/17) • - D16S310 auf 16q.. : 8,3% (4/48) • - D16S402 auf 16q.. : 8,3% (4/48), ( Lacombe et al. Cancer 69, 110-113:1996 ) • AI (allelische Imbalance ) geprüfte Marker: • - D8S261 auf 8q22 : 60% ( 55 Proben, 135 Marker ) • - LPL auf 8q22 : 64% • - D8S258 auf 8q22 : 61%, ( Cunningham/ Shan et al. Cancer Res. 56, 4475-4482 ) • - kein Tumor mit weitgestreuter MIN: nur 0,003%( 22 von 5803 Genotypen) • - 8q22: Region eines putativen TSG

2. MIN in humanen soliden Tumoren modifiziert nach Arzimanoglou et al. Cancer 82, 1808-20: 1998

3. MIN - Forschungsergebnisse beim Prostatakarzinom • MIN von Dinukleotiden höher als bei Tri-, Tetranukleotiden • Dinukleotid - Mikrosatelliten als Monitore geeigneter für zugrunde liegende genomische Instabilitäten ( Perinchery et al.Int.J.Oncology 16,1203-1209: 2000 ) • keine Korrelation zwischen MIN & klinisch-pathologischen Parametern wie Gleason score, Staging, Alter • MIN bei “Krebstodesfällen” häufiger als bei Stadium B/C • - ( MIN steigt bei PCa - Progression ) ( Suzuki et al.Jpn.J.Cancer Res.86, 956-961:1995) • verschiedene Tumorareale nicht auf MIN geprüft • Nutzung der MIN - Analyse für molekulare Diagnostik in wenigsten zwei Tumortypen belegt ( HNPCC & sporadisches Blasenkarzinom ) • weist auf potentielle Rolle von MIN in der Diagnose/ Prognose anderer humaner solider Tumoren hin - PCa!

4. Promotionsebenen • 1. Überblicksmäßige MIN - Analyse genomischer DNA • Vergleich von Normal/ Tumorgewebe von PCa ( n=200 ) • ( Vergleich von Normal/ Tumorgwebe von Nierenkarzinomen, n=200 ) • 2. MIN - Analyse schon etablierter MIN - Marker für PCa • ( 10q23-24, 10q21, 16q.. ), Vergleich mit Überblicksmethode • 3. RNA - Expressionsanalyse von MIN - Markern für PCa ( n=200 ) • Hypothese: RNA - Expression von Chromosomenabschnitten mit MIN - Markern ist erhöht 10q21, 16q..

5. 1.Überblicksanalyse • Isolation genomischer DNA von PCa - Proben ( n=200 ) • Alu - Verdau ( Co - Existenz: Alu - Repeats/ Mikrosatelliten, Spaltstelle für Restriktionsendonuklease Alu 1) • AP - PCR ( arbitrary primed ),Primer am 5’ Ende mit TEXAS RED markiert • Laser - Sequenzierung: Detektion markierter Fragmente im 6%igen PAA - Gel, Fragmentlängenbestimmung mittels Software “FRAGMENTOR” Peakmuster von Normal/ Tumorgewebe vergleichen • ( zu erwarten: Peakverschiebungen ) • Ziel: Etablierung eines allgemeinen Screeningverfahrens für PCa

6. 2.MIN - Analyse einzelner Marker • MIN - Analyse wie bei Überblicksmethode • - aber nun definierte Peaks für jeweiligen Marker (10q23-24,10q21..) • Vergleich/ Zuordnung mit Peakmuster der Überblicksmethode: • - Extraktion neuer Peaks ( Marker ) möglich

7. 3.RNA - Expressionsanalyse • Isolation von RNA ( n=200 ) • mittels LIGHT CYCLER - PCR erfolgt Beurteilung der Transkriptmenge von mRNA • Vergleich Normal/ Tumorgewebe- Bestättigung der Hypothese ? • - “erhöhte RNA - Expression von Chromosomenabschnitten mit • MIN - Markern” • Ergebnisse mit follow up der Patienten in Bezug setzen, bedingt Zugriff zum Krebsregister: Hausarzt/ Urologe könnte Auskunft über postoperativen Verlauf geben: Rezidiv...