研究性实验一翅果油树花粉生活力　　及贮藏特性研究

研究性实验一翅果油树花粉生活 力　　及贮藏特性研究翅果油树（Elaeagnus mollis）属胡颓子科，胡颓子属，落叶乔木或灌木，为我国特有植物。属国家二级保护珍稀植物。目前仅在陕西和山西两省有分布，集中分布于山西吕梁山南端和中条山东段。　　　　花粉生活力的高低直接影响植物授粉、受精乃至坐果。对翅果油树花粉进行生活力的测定和比较，并对其测定方法进行探讨，以期获得适合翅果油树花粉离体萌发培养体系，为花粉活力测定提供一个高效、快速、简便的方法，并可为从生殖角度探讨植物的致濒机制提供一定的科学依据。

一、实验目的 • 学习用染色法和离体萌发法测定花粉生活力。 • 了解不同贮藏条件对花粉生活力的影响。

二、器材和试剂 • 实验材料与方法：于4 月下旬（花粉近成熟期）从野外采集翅果油树花枝插入水中, 迅速带回实验室, 待花开放时用镊子将花药取下, 分别放置于室温20 ℃、4 ℃、- 4 ℃的条件下保存。 • 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、滤纸、纱布、烧杯、滴管、培养皿。 • 实验试剂：醋酸洋红染色液、 0.2 % TTC 染色液、I2-KI溶液、蔗糖、硼酸、琼脂。

三、实验内容 （一）染色法测定花粉生活力 • 醋酸洋红染色法 • TTC 染色法 • I2-KI 染色法（二）离体萌发法测定花粉生活力

1. 醋酸洋红染色法测定花粉生活力 取少许花粉于载玻片上，加1～2 滴醋酸洋红溶液, 室温20 ℃下放置10 min，然后镜检，每个处理取5个视野，每个视野不少于30粒花粉，统计花粉的生活力。花粉生活力以花粉染色率为指标。凡是呈深红色的花粉粒是有生活力的，而呈淡红色的部分失去了生活力，无色空瘪、畸形的是死的和不育的花粉粒。

2. TTC 染色法测定花粉生活力 取少数花粉置于载玻片上，加1～2 滴TTC 溶液, 室温20℃下放置10 min, 然后镜检，每个处理取5个视野，每个视野不少于30 粒花粉，统计花粉的生活力。根据着色情况来判断花粉的生活力。凡是染成红色的花粉，其生活力为强，淡红的次之，无色的为不具活力的花粉或不育花粉。

3. I2-KI 染色法测定花粉生活力 取少数花粉置于载玻片上，加1～2滴I2-KI染液，室温20℃下放置10min，然后镜检(10×10倍)。每个处理取5个视野，每个视野不少于30粒花粉，统计花粉的生活力。凡是呈蓝黑色表明具较强活力，而呈淡蓝色则活力较弱，无色、畸形的为死亡和不育的花粉粒。

4. 离体萌发法测定花粉生活力 在一定的温度和培养条件下，根据花粉离体培养时的萌发率判定其生活力。取不同处理的花粉在蔗糖和硼酸不同浓度组合的固体培养基上培养萌发，不同培养基的组合见表1，然后镜检，统计花粉萌发的百分率，并选取10 个有代表性的花粉管，用测微尺测其长度，求平均值。

表1　培养基的组成

讨论 • 三种染色方法测定花粉生活力，哪种方法最可靠？ • 不同蔗糖浓度和硼酸浓度下所测花粉生活力结果差异如何，可否筛选出两种物质的最适浓度组合？ • 不同贮藏条件如何影响花粉生活力？ • 花粉贮藏在实际生产中有何意义？ • 你认为翅果油树的花粉生活力是高还是低？它与翅果油树的“千花一果”现象之间有无因果关系？

作业 1. 查阅相关资料，撰写研究性实验论文，论文格式参照《山西大学学报（自然科学版）》。

研究性实验一 翅果油树花粉生活 力 及贮藏特性研究