种子活力的快速测定

1. 种子活力的快速测定

2. 实验目的 • 了解测定种子活力和发芽率的方法。

3. 溴麝香草酚兰法（BTB法） • 实验原理： 凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的O2,放出CO2, CO2溶于水成为H2CO3。H2CO3解离为H+和HCO3_,使得种胚周围环境的酸度增加。用溴麝香草酚兰（BTB）来测定酸度的改变。BTB的变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色中间经过绿色（变色点为H7.1）。色泽差异显著，易于观察。

4. 材料：小麦种子 仪器：恒温箱、培养皿、天平、烧杯、镊子、漏斗、滤纸 试剂： 0.1%BTB溶液：称取BTB0.1g,溶解于煮沸过的自来水中（因配置指示剂的应为微碱性，使溶液呈蓝色或蓝绿色，而蒸馏水为微酸性不宜用），然后用滤纸去残渣。滤液若呈黄色，可加数滴稀氨水，使之变为蓝色或蓝绿色。此液可长时期贮存于棕色瓶中。

5. 1%BTB琼脂凝胶：取0.1%BTB溶液100ml至于烧瓶中，另将1g琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒入数个干净的培养皿中，使成为一均匀的薄层冷却后备用。

6. 方法与步骤： 1、 浸种：为了增强种胚的呼吸强度，使BTB反应迅速而鲜明,必须预先充分浸种。取小麦种子50粒，在30—50oC条件下，浸种3—5小时，

7. 2、 播种：将充分吸胀的种子整齐排列于培养皿的中央。种子的间距应大些，使各种子的胚部相互离开（直径10厘米的培养皿不宜超过50粒）。务必使种子的胚部都向下，腹沟向上，当凝胶温度降至40oC时，沿玻棒仔细倒入各种子之间，成一均匀薄层（0.2-0.4cm为宜），使种胚埋没与胶层之中。

8. 3、 观察及计数：将培养皿放于30—50oC条件下小麦1-2小时，就可对光观察，并初次计数。（观察时要从透射光下看）。在蓝色背景下，凡局限于种胚附近，出现较深的黄晕色圈的是活种子，无黄晕色圈的可能是死种子。结果计数。 4、 用沸水杀死吸涨的种子，与正常种子进行对比观察，方法同上。 5、 BTB计数后，可将小麦种子种胚翻转向上，数日后，测定其真实发芽率。

10. 红墨水染色法 原理： 凡生活细胞的原生质膜具选择性吸收能力，而死的种子细胞原生质膜丧失这种能力，于是染料便进入死细胞而使胚着色。

11. 仪器、材料与试剂： 培养皿、镊子、刀片、5%红墨水（红墨水5ml+95ml自来水）、玉米种子。

12. 方法与步骤： 1、 浸种：（同BTB法） 2、 染色：取已吸胀的种子200粒，沿胚和中线切为两半，将一半置于培养皿中，加入5%红墨水（以淹没种子为度），染色5-10分钟，（温度高时时间可短些）。 染色后，倒去红墨水液，用水冲洗多次，至冲洗液为无色止。检查种子死活。结果凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。可用沸水杀死的种子为对照观察。 3、 计数种胚不着色或着色浅的种子数，算出其发芽率。

13. 活种子 死种子

14. 纸上荧光法 原理： 凡有生活力的种子和已经死亡的种子，它们的种皮对物质的透性是不同的，而许多植物的种子中又都含有荧光物质。利用对荧光物质的不同透性来区分种子的死活，方法简单，特别是对十字花科植物的种子，尤为适用。

15. 仪器、材料与试剂： 紫外分析仪、培养皿、镊子、滤纸（无荧光）、油菜种子。

16. 方法与步骤： 1、 将完整无损的种子（油菜、白菜等十字花科植物的种子）100粒，于25—30oC水中浸泡2-3小时。 2、 把已吸胀的种子，以3-5mm间隔整齐的排列在培养皿中的湿润滤纸上，滤纸上水分不能太多，以免荧光物质流散。培养皿可以不必加盖，放置1.5-2小时取出种子，将滤纸阴干。取出的种子仍按原来顺序排列在另一皿中（以备验证）

17. 3、 将滤纸置于紫外分析仪下进行观察，观察如能在暗室中进行，效果更好。 4、 结果：有的放过种子的位置上可见一荧光圈。如要确证者是死种子，可将这些种子拣出来集中在一个培养皿中，而让不产生荧光的种子留在另一培养皿中。维持合适温度，让其自然发芽。

18. 死种子

19. 活种子