slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Az izomdystrophiák molekuláris genetikai vizsgálata PowerPoint Presentation
Download Presentation
Az izomdystrophiák molekuláris genetikai vizsgálata

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 15

Az izomdystrophiák molekuláris genetikai vizsgálata - PowerPoint PPT Presentation


  • 142 Views
  • Uploaded on

Az izomdystrophiák molekuláris genetikai vizsgálata. Pikó H., Balog J. Herczegfalvi Á., Mayer P., Mechler F., Horváth R., Karcagi V. Fodor József Országos Közegészségügyi Központ Bethesda Gyermekkórház, DEOE Neurológiai Klinika, Hódmezővásárhelyi Kórház, Jahn-F. Dél-pesti Kórház.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Az izomdystrophiák molekuláris genetikai vizsgálata' - sebastian


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1

Az izomdystrophiák molekuláris genetikai vizsgálata

Pikó H., Balog J. Herczegfalvi Á., Mayer P., Mechler F., Horváth R., Karcagi V.

Fodor József Országos Közegészségügyi Központ

Bethesda Gyermekkórház, DEOE Neurológiai Klinika, Hódmezővásárhelyi Kórház, Jahn-F. Dél-pesti Kórház

slide2

Izomdystrophiák

  • Duchenne/Becker izomdystrophia (DMD/BMD)
  • Facioscapulohumeralis izomdystrophia (FSHD)
slide3

Általános jellemzők, klinikai tünetek

  • Előfordulási gyakoriság - DMD 1:3500, BMD 1:30000
  • X kromoszómához kötött recesszív öröklődésmenet
  • A betegség kezdete 2 éves korra tehető, fokozatos progresszióval
  • Az elhalálozás ideje 20-25 éves korban
  • A Becker típus esetén enyhébbek a tünetek, nincs korai halál
slide4

A betegség genetikai háttere, pathomechanizmusa

  • A dystrophin gén (Xp21) 2.5 Mb méretű, 79 exont tartalmaz és 14 kb méretű mRNS-t kódol
  • A géntermék a dystrophin fehérje (427 kDa), amely sarcolemmális lokalizációt mutat a dystrophin- asszociált glycoprotein komplex részeként
  • A DMD esetén a dystrophin teljes hiánya, BMD esetén csökkent mennyisége mutatható ki
slide5

A betegség kialakulásában szerepet játszó géndefektusok

  • Deléciók (60%), hot-spot régiók a gén proximalis és distalis részén
  • Duplikációk (5%)
  • Pontmutációk (35%)
  • Minden harmadik esetben új mutáció alakul ki
  • A mutáció következményei (frame-shift hipotézis)

„in-frame” mutáció - BMD fenotípus

„out of frame” mutáció - DMD fenotípus

slide6

Molekuláris diagnosztikai vizsgálatok

  • Multiplex PCR reakció – 2 x 9 exon vizsgálata egyidejüleg
  • Southern blot analízis – cDNS próbákkal ( XJ10, 7b8, 30.2, 30.1, 47.4, 60.1)
  • Immunohistochemia
  • Western blot technika – fehérje analízis
slide8

Southern hibridizáció XJ10 cDNS próbával

(HindIII és BglII emésztés)

slide9

Eredmények

  • Eddig 100 betegnél végeztük el a multiplex PCR analízist, amely alapján a betegek 57%-ában deléciót mutattunk ki
  • Négy esetben végeztünk prenatális vizsgálatot
  • A feltételezett hordozó anyák és leánytestvérek (31 fő) cDNS vizsgálata során 18 esetben bizonyítottuk a hordozósági státuszt
  • Az új módszerek bevezetése a DMD/BMD betegség molekuláris genetikai vizsgálatában lehetőséget biztosít az alábbi célok megvalósításához:

deléciók méretének pontos meghatározása

de novo mutációs esetek azonosítása

hordozósági státusz vizsgálata

prenatális vizsgálatok felajánlása

slide10

Az FSHD molekuláris háttére (1.)

  • Öröklődésmenete autoszómális domináns, de nem teljes penetranciával (95%-os)
  • A 4qés10qkromoszómák szubtelomerikus régiójában található D4Z4 ismétlődő szekvenciák
  • A betegekben a 4q35régióban DNS átrendeződés történik, a D4Z4 szekvenciák száma csökken
  • Eltérő restrikciós térkép:
  • - a 4q35 régióban csak egy D4Z4 tartalmaz BlnI hasítási helyet
  • - a 10q26 régióban minden egyes D4Z4 tartalmaz BlnI hasítási helyet
slide11

Az FSHD molekuláris háttére (2.)

  • A p13E-11 polimorf próba detektálja EcoRI emésztés után:
    • 4q35 38kb-300kb (egészséges), 10kb-38kb (beteg)
    • 10q26 20kb-320kb
  • Komplikáló tényező: szubtelomerikus kicserélődések a 4q35 és 10q26 régió között (a populáció 20%-ában)
    • - PFGE alkalmazása ill. dózis teszt
  • EcoRI fragmentum mérete korrelál a betegség súlyosságával és a tünetek megjelenésénekidőpontjával
  • De novo mutációk is→ juvenilis formák
slide12

Southern analízis értékelése

  • <38kb BlnI rezisztens fragmentum
  • FSHD
  • <38kb BlnI szenzitív fragmentum
  • dózis teszt
  • 10-es típusú
  • repeatek túlsúlyban FSHD
  • 4-es típusú nem FSHD
  • repeatek túlsúlyban
slide14

FSHD genotípus ikrekben

38 kb

8.5 kb

Súlyos, infantilis típus, de novo mutációval, 1 D4Z4 repeat elem maradt

4q35: p13E-11 próbával a betegek EcoRI fragmentuma <38 kb, BlnIrez.