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临床医学五年制 实验诊断学

临床医学五年制 实验诊断学. 续 薇 教 授 博士生导师. 第三节 血细胞形态特征. 一、血细胞发育过程中形态演变的一般规律. 血细胞发育规律 （1）细胞体积 胞体逐渐由大变小 （2）细胞质 ①量 ②颜色 ③颗粒 （3）细胞核 ①大小②染色质③核仁④核膜 （4）细胞核/细胞质 由大变小. 红细胞的细胞成熟过程（其他血细胞的成熟过程基本相同）. 血细胞发育一般规律. 二、血细胞的正常形态学特征. 骨髓中各系血细胞形态特征. 三、血细胞的细胞化学染色.

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Presentation Transcript

  1. 临床医学五年制实验诊断学 续 薇 教 授 博士生导师

  2. 第三节 血细胞形态特征

  3. 一、血细胞发育过程中形态演变的一般规律 • 血细胞发育规律 （1）细胞体积 胞体逐渐由大变小 （2）细胞质 ①量 ②颜色 ③颗粒 （3）细胞核 ①大小②染色质③核仁④核膜 （4）细胞核/细胞质 由大变小

  4. 红细胞的细胞成熟过程（其他血细胞的成熟过程基本相同）红细胞的细胞成熟过程（其他血细胞的成熟过程基本相同）

  5. 血细胞发育一般规律

  6. 二、血细胞的正常形态学特征

  7. 骨髓中各系血细胞形态特征

  8. 三、血细胞的细胞化学染色 • （一）过氧化物酶染色(POX) （二）苏三黑B染色（SB） • （三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP) （四）酸性磷酸酶染色(ACP) （五）特异性酯酶染色(SE) • （六）非特异性酯酶染色(NSE) • （七）糖原染色(PAS) • （八）铁染色

  9. 1、过氧化物酶染色（POX） 原 理 POX（细胞中） H2O2 O2 （试剂） 联苯胺 联苯胺蓝 + 亚硝基铁氰化钠 蓝黑色颗粒 （无色） （胞浆中） （蓝色）

  10. 临床意义 • 用于鉴别：急性白血病类型 急性淋巴细胞白血病（阴性） 急性粒细胞白血病 （强阳性） 急性单核细胞白血病（弱阳性或阴性）

  11. POX染色

  12. 3、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 原 理 偶氮偶联法 NAP（细胞内） α磷酸萘酚钠 灰黑色沉淀 α萘酚 重氮盐 + （胞浆） • 钙钴法 NAP（细胞内） 硝酸钙 β甘油磷酸钠 磷酸钠 + 硝酸钴 不溶性棕黑色沉淀 硫化胺 （胞浆）

  13. 临床意义 • 正常人：积分＜80（分） • 鉴别慢性粒细胞白血病与类白血病 • 增高：急性化脓菌感染、类白血病反应、 急性淋巴细胞白血病；再生障碍性贫血。 • 减低：急性粒细胞白血病；病毒感染、阵发性睡眠性贫血。

  14. 6、α醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE） 原 理 非特异性酯酶（细胞中） α醋酸萘酚 α萘酚 + 重氮染料 不溶性有色沉淀 （试剂） （试剂） （胞浆中）

  15. 临床意义 • 用于鉴别： 急性单核细胞白血病（强阳性） 急性粒细胞白血病（阴性或弱阳性）

  16. 7、糖原染色（PAS） 原 理 过碘酸（试剂） 糖原 醛基 品红 紫红色化合物 + （细胞中） （试剂） （胞浆中）

  17. 临床意义 • 用于三种白血病类型鉴别 • 急性粒细胞白血病（阴性或弱阳性） • 急性淋巴细胞白血病（阳性） • 急性单核细胞白血病（阳性）

  18. 8、铁染色 原 理 铁 + HCL + 低铁氰化钾 铁氰化铁沉淀 （细胞内外） （普鲁士蓝反应）

  19. 临床意义 • 诊断缺铁性贫血 • 指导铁剂治疗

  20. 四、细胞免疫分型 （一）检测方法 • 免疫荧光法 • 免疫酶染色法： APAAP（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶）法 PAP（过氧化物酶抗过氧化物酶）法 ABC（亲和素-生物素-酶复合物）法

  21. 1、流式细胞仪计数 • 原理：将标本细胞用荧光标记制备成悬液，使荧光标记的细胞一个个地通过仪器的毛细管，分别辨认细胞形态大小和荧光特征，称为荧光活化细胞分选法。其优势是可快速地对大量细胞进行多参数定量分析。

  22. 2、碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶桥联酶标法(APAAP)2、碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶桥联酶标法(APAAP) • 原理： （1）特异性第一抗体（鼠抗人）单抗与标 本内的细胞抗原相结合、 （2）用第二（桥）抗体（兔抗鼠）与细胞抗原结合的第一抗体结合、 （3）底物经酶作用、染色、脱水、透明、封片、镜检。

  23. 3、生物素－亲合素免疫细胞化学技术（ABC） • 原理： （1）第一抗体为未标记的特异性抗体，能 与待测抗原结合。 （2）第二抗体为生物素化的桥抗体，能与第一抗体结合。 （3）第三抗体是结合了过氧化物酶的亲合素复合物（ABC）， （4）底物、显色、脱水、透明、封片、镜检。

  24. （二）细胞免疫分型的临床应用 • CD是淋巴细胞和其他白细胞表达的表面抗 原分化群，即cluster of differentiation简称，1993年国际会议统一命名，现已有CD1-CD78。

  25. 识别不同系列的细胞 • 髓系：CD33，CD34 ，CD13，CD14 • 淋巴：CD4，CD8，CD10，CD19 • 巨核、血小板：CD41，CD42 • 红细胞：血型糖蛋白A/B

  26. 2. 识别不同的淋巴细胞： • T细胞：CD4，CD8，CD2，CD3 • B细胞：CD19，CD20，CD22

  27. 3. 识别T细胞亚群 • 全T细胞： CD4 ，CD8 • TH细胞: CD4+,CD8- • TS细胞: CD4-,CD8+ • TSI细胞: 诱导抑制T细胞 CD29低密 度表达 • THI细胞：诱导辅助T细胞 CD29高密度表达

  28. 4.识别不同分化阶段的细胞 • 如造血祖细胞标志、T、B淋巴细胞不同分化阶段 5.识别不同功能状态的细胞 • 如记忆T细胞，活化T细胞

  29. 6.对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究6.对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究 7.各种白血病细胞的免疫表型分析 8.白血病微小残留病的检测

  30. （三）急性白血病免疫表型特点 1. ALL与AML细胞免疫表型特点 注：少数AML（<10%）CD7可为阳性；少数AML（M1型）TdT可为阳性；少数T-ALL（<10%）可为HLA-DR表达。

  31. 2.急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型特点

  32. 3. 急性髓细胞白血病的免疫学分类

  33. 五、细胞遗传学分析 （一）染色体检查方法 （二）染色体分析 1.染色体命名 2.核型分析及其书写 3.染色体畸变 （三）临床常见白血病的染色体改变

  34. 急性白血病常见的染色体异常

  35. 急性白血病常见的染色体异常

  36. 要 点： • 1、血细胞发育规律 • 2、正常血细胞形态特征 • 3、常用细胞化学染色的方法及临床意义

  37. 谢谢

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