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实验三 DIC 的造病和实验室检测

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  1. 实验三 DIC的造病和实验室检测

  2. 【目的要求】 1.通过DIC动物模型的复制,了解DIC的病因及发 病机制。 2.观察急性DIC各期血液凝固性的变化,并分析这 些变化的原因及其病理意义。 3.了解DIC的诊断标准,熟悉常用的实验室检查指 标及其意义。

  3. 【实验动物】 家兔,体重 1.5~2.0 kg。 【药品与器材】 1%普鲁卡因,血小板稀释液,兔脑匀浆,4%肝素。 兔手术台,显微镜,离心机,721 型分光光度计,水浴箱、手术器械,微量加样器,动脉插血小板计数板,注射器、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管等。

  4. 【实验步骤】 1.称重、麻醉和固定家兔 1%普鲁卡因作颈部局部麻醉,颈前正中切口。分 离家兔一侧颈总动脉,动脉插管,备放血用。 2.取肝素抗凝管和枸橼酸钠抗凝管各3个,分别做 好标记。

  5. 3. 正常血标本各项指标的的制备 ■用玻璃纸,接兔血1滴,并立即取10l血放入2.0 ml血小板稀释液内充分混匀,作血小板计数。 ■分别在肝素抗凝管内放入兔血1.5ml,在枸橼酸钠 抗凝管放入兔血3.5ml。迅速混匀后,离心、取上 层血浆,另置入干净小试管,并加上标记。 ( 肝素抗凝所制备的血浆用以测定Fbg;枸橼酸钠 抗凝所制备的血浆用以测定PT和3P试验)

  6. 4. DIC的造病:取兔脑匀浆,以8ml/Kg体重剂量, 经耳缘静脉以1ml/min的速度匀速推注。 5. 兔脑匀浆注射完毕后,立即采集血样和30或45min 后采血样一次。进行BPC,PT测定,3P试验和 Fbg含量的测定。 【附录】 1. 血小板计数(BPC) 将试管内已稀释血液滴到计数板上静置10min, 用高倍镜计数。准确数出计数板中央l大方格的血 小板数,乘以2000就是每立方毫米的血小板数。

  7. 2.凝血酶原时间(Prothrombin Time简称PT) ■取被检血浆0.lml,置于试管内,37℃水浴预温。 ■加入P试液0.2ml,并轻轻地侧动试管,至液体停止 流动或出现颗粒为止,记录PT测定值(秒)。 ■重复3次测定,取平均值作为测定结果。 3.血浆鱼精蛋白副凝试验(3P试验) ■取被检血浆0.5ml,置于试管内,37℃水浴3min。 ■加入硫酸鱼精蛋白液50l,混匀,37℃水浴15min。 观察有无白色纤维或凝块出现。 如纤维或凝块出现为阳性;无纤维或凝块为阴性。

  8. 测定光密度值 × 1000 = mg% 纤维蛋白原含量 0.5 4.纤维蛋白原定量(饱和氯化钠法) ■实验管:取血浆0.5ml,加入饱和NaCl 4.5ml,充分 混匀,置37℃水浴3min,取出后再次摇匀。 ■对照管:取生理盐水0.5ml,加入饱和NaCl 4.5ml, 同上操作。 ■选用波长520nm,以对照管试液调零点,然后测定 被检样品试液的光密度。

  9. 【思考题】 1.静脉注入兔脑浸液后为何能复制出家兔DIC模型? 试述其发生机制。 2.讨论急性DIC产生的原因、机制及各项结果间的 关系。 【注意事项】 1.采集抗凝血需掌握好血液与抗凝剂的比例。 2.注射兔脑匀浆前,做好第二次采血的准备工作。 3.静脉推注兔脑匀浆的速度快慢是实验成败的关 键,故密切注意动物的反应。

  10. 表2-3-1注入兔脑匀浆前后动物呼吸与状态观察 注兔脑匀浆前 注兔脑匀浆后 腹式呼吸 一般状态 表2-3-2 DIC实验指标的测定记录 项 目 注射前 注射后(立即) 注射后(30/60min) BPC PT(sec)  3P试验 Fbg量 【实验结果记录】

  11. 血小板计数 10倍镜下 40倍镜下

  12. 凝血酶原时间测定 TF+ Ca2+ + 被检血浆,测定凝血时间,使凝血酶 原变为凝血酶,再进一步促进纤维蛋白形成。 正常值:12~14秒

  13. 3P试验 纤维蛋白单体FM可与纤维蛋白(原)的降 解产物X片段形成可溶性复合物SFMC,当加入硫酸鱼精蛋白或乙醇后可使复合物中的 FM游离,重新聚集,即血浆重凝固。 意义:反映纤溶功能

  14. 肝素(heparin) 1. 来源:肠粘膜肥大细胞,是一种酸性粘多糖; 2. 作用: A、加速AT-III、HC-II的作用,也影响TFPI、PC作用; B、增强EC的抗凝和纤溶功能; C、与血小板结合,抑其表面凝血酶生成; 3. 清除: 细胞清除和体液中和。