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胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素

生物化学实验, CQMU, 2010. 胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素. 授课教师：. P、94. 实验目的. 学习酶学实验的内容 学习酶的催化作用 学习掌握影响酶作用的因素. 生物体内存在着两类生物催化剂：一类是酶，化学本质是蛋白质；另一类是核酶和脱氧核酶，化学本质是核酸。酶学实验研究的是化学本质是蛋白质的生物催化剂。 生物体内几乎所有的新陈代谢反应都需要酶的参与，酶的结构和含量异常会导致疾病，酶的测定可以帮助人类诊断疾病；酶也是许多药物作用的靶点，酶本身还可以作为药物治疗疾病；酶学研究对医学和工农业生产都有着极其

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胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素

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Presentation Transcript

  1. 生物化学实验, CQMU, 2010 胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素 授课教师： P、94

  2. 实验目的 • 学习酶学实验的内容 • 学习酶的催化作用 • 学习掌握影响酶作用的因素

  3. 生物体内存在着两类生物催化剂：一类是酶，化学本质是蛋白质；另一类是核酶和脱氧核酶，化学本质是核酸。酶学实验研究的是化学本质是蛋白质的生物催化剂。 生物体内几乎所有的新陈代谢反应都需要酶的参与，酶的结构和含量异常会导致疾病，酶的测定可以帮助人类诊断疾病；酶也是许多药物作用的靶点，酶本身还可以作为药物治疗疾病；酶学研究对医学和工农业生产都有着极其 重要的理论和实际意义。 酶的概念

  4. 酶学实验 酶学实验包括两大部分： 1、酶含量测定 2、酶的动力学

  5. 酶学实验——酶含量测定 酶具有高度催化活性、高度特异性，在生物体内含量甚微，不便用g，mg，μg等质量单位表示。由于在一定条件下酶促反应速度与酶量成正比，故通常用酶活性单位来反映酶的含量。 酶活性（酶活力）是指酶催化一定化学反应的能力，通常以一定条件下酶催化某一化学反应的速率表示，即在特定的底物浓度、pH、温度、反应时间等测定条件下，以单位时间内底物的减少量或产物的增加量表示酶活性大小。 酶活性单位是衡量酶活性大小的尺度，也是衡量酶含量的术语。

  6. 酶学实验——酶的动力学 酶促反应动力学是研究酶促反应速度及其影响因素的内容。 研究酶的动力学时要求只有一个变量，即除了要研究的因素外，其它条件都恒定不变。 影响酶促反应的因素主要有 底物浓度、酶浓度、pH、温度、 时间、抑制剂和激活剂等。

  7. 影响胰酶反应速度的因素 1.酶浓度的影响——观察 2.底物浓度的影响 3.温度的影响——观察 4.酸碱度的影响——观察 5.激活剂的影响 6.抑制剂的影响——观察

  8. 胰酶对蛋白质的消化作用 胶片的感光乳剂中含有卤化银和明胶(一类蛋白质)，它们被涂抹在乙酸片基上。卤化银是胶卷的感光材料，明胶是卤化银的载体，当有光线照射到卤化银上时其转变为黑色的银，经显影工艺后固定于片基，成为我们常见的黑白底片。 明胶被水解后黑色银颗粒随之从片基上脱落。

  9. 实验原理 白明胶 (胶片上蛋白质,黑色) 肽或氨基酸 (胶片上蛋白质水解,黑色消退) 胰酶 以底片上白明胶的水解说明胰酶对蛋白质的消化作用

  10. 酶浓度对酶活性的影响 在其他条件不变的情况下，当[S] 》[E]时,V=K3 [E],为正比关系。

  11. 实验操作 1.取试管4支，标上序号 2.按顺序加入所需试剂(酶量1.5 1 0.5 0) 3.混匀、水浴（预热） 4.放入底片（全部浸没） 5.水浴（间歇摇动试管） 6.立即记录褪色时间(完全或部分）

  12. 水浴 放试管架上！

  13. 酶浓度的影响

  14. 底片褪色情况 酶量(ml): 1.5 1.0 0.5 0 记录褪色时间！

  15. 温度对酶活性的影响 • 在其他条件不变的情况下，一定范围内增加温度，酶反应速度升高；超过一定的温度范围以后再增加温度，酶反应速度下降。 • 在低温度范围内，温度每升高10℃，酶促反应速度可以提高1-2倍。

  16. 酶活性 0 10 20 30 40 50 60 温度 温度对酶活性的影响 • 每一种酶在不同温度条件下活性不同，酶促反应速度达最大时溶液的温度称为该酶的最适温度。 • 不同生物酶的最适温度不同，动物组织中各种酶的最适温度一般为37-40℃，植物或微生物各种酶的最适温度一般为25-60℃。

  17. 温度对酶活性的影响 • 最适温度在60℃以下的酶，当温度达到60-80℃时，大部分酶被破坏，发生不可逆变性； • 当温度接近100℃时，酶的催化能力完全丧失（高温导致酶变性失去活性）。

  18. 实验操作 1. 取试管4支(3种温度) 标上序号 2. 按顺序加入所需试剂； 3. 混匀、水浴（预热）； 4. 放入底片（全部浸没）； 5. 水浴（间歇摇动试管）； 6. 立即记录褪色时间!

  19. 温度对酶活性的影响 管号 1 2 3 4 100℃ 40℃ 0℃ 0℃ 各放置20min 40℃ 40℃ 40℃ 0℃ 记录褪色时间！

  20. pH对酶活性的影响 可以影响底物、辅酶、酶的解离。 pH通过影响酶或底物的电离状态，特别是影响酶活性中心及一些必需基团的电离状态，可影响酶的催化活性。

  21. 酶活性 0 2 4 6 8 10 12 pH pH对酶活性的影响 • 每一种酶在不同pH条件下活性不同，酶促反应速度达最大时的溶液pH称为该酶的最适pH • 在最适pH酶活性最大,大于或小于最适pH，酶活性都会降低。 • 最适pH不是酶的特征性常数!

  22. 实验操作 1. 取试管3支(3个pH) 标上序号 2. 按顺序加入所需试剂； 3. 混匀、水浴（预热）； 4. 放入底片（全部浸没）； 5. 水浴（间歇摇动试管）； 6. 立即记录褪色时间!

  23. 实验步骤

  24. 抑制剂对酶活性的影响 • 凡是能降低酶促反应速度的小分子化合物称为酶的抑制剂。 • 胰蛋白酶的抑制剂有重金属离子Hg2+，其与酶结合使酶活性降低或失活。

  25. 实验步骤 1.取试管3支，标上序号; 2.按顺序加入所需试剂; 3.混匀、水浴（预热）; 4.放入底片（全部浸没）; 5.水浴（间歇摇动试管）; 6.立即记录褪色时间!

  26. 实验步骤

  27. 1 2 3 缓冲液 NaCl HgCl

  28. 注意事项 • 立即记录胶片褪色时间,随时观察各管底片变色情况,掌握好水解程度。 • 汞有毒，操作小心,实验结束后一定要洗净所有器皿。 • 定量加液器的使用

  29. Let's begin

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