PLAN DE TRABAJO_ESPONJAS MARINAS

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL BIOTECNOLOGÍA PLAN DE TRABAJO: AISLAMIENTO DE HONGOS DE LAS ESPONJAS MARINAS PRESENTADO POR: ➢ 2021205073 - LLATASI POMA, MARYORY KELLY ➢ 2021205048 - MANZANO LAURA, JUAN JOSE ➢ 2021205088 - MANZANO LAURA, LUIS GUSTAVO ➢ 2021205087 - NAVARRO RAMOS, MELINA DEYSI ➢ 2021205106 - CALLACONDO ACERO, ADELAIDA ➢ 2021205107 - CCOPA MAMANI, ANGEL LUIS ➢ 2021205047 - ENRIQUEZ BRIANA LIZETH ➢ 2019205030 - FIÑO LAQUIHUANACO, YADIRA MAYDELLI CHAMBI, DOCENTE: Dr. Hebert Hernan Soto Gonzales CICLO: VII SEMESTRE 2024 II ILO-PERÚ 2024

2. INTRODUCCIÓN Las esponjas marinas, pertenecientes al Phylum Porifera, albergan una variedad de microorganismos, incluidos hongos, cuyas asociaciones simbióticas han despertado interés debido a la producción de metabolitos secundarios con aplicaciones en biotecnología, medicina e industria. Estos compuestos bioactivos, como antibióticos y agentes anticancerígenos, posicionan a los hongos marinos como una fuente prometedora de productos naturales. Aunque estudios sobre hongos asociados a esponjas se han realizado en regiones biodiversas como el sudeste asiático y el Caribe, aún faltan investigaciones en el Pacífico Sur. En la costa de Ilo, influenciada por la corriente de Humboldt, se busca identificar hongos marinos asociados a esponjas y evaluar su capacidad para producir compuestos bioactivos, contribuyendo así al descubrimiento de nuevos medicamentos y productos industriales. OBJETIVOS Objetivo General: ● Aislar y caracterizar hongos de esponjas marinas del litoral de Ilo para explorar su diversidad y evaluar su potencial. Objetivo especifico ● Establecer un protocolo eficaz para el aislamiento y cultivo de hongos simbióticos obtenidos de esponjas marinas. ● Evaluar las características morfológicas y moleculares de los hongos aislados para su correcta identificación. METODOLOGIA Sitios de muestreo y recolección de especies Las esponjas marinas, también conocidas como poríferos, son especies acuáticas que se encuentran en el mar de Ilo. Se caracterizan por ser filtradores y desempeñar funciones importantes en su entorno, proporciona una estructura que sustenta la vida de otras especies, son alimento para peces, tortugas, gusanos y estrellas de mar Identificación de especies y selección Realizar la recolección de especies y separar Identificar las especies y seleccionar Conservar de cada especie para el aislamiento fúngico Identificar de procedimientos a aplicar. Figura 1. Litoral de Ilo

3. Aislamiento Fúngico ● Los tejidos de esponja se enjuagan tres veces con agua de mar artificial estéril. ● La superficie de la muestra se desinfectó con etanol al 70%. ● Sacar el tejido interno con un bisturí y pinzas y homogeneizar usando una licuadora con 20 ml de agua de mar natural estéril en condiciones asépticas, luego diluir con agua de mar estéril a tres diluciones (1:10, 1:100 y 1:1.000). ● Para el cultivo de hongos, 100 las micras de cada dilución se siembra por triplicado en placas GPY (1,0 g de glucosa, 0,1 g extracto de levadura, 0,5 g peptona, 15 g de agar y agua de mar, pH 8,0), agar marino (por litro Caldo marino 2216 más 15 g Difco-Bacto agar), Gause I (almidón 20 g, KNO3 1.0 g, K2HPO4 0,5 g, MgSO47H2O 0,5 g, NaCl 0,5 g, FeSO4 0.01 g, 15 g Placas de agar Difco-Bacto, pH 7,2-7,4) y agar Luria Bertani (LB), que contienen los antibióticos penicilina y estreptomicina (100 microgramos/ml cada uno). ● Las placas incuban a temperatura ambiente (18–20 °C) durante 1–3 semanas hasta que se pueda distinguir la morfología de los hongos. ● Recoger y transferir a un nuevo GPY, Agar Marino (Difco), Gause I, y LB placas de agar que contienen estreptomicina y penicilina. ● Análisis Morfológico (por ejemplo, morfología y color de esporas y micelios) y Molecular ● Secuencia y análisis filogenético Análisis Morfológico y Molecular: ● Se hará una examinación de las características morfológicas de los hongos cultivados para eliminar aislamientos redundantes. ● Extraemos ADN de los hongos cultivados y haremos una simplificación del fragmento ITS-rDNA usando PCR con primers específicos. ● Las secuencias que obtendremos las utilizaremos para realizar análisis filogenéticos. Análisis Filogenético: ● Haremos una comparación con bases de datos de referencia (NCBI) para identificar los hongos. ● Se construirán árboles filogenéticos para evaluar la relación entre los hongos aislados y determinar su diversidad.

4. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES Mes Setiembre Octubre Noviembre Diciembre Actividades Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Recopilación de información Identificación de zona de especies Búsqueda y coordinación de permisos Presentación de solicitud de permisos Recojo de Especies Registro e identificación de especies Separación de especies Conservación de especies en laboratorio Aislamiento Fúngico Secuencia filogenético y análisis Presentación de informe BIBLIOGRAFIA : Schmitt, S., et al. (2012). "Assessing the complex sponge microbiota: core, variable and species-specific bacterial communities in marine sponges." The ISME Journal, 6(3), 564-576. https://doi.org/10.1038/ismej.2011.116 Morales, C. E., & Antezana, T. (1983). "Efectos de la corriente de Humboldt en la diversidad marina del Pacífico Sur." Revista Chilena de Historia Natural, 56(2), 187-194