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试验十四、药物 LD50 、 ED50 测定及治疗指数

试验十四、药物 LD50 、 ED50 测定及治疗指数. 一、目的. 1 、掌握 ED50 、 LD50 、治疗指数 TI 意义及测定方法。 2 、掌握药物急性毒性研究技术及指导原则及如何随机分组。 3 、进行受试化合物 ED50 测定；开展受试化合物急性毒性研究；评价受试化合物的安全性（计算 TI ） 。. 定义介绍. 半数有效量（ ED50 ）：引起 50% 阳性反应或 50% 最大效应的剂量。 半数致死量（ LD50 ）：引起 50% 动物死亡的剂量。

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试验十四、药物 LD50 、 ED50 测定及治疗指数

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  1. 试验十四、药物LD50、ED50测定及治疗指数

  2. 一、目的 • 1、掌握ED50、LD50、治疗指数TI意义及测定方法。 • 2、掌握药物急性毒性研究技术及指导原则及如何随机分组。 • 3、进行受试化合物ED50测定；开展受试化合物急性毒性研究；评价受试化合物的安全性（计算TI）。

  3. 定义介绍 • 半数有效量（ED50）：引起50%阳性反应或50%最大效应的剂量。 • 半数致死量（ LD50 ）：引起50%动物死亡的剂量。 • 治疗指数（TI）：药物用于病人之前，在试验动物作安全性评价的一种常用指标，用TI表示。TI=半数致死量/半数有效量=LD50/ED50（或TI=半数中毒量/半数有效量=TD50/ED50）。 • 安全范围：在临床上，有时也用药物最小有效量和最小中毒量之间的距离表示药物的安全性，称安全范围。其距离愈大愈安全。

  4. 掌握药物急性毒性研究技术及指导原则 • 动物急性毒性试验（Acute Toxicity Test，Single Dose Toxicity Test），研究动物一次或24小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。 • （二）基本原则 • 1．实验管理：药物的急性毒性试验属于安全性评价研究，根据《中华人民共和国药品管理法》的规定，必须执行《药物非临床研究质量管理规范》。 • 2．具体问题具体分析：急性毒性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具体问题具体分析”的原则。应根据化合物的结构特点、理化性质、适应症特点和试验目的等选择合理的试验方法，设计适宜的试验方案，并结合其它药理毒理研究信息对试验结果进行全面的评价。 • 3．随机、对照、重复:急性毒性试验应符合一般动物试验的基本原则，即随机、对照和重复。

  5. 为什么要随机分组？ 动物分组是否随机随机分组是动物实验设计和临床观察的一个重要原则。其目的是使一切干扰实验的因素分配到各组时只受纯机遇的抽样误差的影响。而不受实验者主观因素的影响。在动物实验时，因为一次可得到足够的动物，所以常用随机数目表法分组。只有随机化的实验数据才能进行统计学处理。否则实验结果不可靠，统计学处理无意义。

  6. 均衡随机法分组： • 先按易控制的因素（性别、年龄、体重等）均衡分档，然后在每一档随机取出等量的动物分配到各组，使难控制的因素（活泼程度、饥饱、疲劳程度等）得到随机安排。

  7. 具体样例如下：如将12只小鼠分为3组，每组4只将小鼠称重，体重如下：18.6、18.4、19.3、20.3、20.0、18.7、19.6、18.9、18.1、19.7、19.4、20.5，将体重分为18～19g，19～20g，20g以上具体样例如下：如将12只小鼠分为3组，每组4只将小鼠称重，体重如下：18.6、18.4、19.3、20.3、20.0、18.7、19.6、18.9、18.1、19.7、19.4、20.5，将体重分为18～19g，19～20g，20g以上 18～19g 19～20g 20g以上

  8. 取三个空笼子，分别编号1、2、3 2 3 1

  9. 取三个空笼子，分别编号1、2、3

  10. 教学试验安排及内容 • （一）教学分组 • 在一个教学单元内，根据学生人数，将学生分为四大组。

  11. 试验方案 • 第一大组：进行戊巴比妥钠LD50测定试验； • 第二大组：进行戊巴比妥钠ED50试验； • 第三大组：进行受试物LD50试验； • 第四大组：进行受试物ED50试验。 • 受试物自定，本试验以乙醇为例。为节约动物，建议每剂量组采用4只动物（既每大组16只动物进行随机分组及试验方法练习），既可保证学生对随机分组、LD50、ED50测定方法的了解，也遵循动物伦理学的3R原则。

  12. 动物伦理学的3R原则 • 所谓3R即减少(reduction)、替代(replacement)和优化(refinement)的原则。具体讲， • “减少”指在科研中使用少量的动物获得同样多的实验数据 或一定量的动物获得更多的实验数据的方法； • “替代”就是不再利用活体动物进行实验而是以组织细胞培养、各种活体外实验或计算机模型以及统计分析等方法来加以替代，或者用无知觉 的实验材料代替神志清醒的脊椎动物； • “优化”指通过改进和完 善实验程序，减轻动物的痛苦和不安，提高动物福利的方法 J

  13. 四 试验方法及步骤 （一）试验材料1．动物：小白鼠，体重18～24g，雌雄兼用。试验前禁食12小时，不禁水。2．药品及试剂戊巴比妥钠： ED50测定：0.21%、0.26%、0.32%、0.40%；LD50测定：0.77%、0.96%、1.20%、1.50%。乙醇： ED50测定：10.0%、12.8%、16.0%、20.0%；LD50测定：31.0%、38.8%、48.0%和60.0%3．器材：1ml注射器4支，电子秤一台

  14. （二）试验方法 • 1．戊巴比妥钠ED50测定 • 取小白鼠16只，雌雄各半，随机分成4组，每组4只。各组分别ip 0.1ml/10g戊巴比妥钠，用其相应浓度为0.21%、0.26%、0.32%和0.40%(即剂量分别为21mg/kg、26mg/kg、32mg/kg和40mg/kg)。给药后立即记下时间，以翻正反射消失，作为反应指标，记录翻正反射消失的只数几时间。 • 2．戊巴比妥钠LD50测定 • 方法同ED50的测定，ip 0.1ml/10g戊巴比妥钠，用其相应浓度为0.77%、0.96%、1.20%、1.50%(即剂量分别为77mg/kg、96mg/kg、120mg/kg、150mg/kg)。以24小时内死亡（呼吸停止）作为指标，记下死亡数，整个试验过程中，小白鼠按正常生活条件养一天。

  15. 试验方法 • 3．乙醇ED50测定 • 取小白鼠16只，雌雄各半，随机分成4组，每组4只。各组分别ig 0.2ml/10g乙醇，用其相应浓度为10.0%、12.8%、16.0%、20.0%（即剂量分别为2.0g/kg、2.6g/kg、3.2g/kg和4.0g/kg）。给药后立即记下时间，以翻正反射消失，作为反应指标，记录翻正反射消失的只数几时间。 • 4．乙醇LD50测定 • 方法同ED50的测定，ig 0.2ml/10g乙醇，用其相应浓度为31.0%、38.8%、48.0%和60.0%(即剂量分别为6.2g/kg、7.7g/kg、9.6g/kg、12.0g/kg)。以24h内死亡（呼吸停止）作为指标，记下死亡数，整个试验过程中，小白鼠按正常生活条件养一天。

  16. （三）试验结果原始记录 表1 戊巴比妥钠ED50测定结果

  17. 表2 戊巴比妥钠LD50测定结果

  18. 表3 乙醇ED50测定结果

  19. 表4 乙醇LD50测定结果

  20. （四）试验结果 • 根据试验结果，运用统计学软件，得到苯巴比妥、乙醇的ED50、LD50和95%的平均可信限及治疗指数。（用生物机能仪）

  21. （五）试验报告内容及格式要求 • 试验报告内容及格式要求同前。 • 注意事项： 1.分组时采用均衡随机法。 2.药物推注速度要慢，以免引起呼吸抑制。 3.小鼠入睡指标－翻正反射消失，保持室内安静，已睡眠鼠与未睡眠鼠分笼放置。 4.绘图时注意标明坐标、曲线方程及曲线名称。

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