E. Kontny, M. Jastrzębska, I. Janicka, P. Małdyk, W. Maśliński

1. Tkanka tłuszczowapochodząca ze stawów pacjentów chorych na RZS aktywnie produkuje cytokiny prozapalne E. Kontny, M. Jastrzębska, I. Janicka,P. Małdyk,W. Maśliński Zakład Patofizjologii i Immunologii, Klinika Reumoortopedii Instytut Reumatologii, Warszawa

2. Rola tkanki tłuszczowej Prawidłowa masa ciała Otyłość Zapalenie Nacieki Mf Insulinooporność Działanie przeciw miażdżycowe Reaktywność na insulinę Miażdżyca Adipocyty Adipocyty Leptyna Leptyna Limf. T Adiponektyna Makrofagi Makrofagi Zapalenie Adiponektyna TNF IL-6 TNF IL-6 Cytokiny, chemokiny CRP Reaktywność na insulinę Reaktywność na insulinę Insulinooporność Insulinooporność Zmodyfikowane wg Bastard JP et al., Eur Cyt Netw 2006, 17:4-12 U 2/3 chorych, choroba destrukcyjna, nasilony proces zapalny + choroby metaboliczne, Seropozytywność Łagodny przebieg Seronegatywność Kacheksja reumatoidalna RZS Otyłość Dominują właściwości prozapalne + udział w procesach destrukcyjnych Adipokiny Tkanka tłuszczowa może dostarczać sygnały prozapalne i przeciw zapalne?

3. Czy tkanka tłuszczowa związana ze stawem wytwarza cytokiny prozapalne? Hodowla in vitro: Chorzy na RZS 100 mg tkanki/ml DMEM/ 18 godz  LPS (1 mg/ml), IL-1b (1 ng/ml),TNF (10 ng/ml), IL-15, IL-17, IL-23 (10 i 40 ng/ml) Endoprotezoplastyka stawu kolanowego Tkanki tłuszczowej Wewnątrzstawowej Podskórnej okołostawowej (z miejsca założenia szwu) Eksplanty Błony maziowej Nadsącza hodowlane Tkanka Stężenie IL-6, IL-8,TNF (ELISA) Ekspresja mRNA kodującego cytokiny/receptory (RT-PCR)

4. Ekspresja mRNA kodującego IL-6 i IL-8 w tkankach pochodzących od tych samych pacjentów IL-6 IL-8      p TT vs Bm  p TTs vs TTp  n=6 Błona maziowa Tkanka tłuszczowa wewnątrzstawowa Tkanka tłuszczowa podskórna Na poziomie mRNA spontaniczna ekspresja IL-6 i IL-8 jest wyższa w tkance tłuszczowej niż w błonie maziowej

5. Wytwarzanie IL-6 Tkanka tłuszczowa Wewnątrzstawowa Podskórna  n=20  p vs K n=4   Błona maziowa n=11 Wydzielanie IL-6 przez tkankę tłuszczową  wewnątrzstawową  po LPS i TNF  podskórną  po LPS

6. Wytwarzanie IL-6 przez tkanki pochodzące od tych samych pacjentów Tkanka tłuszczowa Wewnątrzstawowa Błona maziowa  p Ts vs Bm n=10 IL-6 (ng/100 mg tkanki) IL-6 (ng/100 mg tkanki)       K LPS TNF IFNg IL-15 IL-17 IL-23 K LPS TNF IFNg IL-15 IL-17 IL-23 Wewnątrzstawowa Podskórna   p vs K  p Ts vs Tp      n=3 K LPS TNF IL-1b IFNg IL-15 IL-17 IL-23 K LPS TNF IL-1b IFNg IL-15 IL-17 IL-23 Wewnątrzstawowa tkanka tłuszczowa wytwarza więcej IL-6 po stymulacji TNF i IFNg

7. Wytwarzanie IL-8 Tkanka tłuszczowa Wewnątrzstawowa Podskórna n=14  p vs K n=4    Błona maziowa n=7 Wydzielanie IL-8 przez tkankę tłuszczową  wewnątrzstawową  po LPS i TNF  podskórną  po LPS (cytokinach ?)

8. Wytwarzanie IL-8 przez tkanki pochodzące od tych samych pacjentów Tkanka tłuszczowa Wewnątrzstawowa Błona maziowa  p Ts vs Bm  n=7    K LPS TNF IFNg IL-15 IL-17 IL-23 K LPS TNF IFNg IL-15 IL-17 IL-23 Wewnątrzstawowa Podskórna   p vs K  n=3 K LPS TNF IL-1b IFNg IL-15 IL-17 IL-23 K LPS TNF IL-1b IFNg IL-15 IL-17 IL-23 Obie tkanki tłuszczowe wydzielają spontanicznie i po stymulacji podobnie ilości IL-8

9. Wytwarzanie TNF przez tkanki pochodzące od tych samych pacjentów Tkanka tłuszczowa Błona maziowa Wewnątrzstawowa  p vs K  p Ts vs Bm   n=8 K LPS IFNg IL-15 IL-17 IL-23 K LPS IFNg IL-15 IL-17 IL-23 Wewnątrzstawowa Podskórna   n=4 K LPS IL-1b IFNg IL-15 IL-17 IL-23 K LPS IL-1b IFNg IL-15 IL-17 IL-23 Obie tkanki tłuszczowe wydzielają po stymulacji podobnie ilości TNF

10. W tkance tłuszczowej i błonie maziowej występuje mRNA kodujące IL-15 i jej swoisty receptor (IL-15 Ra) IL-15 TTs BM TTs BM TTs BM TTs BM  n=6   p TT vs Bm SSP IL-15 LSP SSP – cytozolowa LSP – wydzielnicza/błonowa L IL-15Ra S BM TTs TTp BM - Błona maziowa TTs- tk. tłuszczowa wewnątrzstawowa TTp – tk.tłuszczowa podskórna Pacjent: HJ JM WS BW W obu rodzajach tkanki tłuszczowej ekspresja mRNA kodującego wydzielniczą/błonową formę IL-15 jest wyższa niż w błonie maziowej

11. Podsumowanie wyników Podsumowanie wyników Spontaniczne wytwarzanie cytokin Tkanka tłuszczowa (wewnątrzstawowa i podskórna/okołostawowa):  wytwarza znaczne ilości IL-6 i IL-8 (lecz nie TNF) ( 1 ng/100 mg tkanki;  5% ilości wydzielanej przez błonę maziową),  wykazuje ekspresję mRNA IL-15 i mRNA IL-15Ra Po stymulacji W obu rodzajach tkanki tłuszczowej wytwarzanie IL-6 i IL-8 wzrasta wielokrotnie (po LPS,TNF, IFNg), ( 25 – 50% ilości wydzielanej przez błonę maziową); wytwarzanie TNF znamiennie wzrasta (po LPS), ( 0,5 ng/100 mg tkanki, tj. 20% ilości wydzielanej przez błonę maziową) Wewnątrzstawowa tkanka tłuszczowa Pod wpływem cytokin (TNF, IFNg) wytwarza znamiennie więcej IL-6 niż tkanka tłuszczowa podskórna

12. Wnioski • U chorych na RZS tkanka tłuszczowa • (wewnątrzstawowa i okołostawowa/podskórna) • jest istotnym źródłem cytokin prozapalnych (IL-6, IL-8, TNF) • Udział wewnątrzstawowej tkanki tłuszczowej • w podtrzymywaniu sieci cytokinowej wydaje się ważniejszy, gdyż •  wykazuje ona większą reaktywność na cytokiny (TNF, IFNg) i •  wytwarza większe ilości IL-6 • TNF może wpływać na tkankę tłuszczową drogą autokrynową • Wydaje się, że także IL-15 może autokrynnie • wpływać na metabolizm stawowej tkanki tłuszczowej, • gdyż tkanka ta wykazuje ekspresję IL-15 i IL-15Ra.