1 / 40

KAEDAH-KAEDAH DALAM BIOLOGI MOLEKUL

KAEDAH-KAEDAH DALAM BIOLOGI MOLEKUL. PENGEMPARAN- PEMISAHAN MOLEKUL/ MAKROMOLEKUL/ORGANEL BERDASARKAN SAIZ, BENTUK, KELIKATAN & , KETUMPATAN ELEKTROFORESIS- PEMISAHAN MOLEKUL/ MAKROMOLEKUL BERDASARKAN CAS MIKROSKOPI- PENGAMATAN MOLEKUL/ MAKROMOLEKUL/ORGANEL YANG AMAT SENI. PENGEMPARAN.

rad
Download Presentation

KAEDAH-KAEDAH DALAM BIOLOGI MOLEKUL

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. KAEDAH-KAEDAH DALAM BIOLOGI MOLEKUL • PENGEMPARAN- PEMISAHAN MOLEKUL/ MAKROMOLEKUL/ORGANEL BERDASARKAN SAIZ, BENTUK, KELIKATAN & , KETUMPATAN • ELEKTROFORESIS- PEMISAHAN MOLEKUL/ MAKROMOLEKUL BERDASARKAN CAS • MIKROSKOPI- PENGAMATAN MOLEKUL/ MAKROMOLEKUL/ORGANEL YANG AMAT SENI

  2. PENGEMPARAN • ALAT PENGEMPAR ADALAH ALAT YANG DIGUNAKAN UNTUK MEMISAHKAN BAHAN/PARTIKEL DALAM LARUTAN • KELAS-KELAS: -PENGEMPARAN ANALITIKAL/ PENYEDIAAN -PENGEMPARAN ULTRA DAN KELAJUAN RENDAH -PENGEMPARAN PEMBEZA/PENZONAN http://ntri.tamuk.edu/centrifuge/centrifugation.html

  3. PENGEMPARAN ANALITIKAL • DIGUNAKAN UNTUK MENGUKUR CIRI FIZIKAL PARTIKEL YANG DIENAP SEPERTI KOEFISIEN PENGENAPAN DAN BERAT MOLEKUL

  4. PENGEMPARAN PENYEDIAAN • MEMISAHKAN PARTIKEL YANG SPESIFIK YANG BOLEH DIGUNAKAN SEMULA • JENIS-JENIS: -ZON BERKADARAN -PEMBEZA -PENGEMPARAN ISOPIKNIK

  5. PENGEMPARAN ULTRA/KELAJUAN RENDAH • BERDASARKAN KELAJUAN • PENGEMPARAN ULTRA- KELAJUAN MELEBIHI 20,000 RPM • PENGEMPARAN ULTRA KELAJUAN SUPER- KELAJUAN 10,000 RPM-20,000 RPM • PENGEMPARAN KELAJUAN RENDAH-KELAJUAN DIBAWAH 10,000 RPM

  6. PENGEMPARAN PEMBEZA • PARTIKEL-PARTIKEL YANG TERKANDUNG DALAM SAMPEL AKAN TERPISAH KE DALAM SUPERNATAN DAN PELET ATAU BERADA DALAM KEDUA-DUANYA BERGANTUNG KEPADA SAIZ, BENTUK, KETUMPATAN DAN KEADAAN PENGEMPARAN. • PELET TERKANDUNG DIDALAMNYA CAMPURAN KESEMUA KOMPONEN TERENAP DAN BOLEH MENGANDUNGI BAHAN TAK TERENAP PADA MULANYA

  7. PENGEMPARAN PEMBEZA • SUPERNATAN MENGANDUNGI BAHAN YANG TIDAK TERENAP DAN BOLEH DIENAPKAN DENGAN PENGEMPARAN PADA KELAJUAN YANG LEBIH TINGGI

  8. PENGEMPARAN PEMBEZA

  9. PENGEMPARAN PENZONAN • SAMPEL DILETAKKAN DIATAS LARUTAN SUKROSA ATAU SESIUM KLORIDA • PARTIKEL AKAN TERPISAH MENGIKUT SAIZ & BENTUK (ZON BERKADARAN-MASA) ATAU KETUMPATAN (ISOPIKNIK)

  10. PENGEMPARAN PENZONAN

  11. PENGEMPARAN PENZONAN ISOPIKNIK

  12. KOEFISIEN PENGENAPAN • APABILA KOMPONEN SEL MISALNYA DIEMPAR MELALUI LARUTAN BERKECERUNAN, KOMPONEN SEL ITU AKAN BERPISAH KEPADA ZON TERSENDIRI ATAU JALURAN • KADAR BILA MANA KOMPONEN TADI MEMISAH DISEBUT SEBAGAI KOEFISIEN PENGENAPAN ATAU NILAI s (UNIT SVEDBERG) • 1 S = 1 X 10-13 SAAT

  13. NILAI KOEFISIEN PENGENAPAN PARTIKEL ATAU KOEFISIEN MOLEKUL PENGENAPAN LISOSOM 9400S VIRUS MOSAIK TEMBAKAU 198S RIBOSOM 80S MOLEKUL RNA RIBOSOM 28S MOLEKUL tRNA 4S MOLEKUL HEMOGLOBIN 4.5S

  14. KELAJUAN PENGEMPARAN • PARTIKEL YANG BERPUSING MEMPUNYAI DAYA TARIKAN YANG BERUPA MAGNITUD KEPADA FUNGSI HALAJU PADA SUDUT TERTENTU (KELAJUAN PUSINGAN) DAN RADIUS PENGEMPARAN (JARAK ANTARA BEKAS SAMPEL DENGAN PUSAT ROTOR • TERDAPAT 2 CARA UNTUK MEMPERIHALKAN DAYA TARIKAN INI : a)KUASA PENGEMPARAN RELATIF b) PUTARAN SEMINIT (rpm)

  15. KUASA PENGEMPARAN RELATIF • DAYA TARIKAN PENGEMPARAN BERDASARKAN ATAU RELATIF KEPADA TARIKAN GRAVITI PIAWAI • CONTOHNYA 500x g BERMAKSUD DAYA TARIKAN YANG 500 KALI LEBIH BESAR DARIPADA DAYA TARIKAN GRAVITI PIAWAI

  16. KUASA PENGEMPARAN RELATIF • PERSAMAAN R.C.F. = 1.119 x 10 -5 (rpm2) r rpm=pusingan seminit r=radius (dalam cm) UNIT g

  17. ELEKTROFORESIS • PERGERAKAN PARTIKEL BERCAS YANG DIPENGARUHI OLEH ALIRAN ELEKTRIK • ELEKTROFORESIS ADALAH KAEDAH UNTUK MEMISAHKAN MAKROMOLEKUL SEPERTI ASID NUKLEIK DAN PROTEIN BERDASARKAN SAIZ, CAS ELEKTRIK DAN CIRI FIZIKAL SEPERTI KETUMPATAN DAN LAIN-LAIN • PEMISAHAN DIBANTU OLEH MATRIKS SEPERTI POLIAKRILAMID ATAU AGAROS

  18. ELEKTROFORESIS • PRINSIP: PEMISAHAN MAKROMOLEKUL BERGANTUNG KEPADA DUA CIRI IAITU BERAT DAN CAS • ALIRAN ELEKTRIK DARI ELEKTROD AKAN MENOLAK MOLEKUL MANAKALA ELEKTROD YANG LAGI SATU AKAN MENARIKNYA PADA MASA YANG SAMA • MOLEKUL AKAN BERGERAK ANTARA LIANG YANG TERBINA ANTARA JALINAN MATRIKS YANG BERTINDAK SEBAGAI PENAPIS YANG AKAN MEMISAHKAN MOLEKUL BERDASARKAN SAIZ

  19. ELEKTROFORESIS • ALIRAN ELEKTRIK AKAN MEMAKSA MAKROMOLEKUL MELALUI LIANG • PERGERAKAN MAKROMOLEKUL BERGANTUNG KEPADA KEKUATAN MEDAN ELEKTRIK, SAIZ DAN BENTUK MOLEKUL, SIFAT HIDROFOBIK RELATIF SAMPEL DAN KEKUATAN IONIK SERTA SUHU PENIMBAL ELEKTROFORESIS • PEWARNAAN AKAN MEMBOLEHKAN MAKROMOLEKUL KELIHATAN DALAM BENTUK SIRI JALURANYANG TERPISAH

  20. ELEKTROFORESIS PROTEIN • PROTEIN MEMPUNYAI CAS BERSIH POSITIF ATAU NEGATIF HASIL GABUNGAN ASID AMINO-AMINO BERCAS YANG TERKANDUNG DIDALAMNYA • MATRIKS YANG SERING DIGUNAKAN UNTUK MEMISAHKAN PROTEIN ADALAH POLIAKRILAMID • ELEKTROFORESIS GEL DUA DIMENSI-PEMISAHAN PROTEIN BERDASARKAN TITIK ISOELEKTRIK DAN BERAT MOLEKUL

  21. ELEKTROFORESIS PROTEIN 2-D • PEMFOKUSAN ISOELEKTRIK- -LANGKAH PERTAMA: PEMISAHAN PROTEIN BERDASARKAN TITIK ISOELEKTRIK (PROTEIN MENGANDUNGI BERBAGAI NISBAH CAS POSITIF DAN NEGATIF) -MELALUI GEL BERBENTUK TIUB ELEKTROFORESIS, PROTEIN AKAN BERGERAK DALAM LARUTAN YANG MEMPUNYAI KECERUNAN PH -

  22. + BERBES - BERASID ELEKTROFORESIS PROTEIN 2-D • PEMFOKUSAN ISOELEKTRIK- -PROTEIN AKAN TERHENTI BILA IA TIBA DI NILAI pH YANG SAMA DENGAN TITIK ISOELEKTRIKNYA IAITU APABILA PROTEIN ITU TIDAK MEMPUNYAI CAS BERSIH

  23. + - ELEKTROFORESIS PROTEIN 2-D • ELEKTROFORESIS GEL DUA DIMENSI- -LANGKAH KEDUA ADALAH MEMBUAT LARIAN ELEKTROFORESIS DALAM ARAH ORTHOGON DARI LANGKAH PERTAMA DAN SDS DITAMBAHKAN

  24. ELEKTROFORESIS PROTEIN 2-D

  25. ELEKTROFORESIS PROTEIN 1-D • PEMISAHAN PROTEIN SATU DIMENSI: PEMISAHAN PROTEIN BERDASARKAN BERAT MOLEKUL • TEKNIK INI DIPANGGIL ELEKTROFORESIS GEL POLIAKRILAMID-SDS (PAGE) ATAU SDS-PAGE KERANA KEHADIRAN SDS DALAM PENYEDIAAN SAMPEL • SIMULASI ELEKTROFORESIS 1-DIMENSI http://www.rit.edu/~pac8612/electro/ Electro_Sim.html

  26. SDS-PAGE • PEMISAHAN PROTEIN BERSAIZ 5 - 2,000 kDa • LIANG ANTARA POLIAKRILAMID DIUBAH ANTARA 3%-30% • SAMPEL PROTEIN YANG DIKAJI ADALAH DALAM BENTUK STRUKTUR PRIMER PROTEIN (PENDIDIHAN BERSAMA DENGAN SDS DAN -MERKAPTOETANOL) • PEWARNAAN PROTEIN DENGAN PEWARNA BIRU COOMASIE ATAU PERAK • PEWARNAAN TAK LANGSUNG: ANTIBODI TERIKAT RADIOISOTOP, ENZIM ATAU PEWARNA FLUORESENS

  27. SDS-PAGE • FUNGSI SDS: DETERGEN BERCAS NEGATIF YANG BERGABUNG DENGAN KAWASAN HIDROFOBIK MOLEKUL PROTEIN DAN MENGAKIBATKANNYA TERBUKA MENJADI RANTAI POLIPEPTIDA YANG PANJANG DAN TERBEBAS DARI IKATAN DENGAN LAIN-LAIN PROTEIN DAN LIPID

  28. SDS-PAGE • FUNGSI -MERKAPTOETANOL MEMECAHKAN IKATAN DISULFIDA BAGI MEMBOLEHKAN SUBUNIT PROTEIN DIANALISA

  29. ELEKTROFORESIS ASID NUKLEIK • MATRIKS YANG SERING DIGUNAKAN UNTUK MEMISAHKAN ASID NUKLEIK ADALAH AGAROS ATAU POLIAKRILAMID • TEKNIK INI DIPANGGIL ELEKTROFORESIS GEL AGAROS • SAMPEL MENGANDUNGI DNA AKAN DIMASUKKAN KE DALAM TELAGA YANG LETAKNYA BERDEKATAN DENGAN ELEKTROD BERCAS NEGATIF • DNA YANG BERCAS NEGATIF AKAN DITARIK KE ARAH ELEKTROD POSITIF

  30. ELEKTROFORESIS ASID NUKLEIK • DNA YANG BERSAIZ BESAR AKAN BERGERAK LAMBAT MANAKALA YANG BERSAIZ KECIL AKAN BERGERAK CEPAT • PEWARNAAN DENGAN ETIDIUM BROMIDA AKAN MEMBOLEHKAN KITA MELIHAT ASID NUKLEIK KERANA BERLAKUNYA SELITAN ETIDIUM BROMIDA DIANTARA BES-BES PADA ASID NUKLEIK • ETIDIUM BROMIDA AKAN BERWARNA OREN APABILA DISINARKAN DENGAN LAMPU ULTRA-LEMBAYUNG

  31. ELEKTROFORESIS ASID NUKLEIK

  32. MIKROSKOPI • KAEDAH AWAL DALAM MENGKAJI BIOLOGI SEL • PRINSIP: MEMBESARKAN IMEJ YANG KECIL • JENIS-JENIS MENGIKUT SAIZ PEMBESARAN IMEJ -MIKROSKOP CAHAYA (300nm-2mm) -MIKROSKOP ELEKTRON (0.15nm-100m)

  33. MIKROSKOP CAHAYA • PRINSIP PEMBESARAN IMEJ: CAHAYA DARI BAWAH MIKROSKOP MELALUI KONDENSER YANG AKAN MENUMPUKAN CAHAYA KE ARAH SPESIMEN. CAHAYA YANG MELALUI SPESIMEN AKAN DIKUMPULKAN SEMULA OLEH KANTA OBJEKTIF YANG AKAN MENGHASILKAN IMEJ

  34. MIKROSKOP CAHAYA • JENIS-JENIS: MIKROSKOP MEDAN TERANG MIKROSKOP MEDAN GELAP MIKROSKOP KONTRA-FASA MIKROSKOP GANGGUAN-PEMBEZA MIKROSKOP PENDARFLUOR (UV) (FLUORESIN/RHODAMIN)

  35. MIKROSKOP ELEKTRON • PRINSIP: -PENGGUNAAN ELEKTRON DAN BUKANNYA CAHAYA UNTUK MEMBESARKANNYA IMEJ. -SPESIMEN PERLU MENJALANI PROSES PERSEDIAAN SEPERTI DILAPISKAN DENGAN SALUTAN EMAS NIPIS BAGI MEMBOLEHKAN ELEKTRON TERPANTUL SEMULA SEBELUM IMEJ DITUMPUKAN KE SKRIN

  36. MIKROSKOP ELEKTRON • JENIS-JENIS: 1) MIKROSKOP ELEKTRON TRANSMISI ELEKTRON AKAN MELALUI SPESIMEN DAN IMEJ DITUMPUKAN PADA SKRIN FLUORESENS -STRUKTUR DALAMAN SPESIMEN DAPAT DILIHAT

  37. MIKROSKOP ELEKTRON • JENIS-JENIS: 2) MIKROSKOP ELEKTRON PENGIMBAS ELEKTRON AKAN DITUMPUKAN KEPADA SPESIMEN YANG KEMUDIANNYA AKAN TERPANCAR SEMULA (DIIMBAS) KE BAHAGIAN PENGESAN DAN IMEJ DIHANTAR KE SKRIN UNTUK DILIHAT -STRUKTUR LUARAN SPESIMEN DAPAT DILIHAT

  38. MIKROSKOP ELEKTRON ALAT ELEKTRON MIKROSKOP PENGIMBAS IMEJ NYAMUK MENGGUNAKAN MIKROSKOPI ELEKTRON PENGIMBAS

  39. KAEDAH-KAEDAH LAIN • KROMATOGRAFI -KERTAS: PEMISAHAN PROTEIN MENGGUNAKAN KERTAS TURAS -PERTUKARAN-ION (ION EXCHANGE) -TURASAN GEL (GEL FILTRATION) -KEAFINAN (AFFINITY) -CECAIR BERTEKANAN TINGGI (HPLC)

  40. KAEDAH-KAEDAH LAIN • PENGGUNAAN RADIOISOTOP UNTUK MENANDA MOLEKUL: 32P, 131I, 35S, 14C, 45Ca, 3H - RIA, EKSPERIMEN ‘PULSE-CHASE’, AUTORADIOGRAFI • PENGGUNAAN ANTIBODI (MONOKLON/POLIKLON) UNTUK MENANDA MOLEKUL:EIA, IF, ELISA • ANALISA DIFRAKSI X-RAY: PENENTUAN STRUKTUR PROTEIN • TEKNOLOGI DNA REKOMBINAN

More Related