1 / 30

Tosoh – HbA1 c

Tosoh – HbA1 c. Marianne Birkekær. Bioanalytikerunderviser Marianne Birkekær, Klinisk Biokemi Næstved sygehus 2012. Former af hæmoglobin. Voksne: HbA(97%), HbA2(2,5%) og HbF(0,5%) HbA ~ HbA 1 : HbA 1a , HbA 1b og HbA 1c Nyfødte: 20 % HbA og 80 % HbF

phila
Download Presentation

Tosoh – HbA1 c

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Tosoh – HbA1c Marianne Birkekær BioanalytikerunderviserMarianne Birkekær, Klinisk Biokemi Næstved sygehus 2012

  2. Former af hæmoglobin Voksne: HbA(97%), HbA2(2,5%) og HbF(0,5%) HbA ~ HbA1 : HbA1a, HbA1b og HbA1c Nyfødte: 20 % HbA og 80 % HbF HbF nedbrydes på 6 mdr til under 1 % Hæmoglobinvarianter: Skyldes mutationer i proteinmolekylet HbS, HbE, HbC og HbD

  3. HbA(dult)

  4. Glykering af hæmoglobin HC=O HC=N-ß CH2-NH-ß | | | HCOH HCOH C=O | | | HOCH HOCH HOCH ß-NH2 + |  |  | HCOH hurtigt HCOH lang- HCOH |  | somt | HCOH HCOH HCOH | | | CH2OH CH2OH CH2OH Aldimine Ketoamine (labilt HbA1c) (stabilt HbA1c)

  5. HbA1c

  6. Kolonne og filter

  7. Analyseprincip Detektoren detekterer kun “røde “ proteiner i prøven ved at arbejde med to bølgelængder:415 (detek) og 510nm(ref) Kolonne Prøve Injektion Detektor － － － － － 1 2 3 Lav Høj Salt koncentration

  8. Flowdiagram (simplificeret)

  9. Flow Detector Prøve A : stærk interaktion Stor fraktion Prøve B :svag interaktion Lille fraktion Top- højde Retentions Tid

  10. Analyseprincip

  11. Flow i forhold til kromatogram 1. Buffer 1 injeceres.(Grøn) (FP) HbA1a og HbA1b 2. Buffer 2 injeceres.(Rød) HbF, l-HbA1c og s-HbA1c 3. Buffer 2+3 injeceres (Rød+Gul) Forhold 1: 1 HbAo 4. Buffer 3 injeceres.(Gul) Evt.Hb-var (D, S, C) Total bufferforbrug G8: Grøn: 0,80 ml Rød: 0.88 ml Gul: 0.72 ml 4 3 2 1

  12. Interaktion med resin • Udnyttelse af forskellighed i ion-interaktioner • Grundlæggende Hb separation • (HbA1a- HbA0) • Hb-variant separation • (HbD,HbS,HbC) • Alle separeret ved hjælp af forskellige saltkoncentrationer og pH-værdier i bufferene Kraftig HbC HbS HbD HbA0 Retentionstider for de forskellige fraktioner A1A: 0.25-0,27 A1B: 0.28-0.33 HbF: 0.40-0.49 lA1c: 0.50-0,57 sA1c: 0.57-0.61 A0 : 0.87-0.91 H-V0: 0.98-1.06 H-V1: 1.13-1.22 H-V2: 1.26-1.35 s-HbA1c l-HbA1c HbF HbA1b HbA1a svag

  13. G8 Variant mode 1.6 min kromatogram Fraktionnavn Procentangivelse Retentionstid Retentionstid-sA1c: 0,57-0.61 Areal Totalareal 500-4000 Kalibreringsligning TP-værdi >250 Beregning af resultat: (sker automatisk) 52,12 (sA1c) x= --------------------------------- (x 100%) = 4,9 % 1073 (Total) – 3,29 (HbF) HbA1c = 1,0 x 4.9% + 0,0= 4,9%

  14. TP-værdi • TP = Theoretical Plates • Indikerer kolonnens beskaffenhed/kvalitet og dermed også toppenes skarphed og kvalitet på kromatogrammet - Beregnes på sA1c-toppen • TP = 5.54 x (RT / W½)2 • RT = Retentions Tid sA1c • W½ = Top-bredde ved halv højde. • TP > 250 • Kan falde voldsomt ved tilstedeværelse af variant (ses kun på den pågældende prøve !) • Ved fald til vedblivende værdi < 250 er det typisk et udtryk for at kolonnen skal skiftes. • TP<250 på én prøve -> fokuser på selve prøven/patienten • TP<250 på flere prøver -> teknisk fejl

  15. Resultater og svar

  16. LMV • Indikation • Diagnostik af Diabetes Mellitus type II samt kontrol af diabetesbehandling. • Medicinsk baggrund • HbA1c er slutprodukt i en ikke-enzymatisk glykering af hæmoglobin. Forholdet mellem HæmoglobinA1c og total-Hæmoglobin kan betragtes som et eksponentielt vægtet gennemsnit af de forudgående 2-3 måneders glukosekoncentration, således at de sidste ugers værdier vægter mere end de tidligere. • Kan ikke anvendes på børn under 6 måneder, da hæmoglobin F ikke glykeres. • Nyresygdomme og jernmangel kan give forhøjede værdier. Hæmolytiske og hæmoragiske tilstande giver lavere værdier. • Hvis der forekommer abnorme hæmoglobinvaranter i kromatogrammet, eller HbF er større end 15%, kan svaret ikke afgives. • Fructosamin kan anvendes til monitorering af patienter med hæmoglobinvarianter, hvor der ikke kan afgives et svar på HbA1c.Fructosamin afspejler middelglucoseværdien for de sidste 2-3 uger.  • (link til Fructosamin): • http://www.unilabs.dk/Laboratoriemedicin/Analyser/Analysefortegnelse/ • Tolkning • En værdi for HbA1c på eller over 48 mmol/mol er den diagnostiske grænse for diabetes.Ved diagnostik af diabetes bør foretages 2 uafhængige HbA1c-målinger. • Dog kan HbA1c IKKE anvendes diagnostisk ved patienter med mistanke om gestationel diabetes, patienter med nyreinsufficiens, personer med hæmoglobinopati og patienter med hæmatologiske sygdomme, der påvirker erythrocytlevetiden. I sådanne tilfælde skal der anvendes diagnostisk glukosemåling eller glukosebelastning. • Endvidere skal HbA1c tolkes med varsomhed ved akut opstået sygdom hos såvel børn som voksne. • Såfremt HbA1c ligger i intervallet 42 -48 mmol/mol, bør målingen gentages årligt.

  17. Referenceinterval Hb (Fe; B)-Hæmoglobin A1c (Fe);          31 - 44 mmol/mol   (IFCC) Hb (Fe; B)-Hæmoglobin A1c (Fe);           5,0 - 6,2 %    (DCCT) P-Glucose;stofk.(gennemsnit;HbA1c;proc.)  5,4 - 7,3 mmol/l   (eAG)

  18. 17 feb. 2012 :HbA1c til at diagnosticere type 2 diabetes • Undgår faste før prøvetagning • Ingen døgnvariation • Svar ”straks” • Der er enkelte situationer, hvor Sundhedsstyrelsen ikke anbefaler at bruge HbA1c blodprøven, for eksempel hvis patienten er gravid. I disse situationer anbefaler styrelsen at benytte den hidtidige metode. • Fremover vil en værdi af HbA1c på eller over 6,5 procent være den diagnostiske grænse for diabetes. Den ændrede metode vil sandsynligvis betyde, at flere med ikke-diagnosticeret diabetes kan få en diagnose, og dermed få fordelene af en mulig behandling.

  19. ”Kendte” varianter Hb A/D Hb A/S Hb A/C

  20. Eksempler

More Related