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实验总结

实验总结. 祝传顺. 2011年10月 8 日. 实验思路. 表面形貌. 膜的特性表征. 膜的细胞毒性. 1. 制备PCL/PLGA膜. IR. 接触角. 粘附. 吸附量. 蛋白水平、基因水平上. 吸附稳定性. 接VEGF-Fc. 细胞实验. 增值. 分化. 体外活性. 表面形貌. 2 .制备多孔支架. 支架表征. 接VEGF-Fc. 机械性能. 孔隙率. 活性周期. 支架内分布. 体外内皮细胞的分布. 体内植入实验. 体外细胞实验. 吸附. 增值和分化. 释放. 支架内细胞富集情况：HE染色. 血管细胞形成：免疫组化.

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  1. 实验总结 祝传顺 2011年10月8日

  2. 实验思路 表面形貌 膜的特性表征 膜的细胞毒性 1.制备PCL/PLGA膜 IR 接触角 粘附 吸附量 蛋白水平、基因水平上 吸附稳定性 接VEGF-Fc 细胞实验 增值 分化 体外活性 表面形貌 2.制备多孔支架 支架表征 接VEGF-Fc 机械性能 孔隙率 活性周期 支架内分布 体外内皮细胞的分布 体内植入实验 体外细胞实验 吸附 增值和分化 释放

  3. 支架内细胞富集情况：HE染色 血管细胞形成：免疫组化 血管特征：新血管的密度、占有面积 加或不加细胞 血管功能的检测：连通性 Micro-CT

  4. 膜的SEM PCL PCL/PLGA 8:2 5050

  5. PCL PCL/PLGA PLGA

  6. 支架制备 PCL多孔支架 PCL：PLGA=9：1 PCL：PLGA=8：2 PCL/PLGA支架 PCL：PLGA=6：4 其中PLGA中LA:：GA=50/50 75/25 85/15 PCL 分子量 8w PCL分子量 8w PLGA分子量 5w 材料：蔗糖=1：10 处理条件： 室温干燥12h， 真空干燥24h-48h 去离子水浸泡8h， 每1h换一次液

  7. 其他材料 1、 5% HA-CS 0.1g 成1%支架溶液 5% G-CS 0.1g +10mL dH2O 5% HA30%G-CS 0.1g 称0.3g海藻酸+30mLdH2O 成1%海藻酸溶液 待其完全溶液后，量取10mL海藻酸与上述三种溶液混合搅拌均匀 匀浆机打散（无絮状沉淀） 抽真空除气泡 H-CS-AL， 24孔板，1mL注射器，每孔0.5mL 4℃ G-CS-AL，H-G-CS-AL溶液 -20℃预冷30min H-CS-AL,G-CS-AL,H-G-CS-AL多孔支架 真空干燥过夜

  8. 2、a 称 5% H-Cs 0.15g G-CS 0.15g + 10mLdH2O 5%H-30%G- CS 0.15g b、 称肝素钠0.225g EDC0.1065g,NHS0.01g+15mLMSC溶液室温活化1h，平分三份加入上述支架溶液，匀浆打散，反应过夜。 c、称海藻酸0.45g + 45mLdH2O 分三份加入上述溶液 d、匀浆打匀，抽真空排气泡成Hep-H-CS-AL，Hep-G-CS-AL, Hep-H-G-CS-AL -20℃预冷30min 真空干燥过夜 e、24孔板 0.5mL 4℃ 成Hep-H-CS-AL,Hep-G-CS-AL,Hep-H-G-CS-AL多孔支架

  9. 体内实验 材料处理： 70%酒精浸泡过夜，再经PBS溶液清洗3遍，PBS中4℃保存。 腹腔注射戊巴比妥麻醉，背面向上置于手术盘上，四肢用皮筋固定，拉伸展开。电动推清理背部毛露出皮肤，碘伏消毒两次，于背部做一切口（正中或侧切），剪开足够长度，镊子扩开皮下空间，植入处理过的支架，手术线缝合伤口。

  10. Thank you ！

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