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血清谷丙转氨酶 活性的测定 PowerPoint Presentation
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血清谷丙转氨酶 活性的测定

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血清谷丙转氨酶 活性的测定

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Presentation Transcript

  1. 实验题目 血清谷丙转氨酶活性的测定

  2. 实验目的 • 掌握谷丙转氨酶活性测定的 原理和方法

  3. 实验原理 • 血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸 • 血清加基液保温后产生丙酮酸的多少,即反应出谷丙转氨酶活性的大小。 • 丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在酸性溶液中显黄色,在碱性溶液中成醌型显棕红色。

  4. 本实验是在碱性条件下,生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量,即反应了谷丙转氨酶的活性。本实验是在碱性条件下,生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量,即反应了谷丙转氨酶的活性。 • 本法以lml血清与基质液在37℃,保温30分钟生成2.5μg丙酮酸为谷丙转氨酶活性1单位 • 求酶活性单位的方法: • 1、标准品对照法:检品与标准丙酮酸液同样处理呈色,进行比色,计算出酶活性单位。 • 2、标准曲线法:取含待测物的一系列标准溶液,作标准曲线,由标准曲线查得活性单位。

  5. 实验操作 一、标准品对照法取试管4支,标号,按下表加试剂:

  6. 56℃放置5分钟。 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入(约1分钟),边加边混匀。 室温放置 30分钟, 测OD值,波长 520nm,用蒸馏水调零点。

  7. X (待测样品丙酮酸含量) (ODA-ODB) (ODA-ODB) (ODA-ODB) (ODA-ODB) = 50ug/ml 0.1 ml (ODs-ODs') (ODs-ODs') (ODs-ODs') (ODs-ODs') × X = × × × 5 20 5 SGPT单位= 0.1 2.5 × = 计 算

  8. 二、标准曲线法 配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液,并且各加以适量的基质液, 作成标准曲线。具体做法如下表。 。

  9. 各管混匀,放37℃水浴5分钟 然后各加呈色试剂0.5ml,混匀 56℃放置5分钟。 加0.4N NaOH液5.0ml 慢慢加入(约1分钟),边加边混匀 室温放置 30分钟 测定OD值, 波长 520nm,用蒸馏水调零点。

  10. 实验结果 一标准对照法 1.原始数据记录 2、公式计算酶活性单位(要求带入数据,写出结果) 二、标准曲线法 1.原始数据记录 2、绘制标准曲线,(要求规范作图) 3、通过方法一的ODA-ODB,在标准曲线中,查得酶活性单位

  11. 注意事项 • 操作中加 0.4N NaOH液时,需以较慢速度加入,并且边加边摇匀加快时则a一戊酮二酸引起的发色增强。 • 本实验中各试剂加量都需要准确,并且要注意控制条件,保温时间要严格 • 本法测定SGTP正常值为40单位以下。

  12. 实验讨论 • 分析实验误差产生的原因 • 血清GPT活性测定的意义