(2) 결손효소 완전 효소 중에서 보조효소를 제외한 나머지 단백질 부분을 결손효소라 함 활성을 표시하지 않음

2. (5)금속원소금속원소는 체내에서 합성되는 각종 효소중에 많이 포함되어 있기도 하고, 이 자체가 어떤 보조효소로서의 활성을 가지고 있기도 한다 ENZYME 생체 내의 화학 반응을 촉매하는 단백질을 효소라 합니다. (1)완전효소 보조효소와 단백질이 결합해서 완전히 생리적인 활성을 가진 효소 Holoenzyme= Apoenzyme + Cofactor(Coenzyme) (2)결손효소 완전 효소 중에서 보조효소를 제외한 나머지 단백질 부분을 결손효소라 함 활성을 표시하지 않음 Apoenzyme= Holoenzyme - cofactor(Coenzyme) (3)보인자 cofactor (coenzyme, Prosthetic group) 효소의 활성을 표시 하기 위하여 필요한 유기 또는 무기 저분자 화합물 Mg,Cl,Zn, Ca, ATP, NAD,NADP,PALP, FAD, FMN, Biocytin Coenzyme :기질과의 사이에서 잔기(殘基), 원자를 주고 받는 수용체 Prosthetic group: 복합단백질에서 단백질에 결합되어 있는 비단백질성 분자(단)

3. Summary of coenzymes in enzyme action

4. Classification of Enzyme, Systemic name • Class: 6 major classes • Subclass: donor • Subsubclass: recipient • Serial number • Hexokinase (EC 2.7.1.1) • Alcohol dehydrogenase (EC 1.1.1.1) • Systemic (recommended names)

5. Enzymes Commsion First name 1 - OXIDOREDUCTASE 산화환원 반응에 관여(H+, 전자 trans ) 2 - TRANSFERASE 분자(기질내) 기능기를 떼어내어 다른 분자에 옮겨주는 3 - HYDROLASE 고분자를 가수분해시켜 저분자로 4 - LYASE 기질로부터 몇 개의 원자들의 집단를 떼어내어 기질분자에 붙여주는 = 5 - ISOMERASE 기질 분자식은 변화시키지 않고 분자구조를 바꾸는 6 - LIGASE ATP 물질로부터 인산기를 떼어 방출되는 에너지를 이용 두 분자을 결합시키는

6. 효소의 계통명 국제 생화학 효소위원회가 효소를 6가지로 분류한 것 중 2번째인 transferase를 의미하는 것과. 두 번째 번호인 7번은 인산기 를 전달하는 효소를 의미하며 세 번째와 네 번째 번호는 효소명을 더욱더 상세히 나누어서 구분해서 명명한 것이다 • E.C 번호 2.7.1.1. ATP: glucosephosphotransferase

7. 효소의 반응기구 기질과 효소가 복합체(SE)를 형성한 다음 이러한 복합체 SE는 다시 생성물(P)과 효소(E)로 분리가 된다. 이러한 과정에 의해 효소는 반응을 촉매 하게 된다. SE S+E P+E

9. 효소의 저해제 효소가 반응을 촉매 하는데 방해하는 물질을 말한다 1.가역저해제 - 경쟁적 저해제 - 비경쟁적 저해제 2.비가역저해제

10. 경쟁적 저해제 S는 기질이고 I 는 저해제를 나타냅니다. 이 효소의 활성부위에 대해서 S와 I는 서로 경쟁적으로 결합하려는것 1.가역저해제 - 경쟁적 저해제 - 비경쟁적 저해제 2.비가역저해제 S: 기질 I: 저해제 S Vmax의 불변 I

11. 경쟁억제제 경쟁적 저해제가 있거나 혹은 없어도 반응 속도는 최고 속도에 도달할 수가 있지만 Km값은 각각 달라집니다. I가 없는 경우 Vmax I가 있는 경우 Vmax 2 Km Km

12. 비경쟁억제제 기질과 저해제가 서로 경쟁은 하지 않지만 결합하는 부위가 각기 달리 있습니다. 1.가역저해제 - 경쟁적 저해제 - 비경쟁적 저해제 2.비가역저해제 S Vmax의 감소 I

13. 비경쟁억제제 반응속도 그림을 보면 비경쟁적 저해제가 없을 경우에는 반응 속도가 최고속도에 도달하지만, 비경쟁적 저해제가 있을 때는 반응 속도가 최고속도에 도달할 수 없는 특성을 알 수 있다. Vmax I가 없는 경우 Vmax’ I가 있는 경우

14. 반응속도의 한계 효소의 반응 속도론이란 효소가 어떠한 조건에서 어느 정도까지의 생성물을 얻을 수 있는가에 대한 이론적 고찰이다, S는 기질, E는 효소 P는 생성물, S ① ② E E P

15. 효소의 반응속도 V 반 응 속 도 기질농도 [S]

16. 반응속도의 한계 기질은 5개이지만 효소가 반응을 촉매해서 생성물은 3개밖에 얻지 못하거나, 7개의 기질이 있지만 실제로 얻어지는 생성물은 3개 뿐일 때는 이 효소가 반응을 촉매하는 한계점에 이르렀다는 것을 의미합니다. 기질을 5개, 7개 혹은 그 이상으로 넣어도 반응물은 3개밖에 얻어지지 않았다 ③ ④ E E

17. 효소의 반응속도 기질의 농도를 아무리 높여도 얻어지는 생성물은 일정할 때의 속도를 최대속도, Vmax라 하며. Vmax는 효소가 기질을 촉매 할 수 있는 능력을 나타냅니다 V 반 응 속 도 기질농도[S]

18. 효소의 반응속도 최대 속도의 반이 되는 1/2 Vmax되는 지점의 기질농도를 Km이라 하고, Km값은 효소와 기질과의 적합성 여부, 일정한 시간내에 생성물을 얻을 수 있는 양을 말하는 것.(미카이리스 정수). Km : Michaelis menten V 반 응 속 도 V 2 Km 기질농도[S] Km값이 작으면 기질이 조금만 있어도 효소가 최대속도일 수 있다는 뜻입니다. 따라서 이때는 효소와 기질의 적합성이 대단히 좋다는 뜻

19. 분석모드 1. 종점분석(Endpoint assay) 효소반응이 평행에 도달한 시점에서 측정 (Equilibrium assay),반응속도 Vmax 영차 반응영역 2. 초속도분석(kinetic analysis rate assay) 시간 0에서 효소반응속도를 측정 단위시간당 효소반응속도가 직선적 부분을 측정 효소활성을 측정에 이용 1차 반응영역을 측정한다 3. 정시분석(Fixed time analysis) Km치가 최대로 도달한 시점 1차반응과 0차반응의 혼합형

20. 단순한 효소반응에서 효소농도가 일정할 때 기질농도를 증가시키면 반응속도가 점차 증가하지만 기질농도가 일정농도를 넘으면 효소의 활성중심은 기질로 포화 되어 반응속도는 일정하게 된다 기질의 농도가 낮을 때, [S]가 Km보다 훨씬 더 작으면 V = [S] Vmax / Km이 된다. 즉 반응속도는 기질농도에 정비례하게 되고 효소반응은 1차 반응 기질의 농도가 높을 때, [S]가 Km보다 훨씬 더 크면 V = Vmax이 된다. 즉 반응속도는 최대값을 가지만 기질농도에 영향을 받지 않게 되고 효소반응은 0차 반응

27. Calibrator • 농도를 알고 있는 여러 level의 물질로 장비가 정상적으로 작동할 수 있도록 기준을 설정해 주는 물질. • 측정치를 얻기 위하여 측정 장비에 대한 가늠자가되는 시료의 총칭으로 검량용 시료. • 종류 • Single calibrator(standard) • Multi calibrator – human serum

28. Calibrator 및 QC 물질의 조건 1. 환자의 혈청과 동일한 반응 특성을 갖는 인 혈청 2. 중요한 일반검사 항목을 모두 포함 3. 쉽게 측정할 수 있는 농도 범위 4. 동일 Lot.내의 bottle간 결과가 동일 CV% : 0.3% 이하 잔류수분 : 1% 이하 5. 낮은 혼탁도 6. 검사원리에 따른 농도 값 및 범위기재 7. 조제 후 긴 안정도 및 종목별 특성 기재 Bilirubin, Bicarbonate, ACP, ALP 등 8. 농도 값과 관리범위의 신뢰도 보장 Reference lab. data의 통계처리

29. Cal.과 QC 판정

34. Spectrophotometer • 프리즘이나 격자(grating)을 사용한 다단색광에 대해 검체 용액의 흡광도를 측정하고 표준용액의 흡광도와 비교함으로서 측정치를 구하는 방법 • Beer’s Law: 농도는 빛 흡수량에 비례 빛 투과량에 반비례 • 일반화학검사 Panel, ICG-R15,etc.

35. Reaction Monitor Reaction Monitor란? X 축 반 응 포 인 트 Y 축 흡 광 도 LDH 정상 반응 LDH 고농도 샘플

36. Reaction Monitor LDH 저농도 반응 LDH R1 Short

37. Reaction Monitor LDH Sample Short

38. Reaction Monitor TP 정상 반응 TP Sample Short

39. Reaction Monitor TP R1 Short TP R2 Stirrer 오염

40. Reaction Monitor TP Lamp 이상 GOT Lamp 이상

41. Seperated • Centrifugation • Filtration and dialysis • Electrophoresis • Chromatography

42. Electrophoresis • 전하를 띤 입자들이 전장 내에서 양극 혹은 음극으로 이동함으로써 서로 분리되는 것 • 전기영동 매체를 통해 형성된 전하에 따라 각 입자의 상응하는 극으로 이동 • 단백의 정량분석, Hb subclass 정량, 지단백 분리와 정량, 동종효소분석,etc.

43. Agglutination • 항원, 항체 반응의 지표로 적혈구, 라텍스, 금속등의 미립자물을 이용하여 육안적으로 확인할 수 있는 정도의 응집을 나타내는 방법 • 직접혈구응집반응: Blood grouping, RH typing. • 간접혈구응집반응: 적혈구등에 특이 항원을 감작시키거나 감작시킨 적혈구등을 이용하여 각각 항체나 항원을 검출.

44. Agglutination II

45. AMYLASE, Serum pH7.0 Starch + serum --------→glucose 37℃/30min Maltopentaose→ α-Amy→ maltose + maltotriose Maltose + maltotriose→glucosidase→ 5 glucose Glucose + ATP→Hexokinase→ G 6 P + ATP G 6 P + NAD→G6PD→ NADH+ 6-PG

46. HISTORY • 19세기 초 → 존재인색(소화효소일종) • 1831년 → Leuchs : 전분분해 효소(수액중) • 1845년 → Bouchardat : 전분분해 효소(췌장액중) • 1895년 → Beyerrinck : Amylase (전분분해효소) • 1908년 → Wohlgmuth : Iodometric method(B,U) • 1916년 → Stocks : 임상적의의 부여 • 1929년 → Elman : Acute pancreatitis(early stage) • 1934년 → Katsch : 효소이탈

47. Amylase는 췌장에서 분비되는 효소로서 Starch, Amylose, Amylopectin, Glycogen등의 다당류을 분해하여 환원당인 Dextrin으로 이것을 maltose, isomaltose, glucose로 만든다 • 1925년 Kuhn은 α-amylase와 β-amylase존재를 기술 • 이 효소는 amylose분자와 amylopetin분자에 작용할때에는 α-1,4 glycoside결합을 절단하는되 endoamylase와 exoamylase라는 것이 기질분자로부터 glycoside을 분리한다. • 췌효소는 정상적인 상태에서는 혈중에 일부가 이행하며 또한 뇨중으로배설을 하나 췌장에 장애가 발생하면 혈중 및 뇨중에 증가한다.(효소이탈현상). 세 개(Trypsine,lipase, amylase)의 효소중 임상적의의가 큰 것은 amylase로서 각종 췌장질환과 타액선질환뿐만 아니라 복부질환, macroamylase혈증 등에 진단에 중요하다

48. Amyloclastic method (Iodometric) 남아있는 전분을 Iodometric측정하는 것으로 Wohlgemuth M,원법, Van-Loon M, Caraway M, • Saccharogenic method 형성된 환원당을 측정 하는 것으로 Somogyi M원법외에, Meyer M, Henry M, Sax M, Anthron M, Dinitrosalicylic M • Chromogenic method 색소를 전분에 결합시킨 것을 기질로하고 이것을 amylase에 가수분해 유리된 색소를 정량하는 것 Blue starch법, Dyamyl법 Amylochrome법 • Oligoglucose method 산화효소계, 탈수소효소계를 이용 하는 방법. • 합 성 기 질 법 4-nitrophenyl, G7-4-NP, G5-4NP등 합성발색기질을 이용하여 측정

49. Winslow method starch + serum---------→ I2 37℃/30min • Caraway method (pH 7.0) starch + serum--------→ I2 + ES 37℃/7'30" • Somogyi method (pH 7.0) starch + serum --------→glucose 37℃/30min • Maltopentaose maltopentaose →serum→maltose + maltotriose maltose + maltotriose →glucosidase-→ 5 glucose glucose + ATP →hexokinase→G 6 P + ATP G 6 P + NAD →G6PD→ NADH + 6-PG

50. Macroamylase • Complex between ordinary amylase(S-type) • Normal and abnormal HMW plasma protein • Cannot be filtered through the glomeruli • >200,000 →retained in the plasma