Vyšetření mozkomíšního moku

1. Mrázová K. Ústav klinické biochemie a laboratorní diagnostiky VFN a 1.LF UK Vyšetření mozkomíšního moku

2. Co je mozkomíšní mok ? • CSF nebo také likvor • Tělní tekutina zajišťující: • fyzikální ochranu mozku a míchy • transport biomolekul v mozku • odstraňování metabolitů (CO2,laktát) • udržení konstantního nitrolebního tlaku • obranu vůči patogenním mikroorganismům

3. Tvorba a cirkulace likvoru

4. Odběr likvoru Místo vpichu je na spojnici vrcholů kostí kyčelních a křížení s páteří v místě L4 Lumbální punkce

5. Indikace odběru CSF • AKUTNÍ: • Neuroinfekce • Subarachnoidální krvácení • Maligní infiltrace mening • SPECIÁLNÍ: • Chronická zánětlivá onemocnění CNS Purulentní meningitida

7. VZHLED NORMÁLNÍHO LIKVORU • Před centrifugací • Po centrifugaci • Čirý, bezbarvý

8. LIKVOR SANGVINOLENTNÍ A XANTOCHROMNÍ

9. LIKVOR ZAKALENÝ

10. STATIM BIOCHEMIE • Pandyho zkouška • Celková bílkovina kvantitativně • Laktát • Glukóza • (Chloridy) • Spektrofotometrie

11. SPEKTROFOTOMETRIE

12. Absorbance Absorbance 0,04 415 nm 0,02 Bilirubin Oxyhemoglobin 450 - 460 nm 540 nm 575 nm Normální nález Vlnovádélka Vlnovádélka SPEKTROFOTOMETRIE

13. IMUNOCHEMICKÁ VYŠETŘENÍ • Albumin • Kvocient albuminu (CSF-alb/S-alb) • Imunoglobuliny IgG, IgA, IgM • Specifické proteiny CNS: MBP, NSE, S100 (β podjednotka) • Transferrin • Β-2-mikroglobulin • CEA • Stanovení oligoklonálních pásů IgG • Volné lehké řetězce (kappa, lambda)

14. IZOELEKTRICKÁ FOKUSACE

15. Pravidlo L FUCHS-ROSENTHALOVA KOMŮRKA

16. KOREKCEELEMENTŮ • Na 1000 ery odečítáme 1-2 elementy • Příklad 1: 45 elementů 37 000 erytrocytů 45 - 37 = 8 (normální počet elementů) • Příklad 2: 450 elementů 37 000 erytrocytů 450 -37 = 413 (zmnožený počet elementů)

17. KOREKCE CELKOVÉ BÍLKOVINY • Na 1000 erytrocytů odečítáme 0,003 gzcelkové bílkoviny • Příklad: CB v likvoru je 1,2 g/l erytrocytů je 250 000 1,2 - (250x0,003) = 1,2 - 0,75 = 0,45

18. Průtoková cytometrie

19. PŘÍPRAVA PREPARÁTŮ

20. Cytocentrifuga

21. BARVICÍ TECHNIKY MGG GRAM

22. Vzhled Pandy reakce Celková bílkovina Glukóza Laktát Spektrofotometrie Normální likvor Čirý, bezbarvý 0 arb.j. <0,45 g/l 2,2 - 4,2 mmol/l 1,1 - 2,1 mmol/l negativní Základní biochemické vyšetření likvoru

23. Počet elementů Počet erytrocytů Kvalitativní cytologie Základní barvení (MGG) Barvení olejovou červení (lipofágy) Barvení dle Grama (bakterie) Berlínská modř (Fe3+v siderofázích) Další barvicí techniky Normální likvor < 10 /3 0 Lymfocyty klidové 70% Monocyty klidové 30% Základní cytologické vyšetření

24. Ukázka normálního a patologického likvoru Normální nález: klidové lymfocyty monocyt Streptococcus pneumoniae

25. 3 4 2 Q Ig 5 1 Q Alb Základní biochemické vyšetření • Albumin • Imunoglobuliny • Kvocient albuminu Q Alb = CSF-Alb x 10-3 S-Alb • Výpočet lokální syntézy Imunoglobulinu Schema grafu dle Reibera

26. Zkumavková ELISA

27. Princip ELISA metod

28. Destičková ELISA

29. Imunonefelometrie

30. Princip nefelometrie a turbidimetrie

31. Speciální vyšetření • Oligoklonální IgG • Bakteriologické vyšetření • Specifické protilátky proti infekčním agens • PCR • Specifické proteiny CNS(S 100 β, NSE, MBP) • Asialotransferin

32. Hnisavá neuroinfekce Elementy >900/3 Neutrofilní granulocyty Celková bílkovina >2 g/l Glukóza v CSF <40% S- glykemie Laktát > 3,5 mmol/l Neutrofilní pleocytosa

33. Nehnisavé neuroinfekce Elementy desítky až sta/3 Lymfocyty Celková bílkovina < 2 g/l nebo N Glukóza N Laktát < 3,5 mmol/l Lymfocytárná pleocytosa

34. Subarachnoidální krvácení Krvavý mok Po centrifugaci nažloutlý Spektrofotometrie: Oxyhemoglobin Bilirubin Fagocytované erytrocyty Celková bílkovina↑─↑↑ Glukóza N─↓ Laktát ↑ Erytrosiderofág Siderofágy

35. Maligní infiltrace Elementy N - tisíce Maligní elementy Celková bílkovina N - ↑↑ Glukóza Laktát ↑↑ Maligní elementy

36. Chronické zánětlivé onemocnění – RS Elementy desítky-sta/3 Lymfocyt, plasmatické b. Celková bílkovina N nebo mírně ↑ GlukózaN Laktát N IEF 2 oligoklonální IgG Plasmatické b. a lymfocyty

37. ZÁVĚR Přehled likvorologické diagnostiky: • Posouzení klinického stavu pacienta • Další vyšetřovací metody : CT, MRI,... • Základní vyšetření: biochemické a cytologické • Speciální vyšetření: 1.IEF, specifické proteiny CNS ( S 100β, MBP, NSE) 2.mikrobiologické vyšetření protilátky proti infekčnímu agens, autoprotilátky 3.PCR

38. Děkuji za pozornost