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流式细胞术 在微生物学中的应用

流式细胞术 在微生物学中的应用. 彭公峰 10808058. 流式细胞术原理. 流式细胞术在微生物学中的应用. FISH-FCM 技术检测活性污泥中微生物群落结构. 1. 制备活性污泥悬浊液 2. 制备菌悬液以及原位杂交 3. 流式细胞仪的校正以及 cell quest 软件分析. 将阴性区域设定在 Rejected region 内， G1 中的每一个小点均代表探针阳性细胞，利用 CellQuest 软件统计 G1 中的微生物数目. 5‘ 端经过羧基荧光素标记，适量的甲酰胺溶液，目的是为了增加探针杂交严格性，探针 BET 与 GAM 之间只有一个碱基的差别.

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流式细胞术 在微生物学中的应用

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Presentation Transcript

  1. 流式细胞术 在微生物学中的应用 彭公峰 10808058

  2. 流式细胞术原理

  3. 流式细胞术在微生物学中的应用

  4. FISH-FCM技术检测活性污泥中微生物群落结构 1.制备活性污泥悬浊液 2.制备菌悬液以及原位杂交 3.流式细胞仪的校正以及cell quest软件分析

  5. 将阴性区域设定在Rejected region内，G1中的每一个小点均代表探针阳性细胞，利用CellQuest软件统计G1中的微生物数目 5‘端经过羧基荧光素标记，适量的甲酰胺溶液，目的是为了增加探针杂交严格性，探针BET与GAM 之间只有一个碱基的差别

  6. I：Eucarya；2：Proteobacteria；3：BProteobacteria； 4： Proteobacteria； 5：Comamonas spp． A.bacteria；B：Eucarya ；c：d-Proteobacteria；D：BProteobacteria；E： Proteobacteria；F：Comamonas spp． 100～10 1区域为NON探针标记的阴性区域，FL1一H 值大于10 的区域为阳性区域 类群相对含量（%）=特异性探针标记的细胞数目/探针 EUB标记的数目X100%

  7. FISH-FCM 方法检测酵母-细菌二元体系中微生物数量 • 微生物样品固定(E.COLI,酵母，两种二元体系） • 荧光原位杂交（细菌通用探针EUB33，5’端用荧光染料Cy5修饰；酵母探针为PF2，5’端用荧光染料Cy3修饰） • 流式细胞仪计数 • 微生物样品超声预处理研究 • FISH-FCM同时检测不同浓度的细菌与酵母数量

  8. 染色后的细菌或酵母都能够发出强烈荧光，并与荧光微球、噪音染色后的细菌或酵母都能够发出强烈荧光，并与荧光微球、噪音 明显分开。

  9. FISH杂交后微生物散点图 图a为细菌单一体系的FI4—SSC散点图，图b为酵母单一体系 的FL2-SSC散点图，图c为二元体系的FL2一FIA双通道散点图

  10. Measured concentration(cell／ml) Measured concentration(cell／ml) 单一体系和二元体系中酵母数量测定 单一体系和二元体系中细菌数量测定

  11. Thanks for your attention!

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