BARVENÍ MIKROSKOPICKÝCH PREPARÁTŮ

1. BARVENÍ MIKROSKOPICKÝCH PREPARÁTŮ (BIOLOGICKÁ TECHNIKA)

2. BARVENÍ je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii k prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů. Jednotlivé buněčné struktury nejsou v mikroskopu při pozorování bez předchozího zbarvení téměř rozlišitelné pro stejný nebo jen málo odlišný lom světla. BARVIVA Přirozená Umělá Kyselá Zásaditá Neutrální

3. Přirozená barviva: • hematoxylin - extrakt z kampeškového dubu (Haematoxylon campechianum) • - bazické barvivo

4. Přirozená barviva: • karmín - extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti) • - bazické barvivo

5. Přirozená barviva: • orcein - extrakt z některých lišejníků

6. Přirozená barviva: • šafrán - extrakt z blizen šafránu (Crocus sativus) • - kyselé barvivo - na kolagen

7. Přirozená barviva: • V minulosti bylo užíváno více přirozených barviv, např.: • indigokarmín • berberin - kyselé barvivo • brazilin - bazické barvivo podobné hematoxylinu

8. Umělá barviva: A/ XANTINOVÉ DERIVÁTY • eosin (tetrabrom fluorescein) • - barví acidofilní složky tkání

9. Umělá barviva: • erytrosin (tetrajodfluorescein) • - barví acidofilní složky tkání • fluorescein

10. Umělá barviva: B/ TRIFENYLMETANOVÁ BARVIVA • bazický fuchsin - základ i pro další barviva jako jsou Schiffovo reagens, • rezorcifuchsin a aldehydfuchsin • anilínová modř, světlá zeleň a kyselý fuchsin - kyselá barviva

11. Umělá barviva: C/ THIAZINOVÁ BARVIVA • thionin, toluidinová a methylenová modř - bazická barviva D/ AZOBARVIVA • Janusova zeleň - např. pro supravitální barvení mitochondrií • olejová červeň a sudanová čerň - barviva na tuky

12. Kyselá, barvící plasmu (též plasmatická) - eosin, světlá zeleň, oranž G, • kyselý fuchsin,… • Zásaditá, basická, barvící jádro (též jaderná barviva) - toluidinová modř, • metylová zeleň, basický fuchsin, • hematoxylin • Neutrální- např. eosinát methylenové modři.

13. TYPY BARVENÍ: A1/ progresivní - barvíme až je dosaženo žádaného zbarvení, A2/ regresivní - napřed tkáň přebarvíme, pak přebytečné barvivo odstraňujeme. B1/ sukcedánní - několik barviv po sobě, B2/ simultánní - více barviv současně. - v obou případech musí každé barvivo barvit jinou část tkáně C1/ substantivní - tkáň barvíme přímo barvivem, C2/ adjektivní - barvení prostřednictvím mořidla, které se váže přímo na tkáň Vitální barvení je způsob, kdy je tkáň barvena za živa. Rozeznáváme barvení intravitální, kdy barvíme přímo v těle zvířete a barvení supravitální, kdy barvíme z těla vyňatou tkáň.

14. Vitální barvení: karmín - potravní vakuoly Janusova zeleň - mitochondrie Methylenová modř - odliší živé buňky od mrtvých; živé buňky se neobarví, proto- že pumpují modř ven. Výběr barviva závisí na objektu barvení a strukturách, které chceme barvit: Motolice, tasemnice - borax-karmín Prvoci - Giemsa-Romanowski, hematoxylin Tkáně - hematoxylin-eosin Barvení povrchového reliéfu - opálová modř, Burriho tuš.

15. ÚKOLY: • 1/ Pozorování a barvení živých prvoků z nálevu • Postup: • na podložní sklo dejte kapku nálevu a přikryjte (pro zvolnění rychlosti pohybu prvoků • poslouží vata) • vedle krycího sklíčka kápněte: kapku inkoustu - je vidět cytostom a trichocysty • kapku tuše - je vidět plnící se potravní vakuola. • 2/ Barvení trepek aj. nálevníků po usmrcení • na podložní sklo dejte po kapce trepek, usmrťte kapkou Lugolova roztoku, který • přikápnete (3-6 minut), přikryjte krycím sklíčkem • vedle krycího sklíčka z jedné strany kápněte kapku modrého inkoustu, obarví se • jádro (makronukleus) • z druhé strany přikápněte kapku červeného inkoustu, obarví se cytoplazma. • POZORUJTE A ZAKRESLETE!!!