Prošla nedelja

1. Prošla nedelja Sistem komplementa (C’) Putevi aktivacije Biološke posledice aktivacije Regulacija aktivacije

2. ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE Imunoaglutinacija Imunoprecipitacija

3. Ag-At reakcije (opšte osobine) Antigen-antitelo (Ag-At) reakcije čine osnovu mnogih in vitro metoda koje se obavljaju u laboratorijskimuslovima u dijagnostičke ili istraživačke svrhe. Ispituje se prisustvo antigena ili antitela u odgovarajućem uzorku (serumu, likvoru, ćelijskoj kulturi...). - infektivni agens ili njegov deo (npr. HbsAg, p24 HIV...) - drugi molekuli (npr. citokini, hormoni, komponente C’, tumor markeri, proteini akutne faze ,Ig...) - ukupni Ig (pojedine klase) ili specifična At za određeni Ag Tradicionalno se zovu i serološke reakcije

4. Ag-At reakcije (opšte osobine) Mogu da budu: Rezultat: 1.Kvalitativne POZITIVAN NEGATIVAN 2.Kvantitativne Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml ili IU) Ukupna At - KONCENTRACIJA (npr. IgG 13,5 mg/ml) Specifična At - TITAR (npr. 1/64 ili 64) TITAR je mera količine specifičnih antitela i predstavlja vrednost (recipročnu)najvećeg razblaženja uzorka koji daje pozitivnu reakciju - pozitivna Kontrole Bez validnih kontrola test nema značaj - negativna

5. Primarni i sekundarni humoralni odgovor Prvi susret sa patogenom Ponovni susret sa patogenom I Više IgG eventualno IgM I I IgG IgM eventualno IgA i IgE viši aviditet I IgM, IgG Količina antitela u serumu Vreme (nedelje)

6. IMUNOAGLUTINACIJA

7. IMUNOAGLUTINACIJAje reakcija između korpuskularnog(nerastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela Najčešće se koristi za identifikaciju bakterija i krvnih grupa Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala aglutinacijom (slepljivanjem, zgomilavanjem)čestica Vidljivi aglutinat se javlja ako je odnosantitela i antigena približno jednak (optimalan odnosno ekvivalentni odnos)

8. EKVIVALENTAN (OPTIMALAN) ODNOS VIŠAK ANTIGENA VIŠAK ANTITELA Ag-At KOMPLEKSI: AGLUTINACIJA: REZULTAT: MALI NE POSTOJI NEPOUZDAN (LAŽNO NEGATIVAN) FENOMEN PROZONE VELIKI POSTOJI POUZDAN (POZITIVAN) MALI NE POSTOJI NEPOUZDAN (LAŽNO NEGATIVAN)

9. DIREKTNA (Ag je deo čestice) IMUNOAGLUTINACIJA INDIREKTNA pasivna (Ag je pasivno vezan za česticu-nosač)

10. Primena (Primer) Identifikacija bakterija (enterobakterije) Detekcija Ag DIREKTNA (Ag je deo čestice) IMUNOAGLUTINACIJA

11. Direktna aglutinacija (identifikacija bakterija)

12. Detekcija At Primena (Primer) DIREKTNA (Ag je deo čestice) BAB test (At na brucelu) IMUNOAGLUTINACIJA

13. Primena (Primer) IMUNOAGLUTINACIJA Detekcija At (Ag vezan za nosač) Lateks RF test (reumatoidni faktor) INDIREKTNA pasivna (Ag ili At je pasivno vezano za česticu-nosač)

14. Indirektna aglutinacija Detekcija At (Ag vezan za nosač)

15. Primena (Primer) IMUNOAGLUTINACIJA INDIREKTNA pasivna (Ag ili At je pasivno vezano za česticu-nosač) Detekcija Ag (At vezano za nosač) HBsAg test (hepatitis B virus)

16. Indirektna aglutinacija Detekcija Ag (At vezano za nosač)

17. Detekcija At Primena (Primer) Identifikacija bakterija (enterobakterije) Detekcija Ag DIREKTNA (Ag je deo čestice) BAB test (At na brucelu) IMUNOAGLUTINACIJA Detekcija At (Ag vezan za nosač) Lateks RF test (reumatoidni faktor) INDIREKTNA pasivna (Ag je pasivno vezan za česticu-nosač) Detekcija Ag (At vezano za nosač) HBsAg test (hepatitis B virus)

18. IMUNOPRECIPITACIJA

19. IMUNOPRECIPITACIJAje reakcija između solubilnog(rastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela Najčešće se koristi za merenje količine proteina plazme i drugih telesnih tečnosti (imunoglobulina, komponenti komplementa itd.) Rezultat reakcije je precipitat(talog), tj. dolazi do izdvajanja antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog (optimalnog) odnosa koncentracija antitela i antigena.

20. Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u: tečnoj sredini slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta) polučvrstoj sredini (gelu) slobodnom difuzijom (talog se formira posle više dana) pomoću električne struje (talog se formira posle nekoliko sati)

21. PRIMER RING test (Kvalitativna) Askolijeva reakcija (antraks) U TEČNOJ SREDINI IMUNOPRECIPITACIJA U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

22. Interfacijalni (interfazni) test prstena – RING test (princip)

23. PRIMER U TEČNOJ SREDINI Određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) Nefelometrija (Kvantitativna) IMUNOPRECIPITACIJA

24. Nefelometrija (princip)

25. PRIMER IMUNOPRECIPITACIJA Dvostruka imunodifuzija (Kvalitativna) Elekova proba (difterija) U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU)

26. Dvostruka imunodifuzija u gelu – Elekova proba (princip)

27. PRIMER IMUNOPRECIPITACIJA U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU) Određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) RID test (Kvantitativna)

28. Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test (princip) At u gelu 2 Ag u rupice: 3 1 RID IgG 4 5

29. Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test (princip) Standardna (kalibraciona) kriva D2 (mm2) 3 2 1 4 5 Ag – koncentracija (mg/ml)

30. PRIMER RING test (Kvalitativna) Askolijeva reakcija (antraks) U TEČNOJ SREDINI određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) Nefelometrija (Kvantitativna) IMUNOPRECIPITACIJA Dvostruka imunodifuzija (Kvalitativna) Elekova proba (difterija) U POLUČVRSTOJ SREDINI (GELU) Određivanje koncentracije proteina u serumu (Ig, komponente C‛) RID test (Kvantitativna)

31. 1. Aglutinacija je a. nefelometrijski i RID testom 2. Fenomen prozone je b. direktna aglutinacija 3. Za krajnju identifikaciju nekih bakterija iz familije Entrobacteriaceae se koristi c. lažno negativna aglutinacija u prisustvu viška antitela 4. Lateks aglutinacija je d. tečnoj sredini ili gelu 5. Solubilan antigen ne može da se meri e. kvalitativna tehnika 6. Imunoprecipitacija može da se odigra u f. u tečnom medijumu 7. Ring test je primer imunoprecipitacije g. direktnom aglutinacijom Nefelometrija je h. kvantitativna tehnika 8. 9. Elekova proba je primer i. indirektna aglutinacija 10. C3 komponenta komplementa u krvi može da se meri j. imunoprecipitacije u gelu 1._____ e 2._____ c 3._____ b 4._____ i 5._____ g 6.____ d 7.____ f 8.____ h 9.____ j 10.____ a

32. Sledeća nedelja Predavanje: Odbrana od virusnih, gljivičnih i parazitskih infekcija Seminar: Enzimskiimunotest - ELISA (praktična primena) Imunofluorescencija (praktična primena)