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α- 氨基酸含量的测定

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α- 氨基酸含量的测定 - PowerPoint PPT Presentation


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α- 氨基酸含量的测定. (非水滴定法) 064 黄磊. α- 氨基酸的 α 位碳原子上连有氨基和羧基,为两性物质,在水溶液中的 Ka 和 Kb 很小,溶液的酸碱性均不明显(羧基 Ka = 2.5×10 - 10 ,氨基 Kb = 2.2×10 - 12 ),而且会互相干扰,在水溶液中无法被准确滴定,设计一个滴定 α- 氨基酸含量的方法。 α- 氨基酸在水中的形式为:. 方法一: 在无水冰醋酸中用 HClO 4 滴定 α- 氨基酸中的氨基 : 冰醋酸酸性比水和氨基酸上的羧基都强,给出质子的能力强,相当于 α- 氨基酸中的氨基碱性增强:. 在水中: 在 HAc 中:

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Presentation Transcript
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α-氨基酸含量的测定

(非水滴定法)

064 黄磊

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α-氨基酸的α位碳原子上连有氨基和羧基,为两性物质,在水溶液中的Ka和Kb很小,溶液的酸碱性均不明显(羧基Ka=2.5×10-10,氨基Kb=2.2×10-12),而且会互相干扰,在水溶液中无法被准确滴定,设计一个滴定α-氨基酸含量的方法。 α-氨基酸的α位碳原子上连有氨基和羧基,为两性物质,在水溶液中的Ka和Kb很小,溶液的酸碱性均不明显(羧基Ka=2.5×10-10,氨基Kb=2.2×10-12),而且会互相干扰,在水溶液中无法被准确滴定,设计一个滴定α-氨基酸含量的方法。
  • α-氨基酸在水中的形式为:
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方法一:

在无水冰醋酸中用HClO4滴定α-氨基酸中的氨基:

  • 冰醋酸酸性比水和氨基酸上的羧基都强,给出质子的能力强,相当于α-氨基酸中的氨基碱性增强:
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在水中:
  • 在HAc中:
  • 醋酸的酸性比水强,易给出质子使弱碱质子化,滴定终点突跃较大。
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测定过程:

(1)HClO4-HAc滴定剂的配制:

冷至25°C的冰醋酸中缓慢加入72%的HClO4溶液,摇匀,再滴加一定量的醋酸酐,摇匀,冷至室温,可用冰醋酸稀释。

(2) HClO4-HAc滴定剂的标定:

准确称取定量的基准物KHC8H4O4,溶于冰醋酸中,以0.2%结晶紫的冰醋酸溶液为指示剂,从紫色滴定至蓝色。取同样量的同一溶剂作空白滴定。

(3)α-氨基酸的滴定:

将试样溶于冰醋酸、醋酸酐中,以结晶紫为指示剂,用上述标定好的滴定剂滴定至出现稳定的蓝色。

取同样量的同一溶剂作空白滴定。

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氨基酸的含量=
  • 方法二:

在苯-甲醇混合液中用甲醇钠滴定α-氨基酸中的羧基:

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在水中:
  • 在苯-甲醇中:

CH3O-碱性比OH-强,和-NH3+反应比OH-完全,平衡常数大,滴定较完全,滴定突跃明显。

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测定过程:

(1)CH3ONa的苯-甲醇标准液的配制:

称取定量的纯金属钠,切片用无水甲醇洗净,分别多次加入冷却的无水甲醇中,溶解后,加入苯稀释。

(2) CH3ONa的苯-甲醇标准液的标定:

准确称取苯甲酸基准物,溶于二甲基甲酰铵中,用百里酚蓝为指示剂从黄色滴定至蓝色。

(3)α-氨基酸的滴定:

试样溶于苯-甲醇中,用百里酚蓝为指示剂,用标准液滴定至黄色变为蓝色。

氨基酸含量=

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参考书目:
  • 杭州大学化学系分析化学教研室,分析化学手册(第二版):第二分册:分析化学,化学工业出版社,北京,1997.
  • 武汉大学主编,分析化学(第二版),北京,高等教育出版社,1982.