43 例正常人群 NK 细胞上 FcγRIIIa 基因多态性分析

1. 43例正常人群NK细胞上FcγRIIIa基因多态性分析 屈钰华 黎阳 吴燕峰 方建培 郭海霞 周敦华 黄科 中山大学孙逸仙纪念医院儿科 drliyang@126.com

2. 内容 • 背景 • 目的 • 方法 • 结果 • 讨论 • 结论

3. 背景 • 肿瘤是严重危害人类生命健康的一类疾病，攻克肿瘤一直是我们迫切希望解决的问题。 • 肿瘤特异性单克隆抗体出现给肿瘤治疗带来了新的希望

4. 背景 • 抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)被证明是单克隆抗体临床治疗肿瘤的重要机制和手段。 • IgG型抗体首先通过抗原结合部位与靶细胞（肿瘤细胞）结合，再由效应细胞上的FcγR识别其Fc段，介导ADCC作用

5. 背景 • FcγR分为三类：FcγRI (CD64) 、FcγRII(CD32) 以及FcγRIII (CD16) 。 • FcγRIII又分为两类： FcγRⅢa是一种跨膜糖蛋白，表达于单核细胞、吞噬细胞、NK细胞及选择性T细胞上； FcγRⅢb是一种糖肌醇磷脂蛋白(GPI-锚蛋白)，只表达于中性粒细胞和IFN诱导的嗜酸性粒细胞上

6. 背景 • Ravetch等最先报道在FcγRIIIa近膜Ig样区核苷酸位点559处存在多态性位点。 • 在核苷酸位点559处核苷酸发生鸟嘌呤(G)一胸腺嘧啶(T)点突变后，由其转录合成的受体蛋白内第158位缬氨酸(valine，V)被苯丙氨酸(phenylalanine，F)所取代。 • 这导致FcγRIIIa有三种基因型：FcγRIIIla-158F/F，FcγRIIIa-158V/V及FcγRIIIa-158V/F

7. 背景 • 诸多文献报道FcγRIIIa基因多态性与肿瘤病人预后相关。 • 于单克隆抗体治疗的肿瘤病人中，FcγRIIIa-158V/V的病人预后较V/F及F/F基因型病人好。 • 这可能与其跟治疗性单克隆抗体的Fc段结合相关，由不同的亲和力导致 治疗性单克隆抗体介导的ADCC强度不同。

8. 目的 • 确定FcγRIIIa的基因多态性在正常及肿瘤人群中的分布，以了解人群对肿瘤特异性单抗可能疗效反应的分布规律。

9. 方法 • 标本来源 正常健康人群外周血：用含肝素抗凝管收集健康志愿者外周血，标本量为2～3ml，共43份。

10. 方法 • 技术路线

11. 方法 1.按说明书提取外周血基因组DNA。 2. nest-PCR外侧反应经35个PCR循环(95℃ 45S,64℃ 45S,72℃ 30S)，扩增产物长度248 bp；内侧反应经35个PCR循环(95℃ 45S,65 ℃ 45S,72℃ 30S)，扩增产物长度94 bp。 3.NlaⅢ内切酶酶切 8ul PCR产物于37℃酶切过夜。酶切产物经15％PAGE电泳分离，银染显色。

12. 结果

13. 结果

14. 结果

15. 讨论 • 本研究检测结果显示在健康人群中FcγRIIIa的基因多态性以V/F型最多，而V/V型次之，F/F型最少，这与国内文献报道（47例健康者中V/F型38例，V/V型7例，F/F型2例）一致。 • 本研究中未检测出F/F型，可能与样本量较少有关。

16. 讨论 • 但本研究与国外报道的基因型分布（以V/F型及F/F型较多，而V/V型最少）有差异，这可能与地域及种族差异，遗传环境等因素有关。

17. 讨论 • FcγRIIIa三种基因型的NK细胞与IgG的亲和力顺序为V/V＞V/F＞F/F。 • 治疗性单克隆抗体介导的不同基因型的NK细胞的ADCC强度不同，对肿瘤细胞的杀伤存在差异，从而取得不同的预后。 • 我国以FcγRIIIa-158F/F分布最少，可推测出大部分人对单抗治疗的预后较好。

18. 结论 • FcγRIIIa基因多态性在中国健康人群中的分布以FcγRIIIa-158V/F最多，FcγRIIIa-158V/V次之，FcγRIIIa-158F/F最少。

19. Thank you!