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血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究

血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究. 郑州市儿童医院普外科 陈新让. 肾母细胞瘤诊断现状. B 超 彩超 CT 肾动脉造影 MRI IVP 同位素骨扫描 腹部平片. 无法满足临床无创、简便、高效、快速的早期诊断及指导治疗和监测预后的要求. 临床要求：准确、无创、简便、早期诊断制定治疗方案指导临床分期和监测预后. 研究应用新的技术手段与判断方法 构建肾母细胞瘤早期诊断 分期模型及预后模型. 蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和技术平台. 基因组表达的整套蛋白质进行分析.

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血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究

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Presentation Transcript

  1. 血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究 郑州市儿童医院普外科 陈新让

  2. 肾母细胞瘤诊断现状 B超 彩超 CT 肾动脉造影 MRI IVP 同位素骨扫描 腹部平片 无法满足临床无创、简便、高效、快速的早期诊断及指导治疗和监测预后的要求

  3. 临床要求：准确、无创、简便、早期诊断制定治疗方案指导临床分期和监测预后临床要求：准确、无创、简便、早期诊断制定治疗方案指导临床分期和监测预后 • 研究应用新的技术手段与判断方法 • 构建肾母细胞瘤早期诊断 分期模型及预后模型

  4. 蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和技术平台蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和技术平台 基因组表达的整套蛋白质进行分析 诊 断 模 型 正常对照的蛋 白质表达谱 蛋白质组学 多种标志物联合 分 期 模 型 生物信息学 预 后 模 型 肿瘤细胞的 蛋白质表达谱

  5. SELDI-TOF-MS特点 • 高通量（96孔） • 可靠的重复性 • 灵敏度高（1-50fmol） • 简便（无需纯化样品） • 检测范围广（500Da-500kD) • 所需样本体积小(0.5-400ul）

  6. 生物信息学技术 • 树型决定结构 • 等级分聚类 • 人工神经网络 • 支持向量机

  7. 支持向量机主要思想 1.使用非线性映射算法—— 将输入向量映射到高维特征空间 2. 基于结构风险最小化理论—— 在特征空间中建构最优分割超平面

  8. 临床资料 肾上腺皮质癌1例 神经母细胞瘤9例 所 有 标 本 均 经 病 理 证 实 肾母细胞瘤100例 （男63例，女57例,平均年龄2.8岁） 肝母细胞瘤5例 血 清 样 本 75 例 其他小儿腹部实体肿瘤25例 胰母细胞瘤2例 （男11例，女14例,平 均年龄3.5岁) 腹膜后畸胎瘤5例 正常对照20例 横纹肌肉瘤3例 （来自本院小儿外科门诊体检的健康小　　　　儿。性别、年龄与肾母细胞瘤配对)

  9. PBS-Ⅱ型SELDI-TOF-MS系统 分析参数： • 激光强度为170， • 灵敏度为6， • 每个样本收集总点数140次; • 收集数据范围1000-50000Dal • 优化范围2000到20000Dal。

  10. 主要试剂 NaNc： 分子量136.0 （上海生工生物工程公司） 脲素： 分子量60.6 （Promega Inc. 美国） 乙腈： 分子量41.05 （Sigma Inc. 美国) CHAPS： 分子量604.9 （ Promega Inc. 美国） SPA： 能量吸收基质 （Ciphergen Inc. 美国) U9缓冲液：9M脲素、 2% CHAPS、1%DTT 50% 饱和SPA，充分振荡5分钟，离心1分钟，再加上等体积的上述混合溶液

  11. 清晨、空腹 抽取5ml全血 室温下静置1-2小时使血液凝集 • 4℃3000r/min 离心10min • 置于4℃冰浴上，分装于100ul/管 -80 ℃冰箱保存 血清标本留取与保存

  12. 结 果

  13. 结 果

  14. 肾母细胞瘤各项传统检查符合率 摘自文献

  15. 结 论 肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物 筛出m/z峰值位于6984.0和6455.0的 蛋白质标志物2个 与正常组比较 患儿组此两峰处的蛋白质低表达 （P＜0.05）

  16. 结 论 24例手术前后血清蛋白质标记物的比较 术前呈低表达或不表达 21例根治术患儿术后2周标本 高表达19例低表达2例 3例姑息性切除患儿手术前后 比较差异无统计学意义

  17. 结 论 肾母细胞瘤I、II、III、IV期的M/Z的强度 依次降低的,分期愈高其M/Z强度愈低 术中没有彻底切除肿瘤 M/Z强度较低与术前没有明显区别 I期与正常儿童M/Z区别不明显(I期低于健康儿童) M/Z强度愈高，分期愈低，预后愈好

  18. 结 论 应用SELDI-TOF -MS技术和SVM方法构建的分期模型 成功区分肾母细胞瘤Ⅲ+Ⅳ期与 肾母细胞瘤Ⅰ期+Ⅱ期患儿 指导临床制定合理的治疗方案 提高治愈率 改善预后

  19. 构建判别模型的特点 • 早期诊断灵敏性高，特异性高 • 无创，简便 • 结果稳定，不受主观因素影响 • 分期准确，提高预后，延长生存期

  20. 存在问题 • SELDI-TOF-MS技术不足之处： • 标准化 • 需要大量样本的验证。

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