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Bacteria

Eucariote (con membranas internas). Procariote (sin membranas internas). Bacteria. Célula animal. Célula Vegetal. Herramientas clave en el estudio de la biología celular: - microscopía óptica - microscopía electrónica: alta resolución, técnicas de fijación,

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Presentation Transcript

  1. Eucariote (con membranas internas) Procariote (sin membranas internas) Bacteria

  2. Célula animal Célula Vegetal

  3. Herramientas clave en el estudio de la biología celular: -microscopía óptica - microscopía electrónica: alta resolución, técnicas de fijación, histoquímica de membranas - genética de levaduras: (mutantes) - bioquímica: reconstitución in vitro e identificación de componentes involucrados - inmuno-histoquímica generación de anticuerpos - biología molecular - microscopía fluorescencia - proteína verde fluorescente (GFP) - microscopía confocal, FRAP (fluorescence recovery after bleaching) - cámaras de alta resolución …...

  4. Cytoplasm Nucleus Poro Nuclear Núcleo(esquema) Función: Regulación - Expresión genes - Replicación DNA - Transducción de señales …..

  5. COMPARTIMENTOS DEL NUCLEO Intercromatina: - proteínas y RNP’s - nuclear speckles (spliceosome) - Cajal bodies (snRNP biogenesis) - PML nuclear bodies (transcriptional regulators) ...

  6. Clase I:Lámina nuclear Tipo filamentos intermedios Clase II:Contacto NE con lámina y cromatina Clase III: Transporte núcleo-citoplasma Clase IV:Asociación DNA

  7. PORO NUCLEAR Función: Transporte núcleo-citoplásmico

  8. Transporte núcleo-citoplásmico (bi-direccional) Pasivo: 5,000 MW are freely diffusable 17,000 MW-- take 2 min to establish equilibrium 44,000 MW--take 30 min to establish equilibrium 60,000 MW--cannot move in by diffusion “Facilitado”: Rápido y selectivo Regulado 40-60kDA-MDa Proteínas de transcripción, replicación, estructurales Ribosomas ensamblados tRNA’s….

  9. Modelos de Funcionamiento del Complejo del Poro Nuclear Brownian motion Selective phase model Oily-Spaghetti

  10. Transporte núcleo-citoplásmico Proteínas Karioferinas Importina a / Importina b Exportina 1 (crm1) (Ran-GTP binding proteins) NES (Nuclear Export Signal) NLS (Nuclear Localization Signal) Ran-GTP / Ran-GDP (Núcleo / Citoplasma) RanGAP (Citoplasma) (GTPase Activating Protein) RanGEF o RCC1 (Núcleo) (Guanine Nucleotide Exchange Factor)

  11. Señales de Transporte Nucleo-citoplásmico (Proteínas) B: Básico (K o R) J: Hidrofílico Z: Hidrofóbico X: Cualquiera M9: hnRNP A1

  12. Importación: Proteínas a Núcleo Importinas a y b 5 4 3 6 2 8 7 1

  13. Exportación: Proteinas a Citoplasma. Exportina 1 (crm1)

  14. Ran-GTP Gradient in Interphase (Ran-GTP cycle)

  15. Transporte Nucleo-citoplásmico Exportación de RNA’s (Crm1)

  16. Transporte Nucleo-citoplásmico Exportación de mRNA’s

  17. ORGANIZACION DE CROMATINA (dinámico) Heterocromatina - condensada a lo largo del Ciclo celular - estructura compacta inanccesible a factores de modificación de DNA - no genes - NO transcripción - periferia núcleo (cromosomas con baja densidad genes) Eucromatina - no condensada en interfase - transcripcción activa - interior del núcleo (cromosomas con alta densidad genes) Localización de factores de regulación?

  18. ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL

  19. splicing snRNA SPLICING

  20. Ciclo Celular en Células Diploides (mitosis en células mamífero) Membrana Nuclear se fragmenta Estructura de dos membranas nucleares Mitosis ~1 hora ~16 horas Interfase (4n) ~3 horas Interfase (2n) ~5 horas (Síntesis DNA) ~7 horas Go

  21. Ensamblaje y Desensamblaje de la Membrana Nuclear (Mitosis)

  22. Importin -Exportina? Mitosis abierta vs cerrada

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