实验五、四大类微生物的形态鉴别

1. 实验五、四大类微生物的形态鉴别 微生物免疫学教研室

2. 目的要求 • 掌握细菌的菌落特征 • 了解细菌的形态、特点及鉴别 • 掌握观察放线菌、酵母菌、霉菌形态的基本方法 • 初步了解放线菌、酵母菌、霉菌的菌落形态及其与细菌的区别

3. 实验内容 • 第一部分、细菌培养特征的观察 • 第二部分、放线菌、霉菌、酵母的形态观察

4. 第一部分、细菌培养特征的观察 一、实验原理 • 培养特征：微生物群体在培养基上的形态和生长情况。由于各种细菌在某些鉴定培养基上各自产生固有的菌落形态和生长特征，可作为细菌分类鉴定的依据之一。 • 菌落：个体微生物在固体培养基上生长繁殖而形成的肉眼可见的群体，在表面生长的叫表面菌落，培养基中生长的叫埋藏菌落。

5. 菌落特征 1、大小：大、中、小、针尖状，可用直尺测量菌落的直径（mm）. 2、颜色：黄、浅黄、乳白、灰白、红、粉红等。 3、干湿：干燥、湿润、粘稠。 4、质地：腊状、液滴状、皱褶状、粘。 5、形状：点状、圆形、不规则、丝状、根状、纺锤状等。

6. 6、表面：扁平扩展或蔓延生长、隆起、凹、凸、脐状、凸脐状、乳头状、褶皱凸面。6、表面：扁平扩展或蔓延生长、隆起、凹、凸、脐状、凸脐状、乳头状、褶皱凸面。 7、透明：透明、半透明、不透明。 8、边缘：整齐、不整齐、圆锯齿状、裂叶、不定形、边缘波状。 9、表面光泽：金属光泽、无光泽、闪光等

7. 细菌菌落形态: 1、肉眼观察的细菌菌落形态的多变性。 2、菌落总体形状和边缘状况可由菌落上方俯视观察。 3、菌落高度则由平板边缘水平观察。

8. 斜面菌苔培养特征 • 生长程度：良好、微弱、不生长等 • 菌苔形状：线性、小刺状、念珠状、扩散状、根状、树状、薄膜状等 • 菌苔隆起情况：扁平、苔状、突起等 • 表面光泽：无光泽、闪光、金属光泽等 • 透明程度：半透明、透明、不透明等 • 颜色：

9. 细菌液体培养特征 • 表面生长（菌膜） • 混浊生长 • 沉淀生长

10. 短杆菌 球菌 杆菌 双球菌 螺旋菌 • 细菌的基本形状有球状、杆状、螺旋（弧状）状三种，分别称之为球菌、杆菌、螺旋（弧）菌。 • 芽孢是芽孢细菌典型特征。 细菌三型染色涂片

11. 二、实验材料 • 菌种：大肠，金葡，蜡样，B73 • 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、 牛肉膏蛋白胨琼脂斜面 牛肉膏蛋白胨液体培养基 • 器材：酒精灯等

12. 三、实验方法 （一）、细菌菌落的观察： 1、倒平板 2、按无菌操作的要求，分区划线接种。 3、适温（30-37℃）培养，分别培养24h后观察平板上的菌落特征，注意其形状、大小、颜色、光泽、透明度、表面状况、边缘、以及是否分泌色素等情况。

13. （二）细菌菌苔特征的观察 1、取牛肉膏蛋白胨琼脂斜面，分别标明菌名、组号 2、按无菌操作要求，进行斜面接种。 3、适温培养，分别培养24h后记录菌苔特征，注意其丰厚程度、表面性状、边缘情况、颜色、粘稠度、透明度、有无气味等。

14. （三）细菌液体培养特征的观察 1、取牛肉膏蛋白胨液体培养基，分别标明菌名、组号。 2、按无菌操作的要求，进行液体接种。 3、适温培养，分别培养24h后记录液体培养物的生长情况

15. 例： 2 1 1——直径约1-2mm的圆形、隆起、表面光滑、有光泽、边缘整齐 、白色不透明的菌落 2——直径约2-3mm的圆形、微隆起、表面光滑、有光泽、边缘整齐、半透明的菌落

16. 第二部分、放线菌、霉菌、酵母的培养特征观察第二部分、放线菌、霉菌、酵母的培养特征观察 一、实验原理 菌落：将分散的细菌或孢子接种到固体培养基上，如果条件适宜，便迅速生长繁殖，由于受固体培养基表面或深层的限制，繁殖的菌体常以母细胞为中心聚集在一起，形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细菌群体。

17. 菌落特征 1、大小：大、中、小、针尖状，可用米尺测量菌落的直径（mm）. 2、颜色：黄、浅黄、乳白、灰白、红、粉红等。 3、干湿：干燥、湿润、粘稠。 4、质地：油脂状、膜状、粘、脆等。 5、形状：圆形、不规则、放线状的皱褶等。

18. 6、表面：扁平扩展或蔓延生长、隆起、凹、凸、脐状、凸脐状、乳头状、褶皱凸面。6、表面：扁平扩展或蔓延生长、隆起、凹、凸、脐状、凸脐状、乳头状、褶皱凸面。 7、透明度：透明、半透明、不透明。 8、边缘：整齐、不整齐、圆锯齿状、裂叶、不定形、边缘波状 9、表面光泽：金属光泽、无光泽、闪光等

19. （一）放线菌 1）放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰阳性细菌。 2）常见的放线菌大多能形成菌丝体，菌丝内无隔膜。 3）菌丝体分为两部分：气生菌丝和基内菌丝（营养菌丝），气生菌丝上部能进一步分化产生孢子丝及孢子。 4）能否产生菌丝体以及菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。

20. 二、实验材料 1、菌种：放线菌：A9（白），A45（紫红）、 2、培养基：高氏一号培养基 3、器材：盖玻片等

21. 三、实验方法 1、菌落形态观察 观察放线菌菌落的表面形状、大小、颜色和边缘等，并用接种环挑取，注意菌落在基质上着生紧密情况。区别基内菌丝、气生菌丝及孢子丝的着生部位。

23. 2、菌丝和孢子丝的观察（盖玻片插入培养基）2、菌丝和孢子丝的观察（盖玻片插入培养基） 1）倒平板，制成很厚的平板 2）取灭菌盖玻片插在平板中呈45度角 3）按无菌操作，将放线菌接种于琼脂平板和盖玻片交接处，置30℃培养箱中培养5-6天。 4）取出盖玻片，将有菌丝的一面置显微镜下观察。可以清楚看到菌丝体和孢子。

24. 插片法

26. （二）酵母菌 1）酵母菌是圆形、卵圆形、不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。 2）繁殖方式复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 3）能发酵糖类产能 4）细胞壁常含甘露聚糖 5）常生活在含糖较高，酸度较大的水生环境中。

27. 二、实验材料 菌种：酵母菌 培养基：麦氏培养基 器材：酒精灯等

28. 三、实验方法 1、菌落形态观察 2、个体形态和出芽生殖（水浸片法） 3、子囊孢子的观察 4、假菌丝的观察 5、酵母菌死活细菌的鉴别

29. 酵母菌

30. （三）霉菌 1）霉菌是真菌中一些由单细胞或多细胞菌丝组成的具有较复杂结构的丝状真菌。 2）霉菌菌丝体及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 3）霉菌的菌丝粗壮，在固体培养基上长成颜色不同的绒毛状或棉絮状。 4）霉菌的繁殖方式多种多样，各类霉菌都具有其特殊的繁殖器官。

31. 二、实验材料 菌种：青霉、黑曲霉 培养基：PDA 器材：酒精灯等

32. 三、实验方法 1、观察霉菌菌落形态 2、染色水浸片法观察菌丝、孢子 3、载玻片培养法 4、霉菌封闭标本的制作 5、根霉接合孢子的观察

33. 各种类型的霉菌菌落

34. 分生孢子 分生孢子梗 梗基 小梗 青 霉 镜下形态

35. 黑曲霉PDA培养基上 分生孢子头

36. 小结 • 四大类微生物培养特征的区分要点 • 四大类微生物菌落特征的比较

37. 各种类型的放线菌菌落 四大类微生物区分要点 • 菌落形态：1）若菌落表面湿润：薄而小——细菌厚而大——酵母菌 • 2)若菌落表面干燥：密而小——放线菌松而大——霉菌 各种类型的酵母菌菌落

39. 放线菌 霉 菌 酵 母 细 菌

40. 实验结果与讨论 • 观察细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落，并对所观察的菌落特征进行描述，记录各指标填入表格 • 绘图表示放线菌的基内菌丝、气生菌丝、孢子丝及孢子的形态。 • 绘图表示酵母菌和牙细胞的形态 • 绘出根霉、曲霉、青霉和毛霉的形态图。

41. 隆起情况 形状 透明度 气味 大小 干湿

42. 思考题 1、细菌培养特征的观察有什么用途？ 2、简述四大微生物的菌落特征有何区别？ 3、实验中四大微生物所用的培养基分别是什么？其适用的条件是什么？