残留白血病监测原则与应用

1. 残留白血病监测原则与应用 Pei Lin, MD Department of Hematopathology UT M.D. Anderson Cancer Center, Houston, TX

2. AML 中的 MRD 研究: 潜在用途 • 定义: 形态学完全缓解 (CR) (<5% blasts)时的残留疾病 • 监测的时间点: 诱导后, 巩固后, 移植前, CR中 • 多数研究中有预后意义 • 治疗的有效性: 定量, 动力学 • 指导分先调整的治疗 • 区分持续AML的早期缓解 • 预示早期复发

3. 方法 通过 PCR 监测 MRD 白血病融合基因 (PML-RARA) 突变 (NPM1) 基因过表达 (WT1) 流式多参数 (FCM)

4. 特异异位定量 RT-PCR Break-Point Reverse Primer Forward Primer Fluorescent Taqman Probe Amplicon t(8;21) RUNX1-RUNX1T1 Positive Negative

5. 通过PCR监测 MRD : 白血病融合转录本 • 重现性融合, 如. t(15;17), t(8;21), inv(16) • 总共 ~30% of AMLs • qRT-PCR 分析 • 高敏感性 (1 in 105-106) • 正常对照 • 绝对拷贝数 vs. 降低的程度 • RNA不稳定, 周转时间 • 应用局限性 • 建立标准化和界值

6. 突变缺失 – NPM1 Std. RT-PCR wild type mutated • NPM1 突变约占所有 AML 的30%, 正常核型AML的50% • 多数 4 bp插入, 2个临近部位 • 等位基因特异性引物测定 1 /104-105 • 治疗后 MRD 有预后意义, 可监测动力学和复发* • 其他潜在标志: FLT3, MLL-PTD, KIT, DMNT3A *Schnittger et al. 2009, Blood 114:2220

7. 通过流式细胞仪监测 AMLMRD • 识别异常 vs. 正常髓系前体细胞 • 白血病相关没有表型 [LA(I)Ps]: • 异常淋系抗原 (CD19, CD7, CD56…) • 正常表达抗原的异常水平 (↓,↑ CD38, CD34…) • 早晚期抗原共表达 (CD34++CD15++) • 前向和侧向角的改变

8. 方法 必须知道 正常和恢复期骨髓的模式 如果可能, 与最初的表型比较 需要抗原的表达或点图的详细描述 依靠 LIAP 去识别白血病细胞

9. 诊断标准和敏感性 • LAIP vs “从正常分化” 方法 • A: LAIP 方法: • 发现异常细胞簇，至少20个细胞，呈异常表达至少LIAP 盒中的2种标志 • 许多“LAIPS” 在正常BM中有低频表达 • B: “从正常分化”方法 (单核细胞白血病）

10. 敏感性 敏感性 0.01%, 收集至少每管 200K 细胞 (20/200K = 1 in 104 = 0.01%) 敏感性可因背景正常细胞, 0.1% 或更高而受限 * 0.1% 是文献中常用的阈值

11. 通过PCR监测 MRD • 好处: • 广泛应用 (90- 95% 的病例) • 相对快的周转周期 • 不利: • 解读常有困难，需要经验 • 高价 • 缺乏标准化

12. 潜在挑战 • LAIPs 不能覆盖所有白血病原始细胞, 部分与最初交叉 • 因亚克隆选择/出现导致抗原漂移 • LAIPs 完全改变出现于 20% 的 AML中, 80% 有至少1个LAIP与最初的相似 (Voskova et al) • 治疗后增生低下的标本 • 采用综合的抗体组合建立基线

13. 总结 • MRD 通过流式和 PCR测定对于指导治疗和改善生存是有前景的工具 • 每种方法都有利弊 • 许多研究正在更好地整合数据用于制定临床决策 (剂量强度和/或ASCT) • 流式检测 MRD 的时间和个时间点的界值意义正在被精炼

14. 致谢 • Dr. Jeffrey Jorgensen MD Anderson Cancer Center

15. Answer • A: Positive for MRD • B: Regeneration • C: Indeterminate