第 3 节、动物的克隆

1. 第二章 克隆技术 第3节、动物的克隆

2. 植物的克隆 再分化 脱分化 胚性细胞 外植体 特点：细胞质丰富、液泡小而　　　细胞核大。

3. 一、动物细胞的培养和克隆形成 1、广义的动物组织培养(组培)包括： 细胞培养、组织培养和器官培养。 2、动物组织培养技术的发展： 1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成活。 1903年，皮肤及白细胞培养于腹水及血清中，存活1个月。 1907年，美，蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，观察到细胞的阿米巴运动，创立了悬浮培养法。

4. 3、动物细胞培养过程

5. 4、原代培养、传代培养： 5、细胞系、细胞株： 细胞系是泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。 通过一定的选择或纯化后，细胞株一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等。 致瘤性 连续细胞系 不死性 有限细胞系 连续细胞株 有限细胞株 海拉(HeLa)细胞系电镜照片

6. (人教版) 如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 细胞系 细胞株 (遗传物质改变) 无限传代 细 胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 传代培养 原代培养

7. 植物细胞和动物细胞培养的比较 细胞增殖 细胞的全能性 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 植物体 细胞株、细胞系 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞或细胞分泌蛋白

8. 6、动物细胞培养技术的应用 • （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰 素、单克隆抗体等。 • （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 • （3）用于检测有毒物质。 • （4）用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据。

9. 7、克隆培养法： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体(纯系)的技术。 提高细胞克隆形成率的措施： 适宜的培养基、动物血清、滋养细胞、激素刺激、调节pH等。 应用： 研究遗传规律和生理特性的重要材料。

10. 二、动物的细胞融合技术及其应用 1、细胞融合与细胞杂交： 物理法：离心、振荡、电融合技术 化学法：聚乙二醇 诱导方式 生物法：灭活的仙台病毒 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通，细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞

11. 刺激 效应B 2.杂交瘤技术和单克隆抗体制备： (1).传统抗体生产方法： 抗原 动物体内 抗体 (抗体不纯) 筛选单一效应B细胞 不能增值，产生大量抗体 特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏。

12. (2).单克隆抗体制备过程： 设计方案： 一个B淋巴细胞 + 小鼠骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 特性： 化学性质单一、特异性强的抗体。

13. 三、动物的克隆繁殖 1、动物细胞全能性的表现程度： 低等动物细胞的全能性一般比较容易体现。 癌细胞仍能逆转为正常细胞。 无论是分化还是癌变，变化的都是表现型，基因组成的完整性并没有改变。

14. 2、动物难以克隆的根本原因： 基因表达的调控使得细胞中合成了专一的蛋白质。 一类基因是维持生存的；另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。 如：哺乳动物的红细胞只 有少量的线粒体。

15. 3、细胞核移植实验和动物的克隆繁殖： 胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。

16. 绵羊“多莉”克隆过程：

17. 克隆羊成功的分子细胞生物学机理： 重组移核细胞丢失了源于乳腺细胞的调节蛋白，经过三次分裂后，原乳腺细胞的调节蛋白便全部被卵细胞质中的蛋白因子替换了，因此核DNA被重新编排，细胞开始表达自己的基因。 体细胞克隆成功的意义： 1、证明了高度分化的细胞也可以回复到类似受 精卵时期的功能。 2、证明了细胞质具有调控细胞核发育的作用。 应用： 为遗传疾病的治疗、优良品种的培育等提供了重要途径；对濒危动物的保存也有重要意义。

18. 细胞工程常用的技术手段小结： 植物的克隆： 植物组织培养 植物体细胞杂交 1.动物细胞培养 动物的克隆： 2.动物细胞融合 3.单克隆抗体 4.核移植 5.胚胎移植 6.胚胎分割移植

19. 4、动物胚胎分割移植 解决某些妊娠时间长、每胎产子数量少的优良种畜的繁殖速度问题。

21. 练习：