马铃薯病毒检测试剂盒应用技术 示范推广基地

1. 马铃薯病毒检测试剂盒应用技术示范推广基地 国家引进国外智力成果示范推广基地项目 黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所

2. 一、申请单位基本情况 1. “中心”成员组成情况 • 职工总人数30人 ，中级职称8人，高级职称8人 • 其中：硕士8人，博士3人 2. “中心”基本工作内容 • 承担农业部脱毒马铃薯种薯质量监督检验测试中心的任务 • 承担全国范围内的脱毒马铃薯种薯质量检验、仲裁检验、委托检验、市场抽检 • 马铃薯质量检测标准制定与修订 • 开展技术咨询，业务培训等工作

3. 一、申请单位基本情况 3. “中心”申请项目获奖情况 • “应用高新技术拓宽马铃薯种质与脱毒种薯的开发研究”获黑龙江省重大项目获省科技进步三等奖。 • 2004年“免疫技术制备马铃薯病毒检测试剂盒”国际合作项目获黑龙江省农业科技成果一等奖。 • 2006年 “马铃薯原原种生产技术”获省农业科技成果一等奖。 • 2007年“马铃薯环腐病检测试剂盒的研制”获省农业科技成果一等奖。 • 2008年“马铃薯类病毒检测试剂盒的研制”获省农业科技成果一等奖。

4. 一、申请单位基本情况 4. 标准起草情况 国家标准： • 2003年“马铃薯种薯产地检疫规程” • 2007年“脱毒蒜种” • 2009年“马铃薯脱毒种薯” • 2009年“马铃薯种薯真实性和纯度鉴定-SSR标记” 行业标准： • “马铃薯纺锤块茎类病毒检测方法” 地方标准： • 8项

5. 1. 引智成果来源 主要来源 国际合作项目：免疫技术制备马铃薯病毒检测试剂盒 辅助项目 2004年引进国际先进农业科学技术项目：马铃薯病毒检测试剂盒的引进 2005年度引进国外技术、管理人才项目：马铃薯病毒检测试剂制备 技术 外派项目：马铃薯种薯标准化质量检测体系 2008年黑龙江省引智基地项目：马铃薯病毒检测试剂盒应用技术示范推广基地 二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况

6. 二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况 2.技术人员的引进与派出情况 2.1 技术人员的引进 • 2001年CIP的Dr. Salazar来华指导病毒检测技术 • 2002年CIP的Dr.Wobalie来我实验室参观指导 • 2005年CIP的Dr. Salazar来华指导PVY病毒提纯 • 2008年CIP的Dr. Salazar来华指导病毒抗血清标记

7. 二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况 2.2 技术人员的派出 • 2004年4月19日-5月7日：“中心”派2名科技人员到CIP进行“马铃薯病毒检测ELISA试剂盒制备”技术培训。 • 2006年1月4日-2月24日：“中心”派2名技术人员赴CIP学习马铃薯病毒检测试剂盒的组装技术。 • 2007年8月13日：省政协主席曹广亮率黑龙江省代表团7人一行对CIP进行考察。

8. 二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况 3. 完成马铃薯病毒检测试剂盒的研发 • 培养了一批高素质的技术人员，目前全年专业从事该项研究的有8人。 • 环境设施具备、仪器设备齐全。 • 马铃薯病毒检测试剂盒的制备与组装技术已经成熟。 • 形成的试剂盒产品国际先进，国内领先。

9. 二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况 4. 试剂盒推广应用市场分析 4.1 优势竞争地位，经济效益显著 • 国外马铃薯病毒检测试剂盒相当昂贵，平均每个反应2美元 • 国内尚无合格的马铃薯病毒检测试剂盒 • 我“中心”生产的试剂盒有CIP的技术保证，利用国内的条件、试剂和人力生产的试剂盒成本低，每个反应只有3.5元 • 国内目前每年100万个反应的检测市场 ，用国产试剂盒检测可节省1000万元，直接经济效益将逾百万。

10. 二、马铃薯病毒检测试剂盒的研制情况 4. 社会效益与经济效益分析 4.2 国内潜在市场需求巨大，社会效益显著 • 检测的种薯质量有保障，产量会明显提高，同时会延长种薯的种植年限，每延长种植一年效益递增10倍。 • 检测也推进了种薯生产地规范和市场管理的有效实施，将有利于提高中国种薯的国际市场竞争力。 • 按国际标准，中国马铃薯种薯每年应有3000万份检测样品，每个样品检4种病毒就是1.2亿个反应，因此市场发展空间非常大。

11. 三、马铃薯病毒检测试剂盒成果转化情况 • 获奖：免疫技术制备马铃薯病毒检测试剂盒项目，获省农业科技进步奖 一等奖。 • 申报国家专利：马铃薯PVX、PVY、PVS、PLRV病毒诊断试剂制作工艺方法。 • 获得农业部成果转化项目：马铃薯病毒检测试剂盒成果转化。 • 科技部立项：马铃薯病毒检测试剂盒中试和推广项目。 • 深化合作：2007年黑龙江省农科院韩贵清院长访问CIP，并与CIP总裁Andeson就试剂盒的合作问题签署了备忘录。 • 试剂盒销售：试剂盒已经推广到全国马铃薯主产区十几个省份，总量达到3200套，需要进一步加大推广力度。

12. 四、马铃薯病毒检测试剂盒成果转化推广方式 • 应用：2003-2008连续7年应用于农业部脱毒种薯质量 安全普查工作中，使用试剂盒30套。 • 培训：举办了8次培训班，共培训来自全国各地的198 人次 。2008年培训范围扩展到6个发展中国家。 • 销售：提供科研单位、种薯生产企业使用试剂盒，产 品质量得到肯定。 • 服务：受一些企业委托，用病毒试剂盒执行种薯生产 过程质量监督，保证了种薯质量，得到用户认可。

13. 五、示范推广计划 • 市场策划结合产业特点：以技术培训为载体进一步加强推广试剂盒的力度，技术培训、试用试剂盒作为主要营销手段。 • 有针对性地选择客户：培训对象锁定试剂盒使用高密群体，如：种薯生产单位、马铃薯质量检测单位和种薯质量监督管理部门。 • 循序渐进培养市场：推动中国检测体系的建立将使检测试剂水到渠成地得到推广。在各主产区协助建立单位内部检测体系，以点带面拉动整个种薯生产体系与质量检测紧密结合，逐步使质检深入人心，从而也占有了试剂盒市场。

14. 五、示范推广计划 具体措施： 2010年：培训60人，普查3个马铃薯优势省份，5个重点企业种薯生产 质量监督，试剂盒推广应用50套。 2011年：培训60人，普查3个马铃薯优势省份，5个重点企业种薯生产 质量监督，试剂盒推广应用75套。 2012年：培训60人，普查3个马铃薯优势省份，5个重点企业种薯生产 质量监督，辅助建设质检中心1个，试剂盒推广应用100套。 2013年：培训60人，普查3个马铃薯优势省份，5个重点企业种薯生产 质量监督，辅助建设质检中心1个，试剂盒推广应用100套。 2014年：培训60人，普查3个马铃薯优势省份，5个重点企业种薯 生产质量监督，辅助建设质检中心1个，试剂盒推广应用100套。

15. 六、整个项目实施过程的说明性图片 1.“中心”的办公和实验大楼

16. 六、整个项目实施过程的说明性图片 2.技术人员的引进与派出2.1 引进技术 图1 2001年7月专家来华指导病毒检测技术 图2 CIP Dr.Wobalie来我实验室参观指导 图3 2005年专家来华指导PVY病毒提纯 图4 2008年专家来华指导病毒抗血清标记

17. 六、整个项目实施过程的说明性图片 2.2 派出学习 图5 2004年课题组成员在CIP学习 图6 Dr.Salazar博士专家做报告 图8 2006年课题组成员在CIP学习 图7 CIP给我方学员颁发培训合格证书

18. 六、整个项目实施过程的说明性图片 3.马铃薯病毒检测试剂盒的制备 3.1 病毒提纯 图9 病毒样品在液氮下冷冻研磨 图10 密度梯度离心病毒 图11 提纯后获得的高纯度病毒蛋白

19. 六、整个项目实施过程的说明性图片 3.2 免疫家兔制备抗血清 图12 免疫家兔 图13 耳静脉取血 图14 兔血 图15 粗血清

20. 六、整个项目实施过程的说明性图片 3.3 IgG提取和酶标记 图16 硫酸铵沉淀病毒IgG 图17 磷酸盐透析 图18 取1mg/mL IgG进行标记 图19 酶标记实验

21. 六、整个项目实施过程的说明性图片 3.4 ELISA验证试验 图21 DAS-ELISA测定 图20 实验设计模型

22. 六、整个项目实施过程的说明性图片 3.5 马铃薯病毒检测试剂盒的组装 图22 试剂盒缓冲试剂的准备 图23 病毒抗血清的组装 图24 马铃薯病毒检测试剂盒

23. 六、整个项目实施过程的说明性图片 4、马铃薯病害检测技术培训班 图25 2004年国际马铃薯种薯标准化生产技术学术交流及质量检测技术培训班

24. 六、整个项目实施过程的说明性图片 4、马铃薯病害检测技术培训班 图26 2005年荷兰马铃薯种薯质量检测技术培训班结业合影

25. 六、整个项目实施过程的说明性图片 4、马铃薯病害检测技术培训班 图27 2008年7月9-16日马铃薯病害检测技术国内培训班

26. 六、整个项目实施过程的说明性图片 4、马铃薯病害检测技术培训班 图28 2008年9月15-28日马铃薯病害检测技术国际培训班

27. 六、整个项目实施过程的说明性图片 5、马铃薯病毒检测试剂盒的推广应用 图29、2005年荷兰NAK公司田检员讲授种薯田间检验技术

28. 六、整个项目实施过程的说明性图片 5、马铃薯病毒检测试剂盒的推广应用 图30、2006年在内蒙古大雁种薯田开展田间检测

29. 六、整个项目实施过程的说明性图片 5、马铃薯病毒检测试剂盒的推广应用 图31、2008年在牡丹江商品薯田开展田间检测

30. 谢谢各位专家评委