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实验九　富营养化湖中叶绿素含量的测定

实验九　富营养化湖中叶绿素含量的测定. 一、实验目的. 评价水体的富营养化状况 掌握叶绿素的测定原理及方法. 二、 实验原理. 富营养化 (eutrophication) 是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等营养物质大量进入湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。. 许多参数可用作水体富营养化的指标，常用的是总磷、 叶绿素 -a 含量 和初级生产率的大小。.

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实验九　富营养化湖中叶绿素含量的测定

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Presentation Transcript

  1. 实验九　富营养化湖中叶绿素含量的测定

  2. 一、实验目的 • 评价水体的富营养化状况 • 掌握叶绿素的测定原理及方法

  3. 二、实验原理 富营养化(eutrophication)是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等营养物质大量进入湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。 许多参数可用作水体富营养化的指标，常用的是总磷、叶绿素-a含量和初级生产率的大小。

  4. 测定水体中叶绿素的含量，可将色素用丙酮萃取，根据叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。测定水体中叶绿素的含量，可将色素用丙酮萃取，根据叶绿素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。 根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。

  5. 欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b、c的含量，只需测定该提取液在三个特定波长(663、645、630nm)下的吸光度A，并根据叶绿素a、b、c在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b、c的含量，只需测定该提取液在三个特定波长(663、645、630nm)下的吸光度A，并根据叶绿素a、b、c在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。

  6. 三、实验步骤 1．清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。 2、离心水样：每种测定水样取500mL，加入1ml MgCO3悬液，3000r/min 离心10分钟。

  7. 3、提取：将沉淀物转移至具塞试管，加少量碳酸镁粉末和10mL已水浴加热至50℃的90%丙酮溶液。塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，避光提取4小时。3、提取：将沉淀物转移至具塞试管，加少量碳酸镁粉末和10mL已水浴加热至50℃的90%丙酮溶液。塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，避光提取4小时。 *提取前也可以先用研钵快速研磨藻体，加少量碳酸镁粉末 4、离心：提取完毕后，转移至离心管于台式离心机上4000r/min 离心20min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞紧塞子，4000r/min再离心10min。正确记录提取液的体积。

  8. 5、测定光密度：藻类叶绿素a具有其独特的吸收光谱（663nm），因此可用分光光度法测其含量。用移液管将提取液移入1cm比色杯中，以90%的丙酮溶液作为空白，分别在750、663、645、630nm波长下测提取液的光密度值（OD）。 注意：样品提取液的OD663值要求在0.2与1.0之间，如不在此范围内，应该调换比色杯，或改变过滤水样量。OD663小于0.2时，应该改用较宽的比色杯或增加水样量；OD663大于1.0时，可稀释提取液或减少水样滤过量，使用1cm比色杯比色。

  9. 6、叶绿素含量的计算。根据公式分别计算叶绿素a、b、c含量。6、叶绿素含量的计算。根据公式分别计算叶绿素a、b、c含量。 实验报告 *根据你的计算结果判断湖水富养化程度 * 完成思考题

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