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尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌 A549 、 Calu-6 细胞放射增敏作用的研究

尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌 A549 、 Calu-6 细胞放射增敏作用的研究. 第一作者：刘晓斌 指导教师：袁智勇 天津医科大学附属肿瘤医院 放疗科 / 肺癌诊治中心. 研究背景. ★肺癌发病率高 ，非小细胞肺癌占 80% ， 总 5 年存活率低。 ★放疗疗效仍不理想 。 ★放射增敏剂可以提高放疗疗效。分子 靶向药物：低毒、高效，表皮生长因 子受体（ EGFR ）成为治疗肺癌靶点。. 存在问题. ？ EGFR 抑制剂联合放疗的最佳给药时 间尚不明确。 ？ EGFR 抑制剂联合放疗治疗相同类型 肿瘤时，疗效差别较大，具体原因不明，

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尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌 A549 、 Calu-6 细胞放射增敏作用的研究

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  1. 尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌A549、Calu-6细胞放射增敏作用的研究尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌A549、Calu-6细胞放射增敏作用的研究 第一作者：刘晓斌 指导教师：袁智勇 天津医科大学附属肿瘤医院 放疗科/肺癌诊治中心

  2. 研究背景 ★肺癌发病率高 ，非小细胞肺癌占80%， 总5年存活率低。 ★放疗疗效仍不理想 。 ★放射增敏剂可以提高放疗疗效。分子 靶向药物：低毒、高效，表皮生长因 子受体（EGFR）成为治疗肺癌靶点。

  3. 存在问题 ？EGFR抑制剂联合放疗的最佳给药时 间尚不明确。 ？EGFR抑制剂联合放疗治疗相同类型 肿瘤时，疗效差别较大，具体原因不明， 尚缺乏预测放射增敏疗效的相关指标。

  4. 研究对象和目的 ★对象 ◆细胞系：人肺腺癌A549、Calu-6细胞系 ◆主要试剂：尼妥珠单抗 ◆主要仪器：医科达直线加速器 ★目的 ●明确尼妥珠单抗联合放疗的最佳给药时间。 ●两种细胞采用相同实验方案，观察结果是否相同，并探讨产生差异的原因。

  5. 实验设计 Western blot检测A549、Calu-6EGFR表达 流式细胞术 细胞周期 细胞凋亡 MTT实验计算 A549、Calu-6各自的IC20 /IC50值 Western blot 原因 凋亡指标 Bax BCL-2 24h前加药 关卡蛋白 P21 同时加药 SER 细胞克隆 形成实验 放疗 放射损伤 p-DNA-PK 24h后加药 下游通路 Akt pAkt

  6. 实验结果 WESTERN BIOT检测两种细胞EGFR表达 A:A549或者Calu-6细胞 B:阳性对照 C:阴性对照 MTT检测尼妥珠单抗对两种细胞的增殖抑制作用 24hIC20

  7. 克隆形成曲线 A549 Calu-6

  8. 克隆形成结果

  9. A549细胞周期图 O N R O N R N→R NR R→N N→R NR R→N N→R NR R→N N→R NR R→N

  10. A549细胞周期结果 *表示与相同时相其它实验组比较P值均<0.05

  11. Calu-6细胞周期图 O N R N→R NR R→N

  12. Calu-6细胞周期结果 *表示与相同时相其它实验组比较P值均<0.05

  13. A549细胞各组凋亡图 O N R N→R NR R→N N→R NR R→N

  14. Calu-6细胞各组凋亡图 O N R N→R NR R→N

  15. A549、 Calu-6细胞凋亡结果 *表示与相同细胞系其它实验组比较P值均<0.05

  16. WESTERN BLOT

  17. 各组Akt、pAkt灰度值 *与各个实验组比较，p＜0.05

  18. 小结㈠ ◆相同的结果 • 两种细胞N→R组的SER最高。 • 两种细胞N→R组的G2/M期比例和凋亡率最高 。 • 两种细胞N→R组的Bax、 P21达最高值，Bcl-2 、phospho-DNA-PK达最低值。各组Akt表达无差异。 pAkt表达在N→R组表达减至最低 。 ☆上述改变表明两种不同的细胞系，尼妥珠单抗放疗协同效应最佳顺序均为放疗前24h给药。

  19. 小结㈡ ◆不同的结果 • 尼妥珠单抗对A549细胞的抑制作用更强。 • 尼妥珠单抗无论何时给药均对A549细胞产生放射增敏作用，而Calu-6细胞仅见于放疗前给药。 • Calu-6细胞N组的G0/G1期阻滞不明显， NR组、R → N 组未见G2/M期比例和凋亡率升高。 • A549细胞EGFR表达较高，而Calu-6细胞Akt、 pAkt表达较高。

  20. 讨论 ⒈A549、Calu-6细胞实验结果不同的潜在原因： ⑴ EGFR单抗的放射增敏作用与肿瘤细胞表面的EGFR表达水平密切关系。 ⑵Akt、 pAkt可能是抗EGFR疗法中的耐药因子。 ⒉推测Calu-6细胞系若要进一步增强放射增敏效应，是否应加大药量或是延长作用时间。 ⒊尼妥珠单抗对A549、Calu-6细胞系的最佳给药时间均为放疗前，不同细胞的最佳给药量需进一步明确。 ⒋尼妥珠单抗不同作用时间对放射增敏作用的影响机制尚有待于更深入的研究。

  21. 谢 谢！

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