slide1
Download
Skip this Video
Download Presentation
גידול ותמותה שיטות להערכה כמותית עקום גידול גורמים המשפיעים על הגידול

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 29

גידול ותמותה שיטות להערכה כמותית עקום גידול גורמים המשפיעים על הגידול - PowerPoint PPT Presentation


  • 207 Views
  • Uploaded on

גידול ותמותה שיטות להערכה כמותית עקום גידול גורמים המשפיעים על הגידול. 3/1. שיטות להערכה כמותית של חיידקים. שיטות עקיפות. שיטות ישירות ספירה ישירה במיקרוסקופ ספירה באמצעות מונה קולטר ספירה באמצעות FACS ספירה חיה. ספירה ישירה במיקרוסקופ

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'גידול ותמותה שיטות להערכה כמותית עקום גידול גורמים המשפיעים על הגידול' - makan


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1
גידול ותמותה

שיטות להערכה כמותית

עקום גידול

גורמים המשפיעים על הגידול

3/1

slide2
שיטות להערכה כמותית של חיידקים

שיטות עקיפות

שיטות ישירות

ספירה ישירה במיקרוסקופ

ספירה באמצעות מונה קולטר

ספירה באמצעות FACS

ספירה חיה

slide3
ספירה ישירה במיקרוסקופ

סופרים את המיקרואורגניזמים תחת מיקרוסקופ בעזרת תא ספירה מכויל

לחישוב כמותי: סופרים רק את התאים בריבוע (יחידה אחת), מכפילים במספר היחידות שיש סך הכל ובפקטור המיהול תוך התחשבות בנפח של תא הספירה.

slide4
ספירה באמצעות מונה- מונה קולטר (coulter counter)

החיידקים עוברים באיטיות דרך נקב צר שדרכו עובר זרם חשמלי.

כשחיידק עובר דרך הנקב משתנה ההתנגדות של התמיסה בנקב, ומתרחשת עלייה רגעית במתח.

מספר השינויים במתח מייצג את מספר החיידקים בתרחיף.

3/21

facs f luorescent a ctivated c ell s orter
ספירה עם מפריד תאים באמצעות זריחה(FACS) FluorescentActivatedCellSorter

התאים (לאחר סימון עם חומר פלורסנטי) מוזרמים בתוך מכשיר ה-FACS זה אחר זה בתוך צינור צר וחוצים במהלך זרימתם קרן לייזר אחת או יותר. זריחתם של החומרים שנקשרו לאתרים על פני התא או בתוכו נמדדת מכל תא בנפרד ונאגרת במחשב.

ספירה על סמך גודל, מורכבות ופלורסנציה

בשיטה זו משתמשים בין השאר גם לזיהוי אוכלוסיות תאים מסומנים,

לבדיקת תוצרי פעילויות אנזימטיות בתאים, למדידת שינויים פיסיולוגיים בתאים ועוד.

slide6
ספירה חיה

ההנחה: כל תא חי יכול ליצור מושבה אחת

slide7
התפתחות מושבה
  • מושבה – מקורה בחיידק בודד
    • 1>2>4>8>16>32>64>128>256>512>1024
    • >>>>1,000,000

2n

slide14
שיטות להערכה כמותית של חיידקים

שיטות עקיפות

משקל יבש (1 מג'= 109 חיידקים)

מעקב אחר שינויים באחד ממרכיבי התא

מדידת עכירות

שיטות ישירות

ספירה ישירה במיקרוסקופ

ספירה באמצעות מונה קולטר

ספירה באמצעות FACS

ספירה חיה

slide15
מעקב אחר שינויים באחד ממרכיבי התא שריכוזו בתא קבוע:

ריכוז חנקן

כמות חלבון (בד”כ 50% ממשקל יבש)

דנ”א, רנ"א, ATP

(ריכוזו משתנה מתא לתא אך בממוצע יש 1 מיליגרם ATPעל כל 300 מיליגרם פחמן).

slide16
מדידת עכירות (turbidimetric measurement)

קיים יחס ישיר בין צפיפות החיידקים בתרחיף למידת הפיזור של אלומת קרני אור

כשהצפיפות גבוהה קטנה עוצמת האור העוזב את התרחיף.

slide17
הירידה בעוצמת האור תלויה בצפיפות החלקיקים בתרחיף, בגודלם, בצורתם ובאורך הגל של האור שעובר.

בצפיפות גבוהה יש סטייה

slide18
קביעת מספר החיידקים בריכוזים נמוכים מאוד

בשיטת המספר המסתבר ביותר (MPN)

השיטה מבוססת על הערכה הסתברותית של מספר החיידקים כשמספר החיידקים קטן מאוד.

עורכים מספר מהולים של התמיסה הנבדקת.

מכל מיהול נלקח נפח מסוים לתוך מספר מבחנות המכילות מצע גידול. לאחר הדגרה סופרים את מספר המבחנות העכורות עבור כל מיהול.

מן היחסים שמקבלים בין המבחנות החיוביות והשליליות במספר המהולים שנבדקו ניתן לחשב את ה MPN של המיקרואורגניזמים שבתרחיף.

slide19
שיקולים בבחירת השיטה המתאימה

רגישות (כמות חיידקים וגודל התא)

דיוק

הפרדה בין מתים לחיים

התאמה לאופי הדוגמה

זמן בדיקה וזמן לקבלת תוצאות

מחיר ומכשור

צורך בידע קודם או מומחיות

אפשרות להמשך שימוש בחיידקים

צורך במידע נוסף: מורפולוגיה, ניקיון התרבית, אוכלוסיה מעורבת

slide20
גידול ותמותה

במיקרוביולוגיה גידול מוגדר כעליה במספר המיקרואורגניזמים

(או במספר התאים).

הכפלה של תא בודד: חלוקה בינרית

slide21
הגידול האקספוננציאלי

אם חיידק מתחלק כל 20 דקות אחרי 48 שעות נקבל כ 1047 חיידקים.

בהערכה שחיידק אחד שוקל 10-12 גרם, אחרי 48 שעות נקבל 1032 קג’, פי 4,000 יותר ממשקל כדור הארץ.

slide23
שלב הגידול האקספוננציאלי-חישובים

זמן הכפלהg(זמן דור): הזמן הדרוש לאוכלוסיה כדי להכפיל את מספרה

קצב הגידול: μ מספר הדורות (הכפלות) ליחידת זמן.

מספר דורותn

μ=1/g

slide24
חישוב מספר ההכפלות:

N=N02n

logN = logNo + nlog2

n=(logN- logNo )/log2=[log(N/N0)]/log2

חישוב זמן הדור וקצב חלוקה

g=t/n

t=gn =g (logN- logNo )/log2 =g [log(N/N0)]/ log2

log(N/N0)= (t log2 )/g

Log N = logNO+ t(log2)/g

slide26
בשעה 6:00 נזרעו במצע נוזלי 5,000 חיידקים. פאזת ההמתנה (lag) ארכה שעתיים, ובשעה 14:30כשמספר החיידקים בתרבית היה 41 מיליון הורידו את הטמפרטורה וגידלו את החיידקים עד לשעה 17:30, אז היה מספר החיידקים 3.36 x 108. פי כמה השתנה קצב הגידול לאחר הקירור?

μ1=

μ2=

slide27
בשעה 6:00 נזרעו במצע נוזלי 5,000 חיידקים. פאזת ההמתנה (lag) ארכה שעתיים, ובשעה 14:30כשמספר החיידקים בתרבית היה 41 מיליון הורידו את הטמפרטורה וגידלו את החיידקים עד לשעה 17:30, אז היה מספר החיידקים 3.36 x 108. פי כמה השתנה קצב הגידול לאחר הקירור?

log(N/N0)= (t log2 )/g

N0 = 5 x 103

N1 = 41 x 106

N2 = 3.36 x 108

t1 = 6.5 h

t2 = 3 h

slide28
ההבדל בין גידול במעבדה לטבע

*במעבדה המערכת היא בד"כ סגורה, ללא תוספת או איבוד תאים-מאוד נדיר בטבע.

*אין טורפים או תחרות על מזון עם מיקרואורגניזמים אחרים בסביבה

*חסרים יחסי גומלין הדדיים

*פחות שינויים פיזיקליים יחסית לטבע

ad