slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Иммунологические маркеры развития перинатальных инфекций PowerPoint Presentation
Download Presentation
Иммунологические маркеры развития перинатальных инфекций

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 29

Иммунологические маркеры развития перинатальных инфекций - PowerPoint PPT Presentation


  • 201 Views
  • Uploaded on

Иммунологические маркеры развития перинатальных инфекций. Долгих Т.И., Шелев М.В., Тирская Ю.И., Белкова Т.Н. Инфекционная перинатальная патология. За последние 7 лет в г. Омске:

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Иммунологические маркеры развития перинатальных инфекций' - lynna


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1

Иммунологические маркеры развития перинатальных инфекций

Долгих Т.И., Шелев М.В., Тирская Ю.И., Белкова Т.Н.

slide2

Инфекционная перинатальная патология

  • За последние 7 лет в г. Омске:
  • Отмечается рост перинатальных потерь с увеличением доли инфекций в их структуре (увеличение показателя несостоявшегося выкидыша с 7,3 до 8,8 на 100 родов)
  • Отмечается высокий уровень антенатальной смертности (среднемноголетний показатель 4,9 на 1000 родившихся живыми и мертвыми).
  • На фоне снижения младенческой смертности остается высокой младенческая заболеваемость. Отмечается выраженный рост заболеваемости внутриутробными инфекциями доношенных новорожденных (Тпр.=9,0%; р<0,05).
  • Возросла частота случаев задержки внутриутробного развития плода (ЗВУР) .
  • В формирование перинатальной патологии значительный вклад вносят герпесвирусы с повышением значимости ВЭБ, ВГЧ 6 типа, вирусно-бактериальных ассоциаций.
slide3

Инфекционная перинатальная патология

  • Преобладание малосимптомного течения перинатальной инфекции осложняет постановку диагноза.
  • Продолжается поиск эффективных маркеров реализации внутриутробной инфекции у плода и новорожденного
  • Необходимо разработать методологическую основу регионально ориентированной программы эпидемиологического мониторинга за инфекционной перинатальной патологией.
  • Целесообразна разработка тактики ведения женщины и новорожденного на основе персонифицированного подхода к мониторингу и терапии.
  • Цель: разработка диагностических и прогностических критериев развития внутриутробной инфекции для оптимизации диагностики и лечения женщин и новорожденных с данной патологией
slide4

Консенсус между специалистами

по вопросам диагностики: как его достичь?

1. Работать вместе над решением клинических задач;

2. Знать и рационально использовать потенциал лаборатории.

Клиницисту надо решить: что исследовать, для чего и каким методом?

КАЖДОМУ ТЕСТУ – СВОЕ МЕСТО!

Медицинской сестре и лаборанту – обеспечить преналитическйи этап

Специалисту КДЛ – предложить оптимальный алгоритм, обеспечить достоверность и быстроту выполнения анализа, оказать помощь в интерпретации результатов

slide5

Фенотипирование клеток

Возможности лаборатории

  • Использование микробиологических методов:

- Бактериологический посев на микрофлору

- Бакпосев на грибы с определением чувствительности

  • Внедрение новых лабораторных технологий:

- ПЦР, ИФА, РИФ, в т.ч. на основе биочипов

  • Иммунохимические метод

- Иммуноблот (Line-blot)

  • Широкое внедрение бесприборных методов диагностики
  • Возможность одновременной и оперативной комплексной диагностики группы инфекций
  • Оценка иммунорезистентности с помощью проточной цитометрии и уровня цитокинов
slide7

Степень активации клеточного иммунитета

Степень активации клеточного иммунитета

HLA-DR – активация иммунных клеток.

Возможные комбинации: CD3+/ HLA-DR, CD4+/ HLA-DR, CD8+/ HLA-DR, CD14+/ HLA-DR, CD5+/19+/HLA-DR

slide8

Герпесвирусные инфекции:лабораторная диагностика

Исследуемый материал

Метод

Назначение метода

Этиологическая расшифровка HSV-1\2-, CMV-, EBV-, HHV-6 -инфекций

  • - Соскобы из очагаинфекции(глаза, зев, уретра, цервикальныйканал, кожные покровы)
  • -Лейкоцитарная взвесь
  • Ликвор(при поражении мозга)
  • Ткани элиминированныхплодов
  • Плацента
  • _________________________
  • Сыворотка крови (ИФА, ИБ)

ДетекцияДНК вирусов

ПЦР

Выявлениеантигенов

Вирусов

РИФ

  • IgM, IgG, ИА- IgG
  • IgA (!)
  • Антителак белкам вируса (ИБ)
  • В ликвореIgG(LSQ/CSQ)

ИФА

Иммуноблот

slide9

Токсоплазмоз (лабораторная диагностика)

Исследуемый материал

Назначение метода

Метод

Этиологическая расшифровка

ПЦР

или РИФ

Кровь,ликвор, биоптаты,

ткани погибших плодов, плацента

Детекция ДНК /антигенов

ИФА,

Иммуноблот

(фазы I, II, III,IV)

  • Выявление антител: -IgM,IgA,IgG
  • IgGнизкоавидные
  • -IgA и IgG-avidity к ROP1, MAG1, GRA7,GRA8,SAG1

ИФА(ликвор)

  • IgG
  • LSQ/CSQ=IgG/(ликвор) / IgG(сыворотка) (>1,5 !)
slide10
Заболевание вызывает яркие высыпания на коже (краснухоподобный синдром) и артропатии,, анемию и апластический криз.

Трансплацентарная передача возможна в 33% случаев формирует многоводие, водянку плода, тяжелые анемии, поражение миокарда. Возможна внутриутробная гибель плода(в 25% случаев)

Может приводить к прогрессирующей гидроцефалии (из ликвора выделяется ДНК парвовируса В19) (журнал «Детские инфекции», 2010. - № 4).

Парвовирусная инфекция В19

  • Парвовирус В19 – это малого размера ДНК вирус, который быстро размножается и в основном поражает незрелые формы эритроцитов.
  • Исследуемый материал – кровь, ликвор. Основные методы – ПЦР и ИФА
slide11

Объем исследований

I . Исследование плаценты женщин, родивших детей с ВУИ (n=598)

II . Исследование тканей погибших эмбрионов/плодов (n=746)

III. Комплексное поэтапное обследование женщин с внутриутробной гибелью плода

IV. Обследование женщин с преэклампсией различной степени тяжести с наличием инфекции (n=115)

V . Обследование новорожденных с ВУИ и гипоксией мозга (n=104)

V I. Обследование пар «мать-ребенок» (n=302)

slide12

Женщины, родившие детей с ВУИ: результаты исследования плаценты (ПЦР; %)

slide13

Внутриутробная гибель плода

В формировании патологии плодав I триместре беременности установлена наиболее важная роль принадлежит бактериальной микрофлоры(Staph., E.coli),во II триместре– U.urealyticum(в виде микст-инфекции),в III триместре – вирусам.

Listeriaвстречается с частотой17% и 20% при гибели плодав I и во II триместрах.

ВоII триместре микст-инфекция вызывает гибель плодав 60,05% случаев (в 1,6 раза чаще, чем вI триместре).

Установлена роль вирусов:EBV (22,5% и 16,7%), CMV (16,2% и 13,5), HSV-1/2 (12,3% и 10,3%), Rotavirus (28,5% и 15,6%), Rubella (14,6% и 9,8%), PV B19 (3,2% и 9,5%) – в I и во IIтриместрах

ДНК T.gondii обнаруженав 12,4% и в 17,5%.

slide14

Женщины с внутриутробной гибелью плода

1 этап – оказание неотложной помощи и установление факторов риска* (стационар):

  • Прогностические критерии развития системной воспалительной реакции:
  • снижение уровня РАИЛ, ИЛ-10 и бактерицидного гуморального фактора лактоферрина (при вирусной и вирусно-бактериальной инфекции) при неизмененном уровне провоспалительных цитокинов - ФНО-α и ИЛ-1β.
  • Повышение концентрации РАИЛ в течение первых суток после элиминации погибшего эмбриона/плода является критерием гнойно-воспалительного поражения плодного яйца и децидуальной ткани, что требует проведения адекватной стандартной терапии с учетом биотопа половых путей женщины.

__________________________________________

* - Утверждена медицинская технология

slide15

Женщины с внутриутробной гибелью плода

1 этап – оказание неотложной помощи и установление факторов риска* (продолжение):

  • наличие мертвого плода 5 недель и более (ведущий фактор);
  • наличие вирусно-бактериальной или бактериальной инфекции;
  • повышенное содержание D-димера и гомоцистеина.
  • Разработана тактика ведения женщин, основанная на применении неинвазивных методов удаления внутриутробно погибших плодов с использованием препаратов (простагландин Е2 и F2α), что позволило снизить количество органоуносящих операций в 5 раз и предотвратить материнскую смертность
  • __________________________________________________
slide16

Клинико-лабораторный мониторинг и прегравидарная подготовка

  • 2 этап (амбулаторно-поликлинический)
  • Выявление причинно-факторных связей у женщин с невынашиванием.
  • Расширенная этиологическая расшифровка.
  • Клинико-лабораторный мониторинг с оценкой системы гемостаза и определением полиморфизмов генов системы гемостаза и врожденного иммунитета.
  • Оценка интерфероновой системы (при герпесвирусных инфекциях)
  • Коррекция нарушений и адекватная прегравидарная подготовка.
  • Результаты:
  • Привело к снижению преждевременного прерывания беременности в 3,7 раза (до 18,7%), антенатальной гибели плода –в 79 раз (до 0,8%).
  • _________________________________
  • * - Утверждена медицинская технология «Тактика ведения беременных с синдромом потери плода (клинико-лабораторное обоснование)»
slide17

VI.Иммунологические факторы при преэклампсии

  • При обследовании 115 беременных с преэклампсией установлено наличие достоверной прямой связи уровня провоспалительного цитокина TNF-αи IFN-γ:
  • со степенью тяжести преэклампсии (r = 0,38 и r = 0,46 соответственно);
  • с уровнем панкреатической амилазы (r = 0,35 и r = 0,53 соответственно);
  • с уровнем панкреатической липазы (r = 0,37 для TNF-α);
  • с уровнем D-димеров (r = 0,37 и r = 0,41 соответственно);
  • с активностью АЛТ и АСТ (r = 0,39, r = 0,37 и r = 0,59, r = 0,43 соответственно).
  • При вирусно-бактериальной микст-инфекции имеются более выраженные нарушения со стороны цитокиновой системы, системы гемостаза, печени и поджелудочной железы
slide18

Дополнительные лабораторные тесты при преэклампсии

Резюме:

1. Одним из факторов, способствующих усугублению преэклампсии, является повреждение поджелудочной железы за счет усиления процессов перекисного окисления липидов и оксидативного стресса, что может быть обусловлено падением антиоксидантной защиты.

2. Усугублению панкреатической дисфункции и, возможно, панкреатита с ферментативной токсемией, по-видимому, способствует и сдвиг продукции цитокинов в сторону провоспалительных.

3. У беременных с тяжелой степенью уровеньTNF-αи IFN-γимеет достоверную связь с основными клинико-лабораторными показателями и уровнем панкреатической амилазы и липазы на фоне снижения антиоксидантной защиты

slide19

IV. Женщины, родившие детей с ВУИ

  • Состояние иммунной системы женщин данной группы характеризовалось:
  • достоверным повышением содержания лимфоцитов с фенотипом CD3+/ CD16+ CD56+, CD3+/CD4+и снижением CD3+/CD8+
  • Высокий уровень Т-NK отмечался у женщин при гематогенном пути инфицирования герпевирусами
  • Повышением уровня провоспалительных цитокинов (TNFα, IL-1β)
  • Снижением уровня противовоспалительных цитокинов (IL-10)
slide20

V. Реализация ВУИ у новорожденных

  • Доказано наличие напряженности иммунитета у детей с верифицированной инфекцией уже в периоде внутриутробного развития, причем развитие иммунного ответа формируется в основном за счет компонентов врожденного иммунитета – цитокинов.
  • Наиболее значимыми критериями реализации внутриутробной инфекции у новорожденных независимо от срока гестации являетсяуровень активированных моноцитов и хемокина интерлейкина-8.
slide21

Уровень цитокинов в плазме крови новорожденных с ВУИ (2А) и новорожденных с перинатальным поражением мозга гипоксического генеза (2Б), пг/мл

slide22

Распределение лимфоцитов периферической крови с использованием моноклональных антител против СD14 и CDHLA-DR, меченых FITC и PE, в группах 1А и 1Б (%).

slide23

VI. Стратификация риска развития ВУИ

  • Включает оценку прогностических факторов:
  • 1. Осложненный акушерско-гинекологический анамнез:
  • самопроизвольные аборты,
  • неразвивающаяся беременность,
  • рождение детей с врожденными аномалиями или ВУИ,
  • преждевременные роды,
  • перинатальная гибель плода.
  • 2. Наличие очагов экстрагенитальной инфекции:
  • мочевыделительной системы (хронический пиелонефрит, цистит).
  • 3. Наличие вирусно-бактериальной инфекции и активной герпесвирусной инфекции.
  • 4. Осложненное течение гестационного процесса:
  • рецидивирующая угроза прерывания беременности,
  • воспалительные заболевания нижнего отдела гениталий,
  • наличие хориоамнионита в родах
slide24

Стратификация риска развития ВУИ (продолжение)

  • Ультразвуковые маркеры ВУИ :
  • задержка развития плода в сочетании с изменением количества околоплодных вод,
  • множественные кальцинаты плаценты,
  • утолщение плаценты,
  • взвесь в околоплодных водах,
  • нарушение плодово-плацентарного кровотока,
  • многоводие/маловодие.
  • 5. Иммунологические маркеры реализации ВУИ :
  • Повышение провоспалительных цитокинов (IL–1β, ФНО, IL–8, IL–6),
  • Снижение продукции противовоспалительного цитокина IL–10, IFN-γ
  • 6. Предикторы развития осложнений при беременности :
  • Нарушения в системе гемостаза
  • Повышение уровня цитокинов (IL–1β, ФНО, IL–8) и лактоферрина,
  • Снижение продукции противовоспалительного цитокина IL–10 и IFN-γ
  • Повреждение поджелудочной железы (ферментемия)
  • ВЫВОД:
  • Наиболее значимыми критериями развития ВУИ (p*16<-0.05) являются:
  • бактериальный вагиноз + воспалительные заболевания органов малого таза;
  • утолщение плаценты + синдром задержки развития плода;
  • вирусно-бактериальная микст-инфекция;
  • повышение IL–1β >19,25 pg/ml и ФНО > 24,35 pg/ml.
slide25

Установлены маркеры риска развития ВУИ(данные по программе R_MED)

Количественные:

Т-лимф CD3+ p=0.052 Среднее: 64.45, 69.570 C

Т-хел CD3+ CD4+ p=0.001 Среднее: 28.323, 37.558 M-У

Молекулы адгезии p=0.019 Среднее: 51.85, 66.1 C

ИРИ p=0.001 Среднее: 0.9483, 1.4929 M-У

IgG p=0.043 Среднее: 9.95, 13.333 M-У

ИЛ-10 p=0.065 Среднее: 2.2115, 5.3538 M-У

ИЛ-1βр=0.0019 Среднее: 507, 229 М-У

ИЛ-8 р=0,003 Среднее: 64.4, 52.5 М-У

ФНО р=0,001 Среднее: 61.1, 47.2 М-У

Категориальные:

  • "p= 0.080
  • Методыстатистического анализа:
  • построение «дерева решений»:
  • линейного дискриминантного анализа

3. метода опорных векторов

Свидетельство о регистрации программы для ЭВМ № 2011614225 «Статистический анализ клинико-лабораторных данных для прогнозирования риска развития патологии (R_MED)»

slide26

С помощью прогностической таблицы рассчитывается риск ВУИ в баллах

Менее 13 баллов:

низкий риск

Более 13 баллов – высокий риск

Исследование содержания

цитокинов IL-1β, ФНО

Низкий риск:

ФНО<24,35 pg/ml;

IL-1β<19,25 pg/ml

Высокий риск

(ФНО>24,35 pg/ml ; IL-1β>19,25 pg/ml )

Расширенный спектр

лабораторных исследований

для верификации возможных патогенов

Профилактика плацентарной

недостаточности

При верификации возбудителя

этиотропное лечение, профилактика ПН

При отсутствии возбудителя:

профилактика ПН

Здоровый

ребенок

Внутриутробное

инфицирование

ВУИ

Здоровый

ребенок

slide27

Алгоритм ведения недоношенных новорожденных

(из группы высокого риска по ВУИ)

оценка уровня цитокинов в первые сутки после рождения

(IL-8; IL-1β; лактоферрин)

IL-8: ↑34,92 pg/ml

IL-8: ↓34,92 pg/ml

отсутствие ВУИ

IL-1β

Лактоферрин

Лактоферрин:

↑346,6 нг/л

риск инфицирования

новорожденного

Лактоферрин:

↓346,6 нг/л

риск ВУИ

IL-1β:

↓4,1 pg/ml

риск ВУИ

IL-1β:

↑4,1 pg/ml

риск инфицирования

новорожденного

этиологическая верификация

этиотропное лечение

динамическое

наблюдение

динамическое

наблюдение

slide28

Алгоритм ведения доношенных новорожденных

(из группы высокого риска по ВУИ)

оценка уровня цитокинов в первые сутки после рождения

(IL-8; ФНО)

IL-8: ↑25,57 pg/ml

ВУИ

IL-8: ↓25,57 pg/ml

IL-8:5,69-25,57 pg/ml

этиологическая верификация

этиотропное лечение

IL-8: ↓5,69 pg/ml

отсутствие ВУИ

ФНО

ФНО: ↑14,37 pg/ml

риск инфицирования

новорожденного

ФНО: ↓14,37 pg/ml

отсутствие ВУИ

динамическое наблюдение

slide29

Благодарю завнимание !

  • Для контактов: 644001,г.Омск, 20 лет РККА, д.15.
  • Телефон: 8(3812)36-23-11, 37-03-55, 37-03-43
  • E-mail: dolgih-ti@mail.ru