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EMOPOIESI E CELLULE STAMINALI. Yolk Sac. Periodo epato-splenico (12a settimana). Umbilical cord. Spleen. Adult bone marrow. Fetal liver. Periodo midollare (20a settimana). Periodo epatico (6a settimana). Periodo mesoblastico (sacco vitellino). Ontogenesi dell’Emopoiesi.

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Presentation Transcript
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EMOPOIESI E

CELLULE

STAMINALI

slide2

Yolk Sac

Periodo epato-splenico

(12a settimana)

Umbilicalcord

Spleen

Adult bone marrow

Fetal liver

Periodo midollare

(20a settimana)

Periodo epatico

(6a settimana)

Periodo mesoblastico

(sacco vitellino)

Ontogenesi dell’Emopoiesi

slide3

MIDOLLO OSSEO

Il midollo osseo si situa nelle

nicchie delimitate dalle

trabecole della spongiosa

ossea.

Il midollo osseo è un tessuto

da gelatinoso a semifluido.

slide6

LE CELLULE STAMINALI

  • CELLULE CAPACI DI DIVIDERSI (AUTORINNOVAMENTO) PER

TUTTA LA VITA DI UN ORGANISMO

  • IN DETERMINATE CONDIZIONI SONO IN GRADO DI DIFFEREN-

ZIARSI DANDO ORIGINE ALLE CELLULE MATURE DI UN OR-

GANISMO;

  • IN BASE AL POTENZIALE DIFFERENZIATIVO POSSONO ESSE-

RE DISTINTE IN:

TOTIPOTENTI LO ZIGOTE (UOVO FECONDATO)

PLURIPOTENTI  LE CS EMBRIONALI (da cui deri-

rivano le cellule del MESODERMA

ECTODERMA, ENDODERMA)

MULTIPOTENTI  LE CS DELL’ADULTO

slide8

PROPRIETA’ DELLA CELLULA STAMINALE EMOPOIETICA:

  • capacità di “self-renewal”
  • capacità di dare origine a progenitori multipotenti
  • capacità di dare origine a precursori “committed”
  • (differentiation plasticity)
  • Capacità di engraftment
  • Plasticità (developmental plasticity)

La cellula staminale emopoietica

slide9

PLASTICITA’ DELLE CELLULE STAMINALI

?

CS indifferenziate

?

Trans-differenziazione

?

Fusione del nucleo

slide10

MICROAMBIENTE MIDOLLARE

Componente vascolare

Cellule reticolari

Struttura nervosa

Adipociti, fibroblasti,

Macrofagi

Cellule stam. mesenchimali

Componente

cellulare

Fibre reticolari/collagene

Prolungamenti cell. reticolari

Proteine d’adesione

proteoglicani

Matrice

extracellulare

slide13

SELF RENEWAL

COMMITTMENT

PRECURSOR EXPANSION

TERMINAL DIFFERENTIATION

G-CSF

CFU-G

Granulocyte

SCF, IL6 IL3, GM-CSF

Myeloblast

M-CSF

CFU-GM

CFU-GEMM

CFU-M

Monocyte

Monoblast

SCF, TPO, IL3, GM-CSF

TGFb, TNFa, INFg, LIF

Platelets

CFU-MEG

Megakaryoblast

Epo SCF

Proliferating staminal cell

Epo

Epo

GM-CSF IL3

BFU-E / CFU-E

Red cells

Erythroblast

Pro-erythroblast

Quiescent Staminal cell

IL1 IL6

IL6 - antigen

SCF, IL1, IL3, IL6, Flt3 ligand, IL11

Limphoid progenitor

Plasma cell

B lymphocyte

Normal hematopoiesis

slide14

MIDOLLO OSSEO

IMMISSIONE IN CIRCOLO DEGLI ELEMENTI MATURI

slide15

STRUMENTI E PROCEDURE

DIAGNOSTICHE

LA BIOPSIA MIDOLLARE

slide20

INDICAZIONI ALLA BIOPSIA MIDOLLARE

  • Leucocitosi e/o Leucopenia ± anemia ± piastrinopenia
  • (sospetta leucemia acuta, mielodisplasia o aplasia midollare)
  • Leucocitosi e/o piastrinosi
  • (sospetta sindrome mieloproliferativa cronica tipo LMC o TE)
  • Stadiazione/esordio malattia linfoproliferativa
  • Disordini delle Ig (componenti monoclonali)
  • Anemia macrocitica o normocitica non altrimenti spiegabili
  • Sospetta tesaurismosi
  • In caso di alcune infezioni (TBC, Leishmania, Malaria)
slide21

STRUMENTI E PROCEDURE

DIAGNOSTICHE

LA BIOPSIA OSSEA

slide24

INDICAZIONI ALLA BIOPSIA OSSEA

  • Pancitopenia*
  • Nel caso di “punctio sicca”
  • Sindromi mieloproliferative croniche (LMC, TE)*
  • Sindromi linfoproliferative croniche, tipo LLC*
  • Stadiazione/esordio di Linfoma*
  • Sospetta infiltrazione da neoplasia solida o
  • malattia granulomatosa*
  • Disordini delle Ig*

* complementare alla biopsia midollare

slide25

STRUMENTI E PROCEDURE

DIAGNOSTICHE

L’ESAME EMOCROMOCITOMETRICO

slide28

STRUMENTI AUTOMATIZZATI PER L’ESECUZIONE

DELL’EMOCROMO

Gli “analyzer” automatici sono costituiti da:

Un campionatore che preleva l’esatta quantità di sangue

Un sistema di circuiti che distribuiscono il campione nei

diversi moduli dell’apparato operanti le singole operazioni

programmate

I principi ed i metodi su cui si basano sono:

Metodi ottici (scatter di luce): strumenti Ortho e Technicon

Impedenza elettrica (Coulter) e/o radio-frequenza

impedenza + radio-frequenza + scatter di luce

slide31

EMOCROMO

L’esame emocromocitometrico determina i seguenti

parametri:

conta degli elementi corpuscolati del sangue:

leucociti (WBC), globuli rossi, piastrine

concentrazione dell’emoglobina (Hb)

ematocrito (Hct)

indici eritrocitari (MCV, MCH, MCHC)

conta differenziale dei leucociti (granulociti neutrofili, basofili, eosinofili, linfociti, monociti)

slide32

EMOGLOBINA, EMATOCRITO ED

INDICI ERITROCITARI

Emoglobina (Hb) unità di misura= gr/dl

N= ≥ 13.5 gr/dl (M) ≥12 gr/dl (F)

Determinazione dell’Hb:

Diluente per lisi degli eritrociti aggiunto a volume noto di sangue

Determinazione della concentrazione di Hb in base alla

densità ottica della soluzione di Hb o di un suo derivato ad

una determinata lunghezza d’onda

Lettura con comuni tecniche colorimetriche o

con strumenti automatizzati

slide33

EMOGLOBINA, EMATOCRITO ED

INDICI ERITROCITARI

Ematocrito (Hct) unità di misura = %

N = 40-45% (M) 36-42% (F)

Determinazione dell’Hct =

volume massa eritrocitaria/volume di plasma

Centrifugazione del campione a velocità tale da ottenere grado

standard di impaccamento degli eritrociti (g.r.)

Determinazione della altezza raggiunta dai g.r.

in provette graduate

slide34

EMOGLOBINA, EMATOCRITO ED

INDICI ERITROCITARI

MCV = volume corpuscolare medio unità di misura = femtolitri

Hct x 100 / numero g.r. (prime 2 cifre)

MCH = emoglobina corpuscolare media unità di misura = pg

Hb x 100 / numero g.r. (prime 2 cifre)

MCHC = conc. corpuscolare media di Hb unità di misura = gr/dl

Hb x 100 / Hct

slide35

ESAME MORFOLOGICO DEL SANGUE PERIFERICO

Esecuzione dello striscio

Colorazione dello striscio

Esame microscopico

slide36

COLORAZIONE DELLO STRISCIO

Metodica May-Grünwald-Giemsa

Costituenti cellulariColorazione

Nucleo blu violetto

Citoplasma roseo (eosinofilo)

blu (basofilo)

grigiastro (policromatofilo)

Granulazioni rosa chiaro (neutrofile)

rosso arancio (eosinofile)

viola scuro (basofile)

rosso vivo (azurofile)

slide37

ESAME MICROSCOPICO

leggibilità del preparato

confronto con dati emocromo

area adeguata per esame

Ingrandimento

piccolo

Ingrandimento

intermedio

morfologia leucociti e g.r.

fini dettagli citologici:

granulazioni, inclusi citoplasma

aspetto del nucleo

Ingrandimento

maggiore

slide39

ESAME MORFOLOGICO DEL SANGUE PERIFERICO

Indicazioni

  • Pazienti con emopatie note
  • Pazienti in CHT o RT
  • Neonati
  • Alterazione dell’emocromo
  • Segnale di allarme (flag) dello
  • strumento
  • Modificazioni significative rispetto
  • ad esami precedenti
slide40

SANGUE PERIFERICO

ERITROCITI

PIASTRINE

GRANULOCITI

EOSINOFILI

GRANULOCITI

NEUTROFILI

GRANULOCITI

BASOFILI

slide41

SANGUE PERIFERICO

MONOCITI LINFOCITI