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第十六章 人体组织的检验. 第一节 概述. 人体组织是重要的法医物证之一。在凶杀、强奸、空难、纵火、斗殴、意外事故、交通肇事等现场,常遗留有组织、器官、骨骼碎片,以及牙齿、指甲、毛发等。通过对各类人体组织的遗传标记分析,可以 重建案件 现场,提供侦察 线索 ,确定犯罪嫌疑人,为审判提供科学 证据 。. 人体组织基本结构单位和功能单位是 细胞 。根据法医物证检验的特点将人体组织分为软组织 ( 皮肤、肌肉、脏器等 ) 、硬组织 ( 骨骼、牙齿 ) 和角化组织 ( 毛发、指甲、趾甲等 ) 。法医物证鉴定可通过对人体组织遗传标记的测定而达到 个人识别和亲子鉴定 的目的。.
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第一节 概述 • 人体组织是重要的法医物证之一。在凶杀、强奸、空难、纵火、斗殴、意外事故、交通肇事等现场,常遗留有组织、器官、骨骼碎片,以及牙齿、指甲、毛发等。通过对各类人体组织的遗传标记分析,可以重建案件现场,提供侦察线索,确定犯罪嫌疑人,为审判提供科学证据。
人体组织基本结构单位和功能单位是细胞。根据法医物证检验的特点将人体组织分为软组织(皮肤、肌肉、脏器等)、硬组织(骨骼、牙齿)和角化组织(毛发、指甲、趾甲等)。法医物证鉴定可通过对人体组织遗传标记的测定而达到个人识别和亲子鉴定的目的。人体组织基本结构单位和功能单位是细胞。根据法医物证检验的特点将人体组织分为软组织(皮肤、肌肉、脏器等)、硬组织(骨骼、牙齿)和角化组织(毛发、指甲、趾甲等)。法医物证鉴定可通过对人体组织遗传标记的测定而达到个人识别和亲子鉴定的目的。
在涉及人身伤亡的案件中,除常见的血痕、精斑、唾液斑外,人体组织也是重要的个人识别检材。在涉及人身伤亡的案件中,除常见的血痕、精斑、唾液斑外,人体组织也是重要的个人识别检材。 • 人体组织只要没有腐败,就可以从中提取DNA进行鉴定。毛发、骨、指(趾)甲,属于角化组织或硬组织,对腐败有较高的抵抗力,往往能保存很长的时间,在个体识别鉴定中有实用价值。对一些高度腐败或白骨化的尸体,骨、指(趾)甲是惟一能保存下来的人体组织,通过对它们的核DNA分析可以进行个人识别,而陈旧骨和指(趾)甲、毛干则可通过线粒体DNA分析进行身份鉴定。
第二节 毛发检验 • 一、毛发的特点 • (一)毛发的结构 • 毛发分为毛干和毛根两部分。 毛干是露出皮肤之外的部分,即毛发的可见部分,由角化细胞构成。组织可分为表皮、皮质及毛髓三层。毛干由含黑色素的细长细胞所构成,胞质内含有黑色素颗粒,黑色素使毛呈现颜色。黑色素含量的多少与毛发的色泽有关。
毛根是埋在皮肤内的部分,是毛发的根部。毛根长在皮肤内看不见,并且被毛囊包围。毛囊是上皮组织和结缔组织构成的鞘状囊,是由表皮向下生长而形成的囊状构造,外面包覆一层由表皮演化而来的纤维鞘。毛根和毛囊的末端膨大,称毛球。毛球的细胞分裂活跃,是毛发的生长点。毛球的底部凹陷,结缔组织突入其中,形成毛乳头。毛乳头内含有毛细血管及神经末梢,能营养毛球,并有感觉功能。如果毛乳头萎缩或受到破坏,毛发停止生长并逐渐脱落。毛囊的一侧有一束斜行的平滑肌,称为立毛肌。立毛肌一端连于毛囊下部,另一端连于真皮浅层,当立毛肌收缩时,可使毛发竖立。有些小血管会经由真皮分布到毛球里,其作用为供给毛球毛发部分生长的营养。毛根是埋在皮肤内的部分,是毛发的根部。毛根长在皮肤内看不见,并且被毛囊包围。毛囊是上皮组织和结缔组织构成的鞘状囊,是由表皮向下生长而形成的囊状构造,外面包覆一层由表皮演化而来的纤维鞘。毛根和毛囊的末端膨大,称毛球。毛球的细胞分裂活跃,是毛发的生长点。毛球的底部凹陷,结缔组织突入其中,形成毛乳头。毛乳头内含有毛细血管及神经末梢,能营养毛球,并有感觉功能。如果毛乳头萎缩或受到破坏,毛发停止生长并逐渐脱落。毛囊的一侧有一束斜行的平滑肌,称为立毛肌。立毛肌一端连于毛囊下部,另一端连于真皮浅层,当立毛肌收缩时,可使毛发竖立。有些小血管会经由真皮分布到毛球里,其作用为供给毛球毛发部分生长的营养。
(二)毛发的形态与颜色 • 毛发的粗细不同,与性别、个体、部位和种族有关。男子一般比女子粗,有人测定过头发约在70~100μm之间。毛发的长度也不等,毳毛一般在5~6mm以下,超过10mm以上者很少;短毛如睫毛、眉毛、鼻毛等,一般长度也不超过10mm。头发的长度最长,尤其是女子留长发者,有的可长到90~100cm,甚至150cm,据文献记载最长的达3.2m。 • 通常毛发可分成硬毛与毳毛两类,硬毛粗硬,具有髓质、颜色较深。
(三)毛发的分布及分类 • 毛发在人体分布很广,几乎遍及全身,只有掌跖、指趾屈面、指趾末节伸面、唇红区、龟头、包皮内面、小阴唇、大阴唇内侧及阴蒂等处无毛发分布。 • 全身的毛发数目尚无精确统计,但有人曾测定过头发约有10万根左右。身体各部位毛发的密度不同,随性别、年龄、个体和种族等而异。一般头部最密,头顶部约为300根/cm2,后顶部约为200根/cm2,手背处则很少,只有15~20根/cm2,在前额和颊部毛发密度为躯干和四肢的4~6倍。一般认为毛囊的密度是先天性的,到成人期不能增添新的毛囊数。
(四)毛发的生长周期 • 毛发的生长速度是不一致的,主要与下列因素有关: (1)部位 头发的生长速度最快,每天生长0.27~0.4mm,腋毛每天生长0.21~0.38mm,按此计算,头发大约1个月长1cm左右,另外颏部毛发每日生长0.21~0.38mm,其他部位约0.2 mm。 (2)性别 生长速度:头发 女>男,腋毛 男>女,眉毛 男=女,全身毛发平均生长速度 男>女。 (3)年龄 头发于15~30岁,生长最为旺盛,老年头发生长缓慢,两性差异消失。
(4)季节 夏季生长快于冬季。 (5)昼夜 白天生长较夜间快。 (6)与机体健康状况有平行关系。 (7)与毛囊的粗细成正比例 与毛发生长相比,一年内毛发在正常情况下脱落约70g,而每天脱落的头发一般不超过100根。
毛发有保护皮肤和保持体温的作用。一个人的头发有10万根左右,夏天防晒,冬天防冷,还能减少头部机械损伤。眉毛和睫毛可以防止异物落入眼内,鼻毛可以阻止灰尘侵入。面部、躯干、四肢皮肤上还有许多细小的“汗毛”,也同样有保护作用。毛发有保护皮肤和保持体温的作用。一个人的头发有10万根左右,夏天防晒,冬天防冷,还能减少头部机械损伤。眉毛和睫毛可以防止异物落入眼内,鼻毛可以阻止灰尘侵入。面部、躯干、四肢皮肤上还有许多细小的“汗毛”,也同样有保护作用。
(五)毛发的理化性质 • 毛发是人体上皮组织的一部分,含有蛋白质、脂肪、水、金属元素等各种有机物和天然成分。组成毛发的角质蛋白有18种氨基酸,含量较多的有:谷氨酸(19%)、半胱氨酸(15%)、亮氨酸(7%)、脯氨酸(8%)、丝氨酸(12%)、天门冬氨酸(5%)等。毛发中含有多种微量的无机元素,如钙、镁、铝、钠、铁、铅、锡、铜、锌、钾、镍、钴、钡、锶、铬、钼、镉、锰、铅、磷、硫、硒、硼、溴等,其含量具有个体差异,可供个人识别。
二、毛发检验的目的和要求 毛发检验目的是个人识别。毛发的检验要求: 1.是否为毛发。 2.是人毛或动物的毛发。 3.人毛发的部位,损伤及附着物检验。 4.毛发的个人识别。
三、毛发与其他纤维的鉴别 1.肉眼观察典型的毛发有毛尖、毛干和毛根的结构特征,与天然纤维、合成纤维区别明显。 2.显微镜观察人毛或动物毛有毛小皮、皮质、髓质三层结构,纤维无此结构,易于区分。 3.燃烧法纤维易燃,燃烧后一般无特殊臭味,人毛或动物毛燃烧后会发出特殊的臭味。
四、人毛与动物毛的鉴别 (一)毛小皮的形态特征 显微镜下一般观察到7种毛小皮形态。包括棘状鳞片、齿状鳞片、多面型鳞片、鱼形鳞片、环纹型鳞片、多面型鳞片及不规则花环型鳞片。其中不规则花环型鳞片多见于人和一些哺乳动物。人毛毛小皮印痕呈较细而不规则波浪花形或细锯齿状,动物毛小皮形状多变、小皮缘为粗锯齿状。
(二)毛皮质与毛髓质的特征 1.毛皮质 人毛毛皮质较宽,一般占毛干的2/3左右,色素颗粒分布较均匀。动物毛毛皮质较窄,一般占毛干的1/2~1/3,色素颗粒大小不一,分布不均匀。 2.毛髓质 人毛毛髓质不发达,较皮质窄,宽度约占毛干的1/4~1/5,髓质不连续,毛尖和部分毳毛有时髓质缺如。动物毛髓质发达、连续。一般至毛尖部,髓质占毛干的1/3以上。少数动物毛髓质尚可见较完整细胞形态,如兔毛髓质细胞呈砌砖样结构,猕猴毛呈单行扁平细胞排列等。
五、人毛部位的确定 • 1.头发 人体中除刻意蓄胡须外,头发是最长的。因个人喜好不同,民族习惯不同,有短发、长发甚至光头。头发若任意生长可达1.5米以上,平均直径75~100μm,中国人的头发大多呈黑色、黑褐色、褐色及灰白色。直发占大多数,也有部分为卷曲发,毛发横断面为圆形或椭圆形。
2.阴毛 青春期阴毛开始生长。形状多呈S形弯曲或波状,一般3~6cm。直径较头发粗,约为90~140~m,横断面呈椭圆形,髓质常连续、偏心。可附着分泌物,女性经期可附着月经血。 • 3.其他部位的毛发如:眉毛、睫毛、鼻毛一般粗短,长度在lcm左右。
六、毛发的脱落和损伤 (一)自然脱落 毛发有自然生长的周期,生长期停止的毛发,毛球萎缩与毛囊分离,被新生的毛发推出而脱落。因此自然脱落的毛发,毛根完全角化,干燥萎缩,无根鞘附着,根部色素含量较少,用5 %~10 %的亚硝基铁氰化钠溶液染色,无颜色反应。
(二)暴力拔出的毛发 外力拔下的毛发,毛囊组织附着,毛球湿润,毛球下端呈开放状或钩状弯曲。10%亚硝基铁氰化钠浸泡染色呈鲜红色。非角化毛根所含的巯基化合物与亚硝基铁氰化钠作用呈红色。暴力牵拉后毛发被拉长变形直到断离,毛发被拉长,滴加水1~2滴,毛发可自然回缩。毛发的拉伸,梳理可导致毛小皮鳞片翘起或成裂纹,毛发损伤、角蛋白丢失。
(三)热作用损伤 • 毛发在高温情况下可引起色泽变化。温度超过150℃毛发因高热缺水分,出现形态结构的改变。190℃发角质膨胀、熔融、出现气泡。200℃以上黑发变成黑褐色,白发则变成黄色、红色并失去光泽。240℃毛发卷缩,随着温度的升高,毛发则发生炭化。烫发对毛小皮有明显的损伤,可见毛皮质出现小裂缝或气泡,皮质纤维高度扭曲并呈一定角度,毛发干燥,易碎易断。
(四)钝器损伤 • 毛发被钝器作用的部位变宽扁平,皮质纤维分裂,部分断裂或完全断裂。完全断裂的毛发,断端膨大,不整齐,有时呈扇形或阶梯状。未断离的毛发,断端常呈纺锤形膨大,在皮质中出现长形或横形裂纹,皮质细胞断离,伴有毛小皮剥脱。
(五)锐器损伤 • 毛发被剪切或切割,断面形态特征与锐器刃口的锋利程度有关。通常锋利锐器切断毛发,断端平滑整齐,毛干不碎裂、皮质纤维不分裂。刃口不锋利的锐器切断毛发断端呈锯齿状或阶梯状。
七、毛发的个人识别 (一)形态学观察 1.毛发的形态和附着物检查形态学检查在毛发鉴定十分重要。对现场提取毛发或疑似毛发的检材,应观察和记录检材毛发的数量、色泽、长度、形态是否完整以及附着物等。根据附着物的成分可获得有关职业、毛发来源等信息。例如某些特殊来源的尘埃如煤渣、面粉、涂料、油漆、木头碎屑等这些成分有助于推断职业。如毛发上附有月经血、精液、鼻涕可帮助判断毛发的来源部位。
2.毛发结构观察 毛发检材经过洗涤,干燥后即可在显微镜下观察微细结构。有时因毛发色素的干扰,宜作脱色处理。将毛发浸于30%过氧化脱色液中,约10~20min,待毛发颜色变浅。经水洗、干燥后置载玻片上即可镜检。 (1)毛发外形: (2)色素: (3)毛髓质: (4)毛小皮:
(二)毛发的ABO血型测定 ABH血型物质除分布于红细胞及其他体液中,也分布于人体毛发中,毛发是角化组织,不易腐败,血型物质可以长期保存而不易被破坏,可采用解离试验测定毛发的ABH血型物质。解离法测定毛发的ABO血型的原理与基本操作方法与血痕相同。与血痕比较,毛发有两个特征:一是毛发的血型物质较少,其次,毛发中毛小皮没有血型物质,只有髓质和皮质才有 ABH物质。所以,毛发的ABO血型测定技术要求高,检测比血痕困难。
方法:取被检毛发洗净,乙醇脱脂,充分压扁后,剪成0.5~1cm长两份分别置凹玻板内,分别加128倍效价的抗A和抗B血清,室温下吸收1~2h。生理盐水洗涤5~10次。分别加0.1%已知A、B指示红细胞,56℃解离5~8min。将解离液转至玻片上,镜下观察结果并判断毛发的血型。方法:取被检毛发洗净,乙醇脱脂,充分压扁后,剪成0.5~1cm长两份分别置凹玻板内,分别加128倍效价的抗A和抗B血清,室温下吸收1~2h。生理盐水洗涤5~10次。分别加0.1%已知A、B指示红细胞,56℃解离5~8min。将解离液转至玻片上,镜下观察结果并判断毛发的血型。
毛发ABH血型物质测定应注意: (1)毛发必须压扁,充分暴露毛皮质和髓质细胞,才能获得阳性结果。 (2)抗A、抗B血清效价≥128,毛发与抗血清作用的时间不宜过短,有时需要在CC条件下吸收过夜,有利于提高阳性检出率。 (3)洗涤次数是毛发血型测定的关键,否则易造成假阳性或假阴性结果。 (4)毛发血型测定前最好用已知毛发做先行试验,摸索毛发的洗涤次数,结果无误方可进行待测毛发的血型测定。
(三)毛发的红细胞酶型检测 • 新鲜的带有毛根、毛囊的毛发检材可做ESD、GLOI、PGMl、ORM等红细胞酶型分析。
(四)毛发的DNA分析 1.带毛囊的毛发的扩增片段长度多态性分析 (1)毛囊的DNA提取:取带毛囊的毛发数根,用chelex-100法提取DNA。从案件现场获得带毛根的毛发是极为有限的,用chelex-100法提取DNA适用于该类微量物证检材。提取过程中检材不需反复转移,可以避免DNA的丢失,因此该法是提取毛囊中DNA的首选方法。
(2)STR基因座分析:提取DNA经PCR扩增后容易进行STR分型。STR分析微量法医物证检材具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点。用1根带毛囊的毛发就可进行个人识别。带毛囊的毛发的STR分析可选择与血痕、精斑等分析相同的STR基因座。(2)STR基因座分析:提取DNA经PCR扩增后容易进行STR分型。STR分析微量法医物证检材具有灵敏度高、特异性强、操作简便的特点。用1根带毛囊的毛发就可进行个人识别。带毛囊的毛发的STR分析可选择与血痕、精斑等分析相同的STR基因座。 • (3)毛发性别的DNA分析:同其他法医物证检材一样,可通过扩增X-Y染色体的牙釉基因进行毛发性别鉴定。
八、毛发中微量元素分析 毛发是一种代谢活动很低的组织,所含的微量元素可以反应毛发生长期间所摄人微量元素的数量和代谢情况,所以它可以间接反应某一段时间或不同地理环境下微量元素的变化。毛发中含有砷、汞、铁、锌、铅、锰、硒、锶、碘、硅等。许多微量元素能在毛发中保存很长时间,通过测定微量元素的含量和种类的差异可以帮助判断是否中毒及个人识别。如正常人每克毛发中砷的含量0.03~0.32μg,汞的含量4~6μg。如果测定毛发某种元素超出正常范围可帮助推测的生活环境、从事的职业等。毛发微量元素的分析方法有原子发射光谱分析、原子吸收分光光度法、中子活化分析、气相色谱、质谱分析等。
第三节 软组织检验 • 一、软组织的特性 (一)软组织的形态结构 (二)组织的ABH物质分布 (三)各种因素对人体组织的影响 (四)不同组织遗传标记具有同一性
二、软组织检验的目的与要求 组织作为重要的法医物证之一,检验的目的主要是进行个人识别,通过对案件现场组织的检验以解决个体的身份认定。同其他法医生物检材的检验一样,组织的检验首先要确定是否是组织,是人体还是动物的组织,如果是人体组织,需要进行个人识别。
组织比其他生物检材更容易发生自溶和腐败。在提取和送检组织材料时应注意:①尽快送检。②组织检材不能及时送检时应低温保存。或干燥处理,充分干燥后保存。所有的组织材料不宜用甲醛固定。③不同组织中含蛋白酶量不同,自溶和腐败的速率有明显差异,例如肝脏、脾脏中核酸酶丰富,蛋白质、DNA降解较快,因此肝脾一般不作为首先取材。肌肉组织,脑组织等是提取DNA的较理想的检材。组织比其他生物检材更容易发生自溶和腐败。在提取和送检组织材料时应注意:①尽快送检。②组织检材不能及时送检时应低温保存。或干燥处理,充分干燥后保存。所有的组织材料不宜用甲醛固定。③不同组织中含蛋白酶量不同,自溶和腐败的速率有明显差异,例如肝脏、脾脏中核酸酶丰富,蛋白质、DNA降解较快,因此肝脾一般不作为首先取材。肌肉组织,脑组织等是提取DNA的较理想的检材。
三、确定是否是组织 • 四、种属鉴定 • 五、性别鉴定
六、组织块的个人识别 (一)ABO血型测定 1.吸收试验 2.解离试验 3.红细胞粘连试验 4.免疫组化法 5.ABO基因分型
(二)同工酶测定 将人体组织制成匀浆,加样电泳,可测定PGMl,6PGD,ADA,AK,ESD,GLOI, DIA等酶型。 • (三)DNA分析 新鲜组织块、蜡块组织切片中均能提供DNA模板用于DNA多态性分析。
第四节 其他组织检验 • 一、指(趾)甲检验 • 二、骨及牙髓检验 骨骼是个人识别的重要检材。