第 22 章呼吸道病毒

第22章呼吸道病毒 急性呼吸道感染中90%-95%是由病毒引起的。常见的呼吸道病毒有正黏病毒科中的流感病毒、副黏病毒科中的副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒以及腺病毒、风疹病毒、鼻病毒、冠状病毒和呼肠孤病毒等。

呼吸道病毒引起的主要疾病

第一节流感病毒Influenza virus 一、生物学性状 1.由核衣壳、包膜和刺突组成病毒体（1）核衣壳:由核酸、核蛋白和PB1、PB2、PA等三种蛋白质组成。 ① 核蛋白（NP）呈螺旋对称排列。 ②PB1、PB2、PA等三种蛋白质有型抗原特异性。

③核酸为分节段的单股负链RNA，甲型、乙型有8节段，丙型有7个节段，复制中易发生高频重组变异，出现新的亚型。③核酸为分节段的单股负链RNA，甲型、乙型有8节段，丙型有7个节段，复制中易发生高频重组变异，出现新的亚型。

（2）包膜：基质蛋白（M蛋白）有保护核心， 维持形态的作用，具有型抗原特异性，与病毒出芽释放有关。（3）刺突：存在于包膜上，有两种刺突。血凝素（hemagglutinin,HA）神经氨酸酶（neuraminidase,NA)

抗原漂移（antigenicdrift）： 变异幅度小，是连续变异，属于亚型内变异，变异的机理是基因点突变使HA或NA抗原结构发生小变异及人群免疫力选择所造成。抗原转变（antigenicshift）：变异幅度大，属于质变，HA和NA 抗原结构发生变异形成新亚型，变异机理是基因重组的结果。

神经氨酸酶（NA) 1.具有酶活性,有利于成熟病毒芽生释放。 2.为亚型特异性抗原,其抗体能抑制病毒释放。

血凝素 1.凝集鸡的红细胞,血凝现象是病毒增殖指标,其亚单位HA1,HA2均有膜融合作用。 2.血凝现象可被相应抗体抑制,此抗体称血凝抑制抗体,能中和病毒,有保护作用。可利用其鉴定病毒。 3.是甲型流感病毒区分亚型的依据。

（二）分型与变异 1.根据核蛋白（NP）和基质蛋白（M 蛋白）抗原性分为甲、乙、丙三型。 2.根据HA和NA抗原性将甲型分为 H1-3、N1-2亚型。

甲型流感病毒抗原变异情况 亚型名称抗原结构流行年代最初流行地原甲型 H1N1 1918-1957 西班牙亚洲甲型 H2N2 1957-1968 亚洲香港甲型 H3N2 1968-1977 香港香港甲型 H3N2、H1N1 1977- 俄罗斯与新甲型

（三）培养 鸡胚羊膜腔培养。细胞培养用狗肾传代细胞。感染多种动物，如雪貂、小鼠、地鼠、豚鼠等。血凝试验是病毒增长指标。（四）抵抗力弱,对热、消毒剂均敏感。

二、致病性与免疫性 （一）致病性 1.传染源是患者； 2.传播途径为呼吸道； 3.呼吸道粘膜细胞为病毒靶细胞； 4.病毒在细胞间蔓延,不形成病毒血症； 5.病后对同型有1-2年短暂免疫力，以体液免疫为主。

1.标本采集与处理 标本应于疾病早期采集鼻咽拭子为标本，浸入无菌的pH 7．2的肉汤中，分离时培上述充分振荡标本液，置4℃自然沉淀5～10min，取上清液3ml，按每毫升加青霉素250U、链霉素250μg用于分离病毒和病毒抗原或RNA的检测。血清学实验需取双份血清。

2.标本电镜观察球形或丝状病毒颗粒， 球形直径80～120nm，用特异抗体进行免疫电镜观察，提高检出率，敏感性达50％。用荧光标记抗体，在荧光显微镜下观察，敏感性为50％— 90％。 3.直接检测临床标本或细胞培养物中的流感病毒抗原，试验敏感且特异性高，能在30分钟内完成。

4.标本直接核酸检测 32P标记的流感病毒特异性cDNA探针能检出标本中的约lpg的流感病毒RNA。用RT-PCR技术去扩增流感病毒RNA，能鉴定甲、乙、丙三型流感病毒及其亚型。

5.分离培养 可选用传代狗肾细胞(MDCK)培养7-10 天，用红细胞吸附或血凝试验核查，阳性者再用血凝抑制(HI)试验鉴定。用鸡胚培养时，用10—11日龄的鸡胚，初次接种羊膜腔，传代选尿囊腔，孵育2～3天，收获羊水做血凝试验。动物接种以雪貂最为易感。

6.鉴定 血凝试验能证实病毒的存在，甲、乙型流感病毒能凝集人O型、鸡和豚鼠的红细胞用特异性抗体做血凝抑制(H1)试验进行鉴定和分型。也可用中和试验进行分型和亚型。

7.抗体检测 较常用的方法是血凝抑制HI和ELISA 法。敏感、特异，并与随后的亚型的特异性检测有关。

第二节副粘病毒科 副粘病毒科与正粘病毒科的生物学性状相似，为单负链RNA病毒，为150～ 300nm，核衣壳是螺旋对称，有包膜，但包膜刺突与正粘病毒不同。包括副粘病毒属、腮腺炎病毒属和麻疹病毒属等三个属。

一、呼吸道合胞病毒 (RSV) 是引起婴幼儿下呼吸道病最常见的病毒。由于致培养细胞产生融合而得名。儿童对RSV普遍易感，再感染率很高， 2岁儿童都感染过RSV。成人急性感染也很常见，老年人可引起严重肺炎，并发展为成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。

微生物特性 RSV为球形颗粒，直径80～350nm。为单负链RNA，不分节段，螺旋对称，外被包膜，刺突G能吸附宿主细胞，具血凝作用。刺突P是融合蛋白，G与P又是保护性抗原，可产生中和抗体。

面鼠和非洲绿猴是较好的动物模型。 RSV能在多种传代细胞中增殖，引起 CPE及融合细胞。抵抗力不强，在pH 3．0被灭活，5．5最稳定。加温55℃5 ｍin被灭活。

微生物检验 1)免疫荧光法：采用单克隆或多克隆高效价抗体，免疫荧光检查抗原，敏感性高，特异性可达85％-95％。 2)ELISA法：用于快速检测呼吸道分泌物中的RSV抗原，敏感性和特异性均≥90%，可检测存在于细胞表面的抗原，操作简便，结果客观，能快速或自动化检测。

3）病毒分离 能在Hela和HEP-2细胞内增胞有50％— 75％已长成单层时便可接种标本，维持液中适度增加谷氨酰胺，于36℃5％ C02孵箱中培养。3—7天出现CPE，细胞融合形成多核巨细胞，胞质内可见嗜酸性包涵体。作IF试验进行鉴定。

4)核酸检测 RT-PCR技术。用病人鼻咽抽吸物或从受染细胞提取RNA，以F蛋白基因为PCR扩增的模板，设计引物进行PCR扩增以纯化后测序。 5）抗体检测检测患者血清中抗RSV抗体(IgG、IgM)。需双份血清有4倍增高可诊断。血清中IgM抗体，可协助早期诊断。

二、副流感病毒 1.属副粘病毒亚科，具有神经氨酸酶，引起上呼吸道感染，支气管炎、肺炎及哮喘等。

2.形态结构类似流感病毒，呈球形略大，直径150～180nm，单负链RNA，不分节段，螺旋对称，有HN和P刺突，HN刺突具有血凝和神经氨酸酶活性， P刺突具有细胞融合和病毒穿人细胞并传播扩散的作用。可凝集鸡、豚鼠等红细胞，对鸡胚和多传代细胞都敏感。对豚鼠、雪貂等动物也敏感。 3.抵抗力弱，对热敏感，不耐酸，pH 3．0可灭活。标本-70℃保存。

微生物检验 • 标本显微镜检查：观察到脱落细胞胞质内嗜酸性包含体。 2) 直接检测脱落细胞中的副流感病毒抗原，最常用间接免疫荧光法， ELISA法，阳性者再用分型McAb进行鉴定。

3）病毒的分离标本是鼻咽拭子，人 与猴原代肾细胞敏感，可用豚鼠红细胞进行血吸附试验证实病毒存在。用McAb进行型别鉴定。 4）抗体检测取双份血清，用中和试验、血凝抑制和EIJSA法，抗体效价有4倍增高可认为PIV感染。

三、腮腺炎病毒 1.属副粘病毒亚科、腮腺炎的病原体，还可引起脑膜炎、睾丸炎、卵巢炎和胰腺炎等。 2.呈球形，直径100-200nm，单负链RNA，螺旋对称，包膜表面有两种糖蛋白突起，一种是含血凝素的神经氨酸酶(HN)，另一种是融合蛋白(F)。 3.对猴肾和Hela细胞等敏感。抵抗力不强， 56℃30min、甲醛及有机溶剂均可灭活病毒。

微生物检验 1．以免疫荧光法在标本或细胞培养中早期发现病毒抗原，或用RT-PCR法检测病毒RNA。 2．病毒分离与鉴定早期收集唾液与脑脊液用于病毒分离，用原代恒河猴或人胚肾细胞。能产生典型CPE，细胞融合及多核巨细胞。不出现CPE的可用豚鼠红细胞进行吸附试验，再做吸附抑制试验鉴定。

3．抗体检测用ELISA法和HI试验， 双份血清抗体效价有4倍升高，可认为是感染。ELlSA法可检测IgM 抗体，与副流感病毒抗体无交叉反应。

四、麻疹病毒 属于副粘病毒科，缺乏神经氨酸酶。只有一个血清型，是引起麻疹的病原体。是儿童常见的急性呼吸道传染病。人是自然宿主，普遍易感，易感者接触后100％发病。在我国6个月至5岁儿发病率最高，近年来由于疫苗应用，流行强度减弱，发病年龄后移。

重症和免疫功能低下患儿可出现并发 症肺炎，占死因的90％以上，远期并发症是亚急性硬化性全脑炎(SSPE)。

微生物特征 麻疹病毒呈球形，直径100—150nm，单负链RNA，螺旋对称，三种衣壳蛋白(L、P、 N)组成核衣壳，外被脂质双层包膜，包膜内面为M蛋白，包膜表面有血凝素(H蛋白) 和融合蛋白(F)。H蛋白与细胞表面病毒受体(CD46)结合，有血凝功能，而F蛋白有融合功能。

对原代人胚肾、传代狗肾细胞等敏感， 出现CPE。抵抗力不强，56℃30min可灭活，对消毒剂敏感．紫外线、pH4．5可灭活病毒。对乙醚和丙酮均敏感：病毒耐寒，耐干燥，-70℃可长期保存。

微生物检验 • 标本直接镜检：取鼻咽分泌物、尿沉渣脱落细胞涂片，检查受染细胞产生细胞融合和多核巨细胞，观察胞质和胞核内嗜酸性包涵体。

2) 抗原检测：用免疫荧光法和ELISA 法早期快速检查病毒抗原。 3) 核酸检测：用标记的麻疹病毒cDNA 探针与病人细胞内麻疹病毒RNA进行核酸杂交，或PCR法，扩增RNA，然后进行核酸电泳和核酸杂交。

4）病毒分离与鉴定 用鼻咽拭子或洗液，经处理后接种原代人胚肾细胞分离麻疹病毒，出现CPE或血球吸附试验阳性时，采用免疫荧光试验、ELISA法、核酸杂交法等进行鉴定。麻疹病毒仅一个血清型。

5）抗体检测 取双份血清用ELISA法或CF法等检测，抗体效价有4倍增高。 ELlSA法可检测IgM抗体，可协助早期诊断。

微生物检验 1.抗原检测：常用直接或间接IF试验，用抗六邻体抗体作用，然后用荧光标记抗抗体染色，再于荧光显微镜下发现致密的核上与胞质中有荧光闪烁，则为腺病毒。也用ELlSA法检测出病毒的抗原(或 lgM抗体)。 2.核酸检测：用PCR检出特异性DNA。根据六邻体基因保守序列设计引物进行PCR扩增，扩增产物用核酸探针作杂交鉴定。

3.病毒分离 用Hela、HEP-2等传代细胞，可引起典型 CPE，细胞变圆，聚集成葡萄串状，将感染细胞冻融三次，经2000r／min离心 10min，收集上清夜作为抗原，用血清学鉴定。

4.病毒鉴定 1.用特异性六邻体单克隆抗体对其抗原表位进行检测,进行属特异性鉴定。 2.用HI试验鉴定血清型。型特异性免疫血清能抑制血凝，即用血凝抑制效价来鉴定血清型，方法简易，特异性强，优于传统的中和试验。

5．抗体检测 常用ELISA法，将腺病毒抗原加96孔板，平行滴加双份血清，37℃孵育和洗涤后，再加酶标记抗人lgG抗体，孵育后加入酶底物显色，检测OD值，抗体效价有4倍升高，具有意义。

第 22 章呼吸道病毒