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微生物学实验四. 免疫与病原生物学教研室. 内 容. 观察五糖发酵管试验结果 结核杆菌 抗酸染色 牙垢螺旋体 镀银染色 细菌特殊结构观察. 五糖发酵管试验结果. 菌. 结核杆菌抗酸染色. 目的. 目的. 学习抗酸染色法，掌握结核分枝杆菌形态学特征，为临床诊断提供依据。. 原理. 结核杆菌菌体内 脂类物质较多 ( 可高达 40%), 染色时它与石炭酸复红在加温的条件下结合牢固，能抵抗酸性酒精的脱色作用（ 抗酸性 ），因而抗酸菌能保持 复红 的颜色。相反，非抗酸性细菌体内含 脂类少 ，易被酸性酒精脱色，脱色后被美蓝复染成 蓝色 。
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微生物学实验四 免疫与病原生物学教研室
内 容 • 观察五糖发酵管试验结果 • 结核杆菌抗酸染色 • 牙垢螺旋体镀银染色 • 细菌特殊结构观察
结核杆菌抗酸染色 目的 目的 学习抗酸染色法，掌握结核分枝杆菌形态学特征，为临床诊断提供依据。 原理 结核杆菌菌体内脂类物质较多(可高达40%),染色时它与石炭酸复红在加温的条件下结合牢固，能抵抗酸性酒精的脱色作用（抗酸性），因而抗酸菌能保持复红的颜色。相反，非抗酸性细菌体内含脂类少，易被酸性酒精脱色，脱色后被美蓝复染成蓝色。 此外,与抗酸菌细胞壁的完整性也有关系，当细胞破裂时，其抗酸染色性质亦消失。 完整的细胞壁也能限制染料的进入。因此，必须加温以促进细菌着色。
实验材料 1.肺结核病人痰液 2.石炭酸复红染色液、3%盐酸酒精脱色剂、碱性美兰染色液。 3.酒精灯、接种环、木夹、染色盘、染色架、载玻片、吸水纸、滤纸片。
实验方法 1.涂片：用毛细管取标本，在玻片上涂一薄厚适中的膜。 2.自然干燥 3.固定：在火焰中连续通过三次。 4.染色：将固定后的玻片冷却片刻，在涂膜上加盖滤纸片，用木夹夹住载玻片，滴加石炭酸复红染液于滤纸上数滴，在火焰上方约15cm高度徐徐加温至出现蒸汽（勿沸腾、勿干），可暂时离开火焰，如此反复2-3次（约5分钟）。然后去掉滤纸片，使涂片冷却片刻。
5.脱色：用3%盐酸酒精脱色。不时轻摇玻片，30秒，水洗5.脱色：用3%盐酸酒精脱色。不时轻摇玻片，30秒，水洗 6.复染：滴加碱性美兰液数滴，30秒，水洗 7.吸干 8.油镜镜检
螺旋体（spirochete） 是一类细长柔软弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。 钩端螺旋体 密螺旋体 疏螺旋体
[原理] 牙垢螺旋体——镀银染色法 AgNO3+NH4OH AgOH↓+NH4NO3 AgOH+X(菌体中嘌呤)→AgX（嘌呤银兰）
[材料] 牙签、镊子、玻片 固定液、媒染剂 硝酸银氨溶液
[方法] 涂片 自然干燥 固定液 1分钟水洗 镜检 30秒 硝酸银氨液染色 30秒、水洗 媒染液 水洗 、吸干
[结果] [材料] 牙签、镊子、玻片 固定液、媒染剂、 硝酸银氨溶液
观察细菌的特殊结构 1．荚膜 2．芽胞 3．鞭毛
伤 寒 杆 菌 周 鞭 毛
丛毛菌 单毛菌 双毛菌 周毛菌
