ด้วยระบบ Two-Phase Biotransformation

1. การศึกษาเปรียบเทียบวิธีการเตรียมเอนไซม์และหน้าที่ขององค์ประกอบเซลล์ในการผลิต (R)-Phenylacetylcarbinol ด้วยระบบ Two-Phase Biotransformation

2. สมาชิก น.ส.ณิชา ครุฑกล่อม 4813100 น.ส.รติกร บัวคำ 4813113 CompanyLogo

3. บทนำ (R)-Phenylacetylcarbinol เป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้จาก pyruvate กับ benzaldehydeโดยมี pyruvate decarboxylase (PDC) เป็นตัวช่วยทำปฏิกิริยา (R)-Phenylacetylcarbinol เป็นสารตั้งต้นสำหรับการผลิตสารประกอบทางเภสัชกรรม (ephedrine,pseudoephedrine) เอนไซม์ pyruvate decarboxylase (PDC) จะได้จาก Candida utilis CompanyLogo

4. บทนำ ระบบ Two-Phase Biotransformation เป็นระบบการเปลี่ยนสารตั้งต้นให้กลายเป็นสารผลิตภัณฑ์โดยใช้เอนไซม์ ซึ่งการทดลองนี้ใช้ระบบ 2 ชั้น คือ ชั้นบัฟเฟอร์ที่มีน้ำเป็นตัวทำละลายและชั้น octanol ที่เป็นตัวทำละลายอินทรีย์ เปรียบเทียบวิธีการเตรียมเอนไซม์จากเอนไซม์ PDCที่ถูกทำให้บริสุทธิ์แต่เพียงบางส่วน กับเอนไซม์ PDCในรูปเซลล์รวม CompanyLogo

5. วัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลองวัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลอง • เชื้อจุลินทรีย์และการผลิต PAC • เลี้ยงเซลล์ยีสต์ C.utilis UNSW 70940 เก็บเซลล์หลังจาก 44 ชั่วโมง • วิธีการเตรียมสารสกัด PDC ใสโดยการทำให้เกิดรูรั่วด้วยผงแก้วขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 0.5 มิลลิเมตร • วิธีการทำให้เอนไซม์ PDC บริสุทธิ์แต่เพียงบางส่วนโดยการตกตะกอนด้วยอะซิโตน • 1 หน่วย(U) ของค่ากิจกรรมการทำงานด้วยวิธี carboligase ว่าหมายถึง ปริมาณของเอนไซม์ pyruvate decarboxylase ที่ผลิต PAC ได้ 1 mmol จาก pyruvate กับ bezaldehyde ต่อ 1 นาที pH 6.4 และ 25°C CompanyLogo

6. วัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลองวัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลอง • การเตรียมชิ้นส่วนเซลล์และไขมันเซลล์จาก C.utilis CompanyLogo

7. วัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลองวัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลอง CompanyLogo

8. วัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลองวัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลอง • การทดลอง Biotransformation CompanyLogo

9. วัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลองวัสดุอุปกรณ์และวิธีการทดลอง • การทดลองวัดค่าความคงตัวของเอนไซม์ pyruvate decarboxylase (PDC) CompanyLogo

10. ผลการทดลอง รูป 1. เปรียบเทียบความเข้มข้น PAC (แท่งสีเทา) กับ acetoin (แท่งใส) ในระบบบัฟเฟอร์/octanol หลังจาก 24 ชั่วโมง ที่ 21°C ในเอนไซม์ pyruvate decarboxylase ที่ถูกทำให้บริสุทธิ์แต่เพียงบางส่วน สารสกัดใสจากเซลล์และเอนไซม์ pyruvate decarboxylase ในรูปเซลล์รวม CompanyLogo

11. ผลการทดลอง รูป 2. ผลกระทบของความเข้มข้นเอนไซม์ต่อ (a) ความเข้มข้นสุดท้ายของ PAC (b) การผลิต PAC จำเพาะโดยทำให้บริสุทธิ์แต่เพียงบางส่วน (จุดขาว) และโดยเอนไซม์ pyruvate decarboxylaseในรูปเซลล์รวม (จุดดำ) ในระบบบัฟเฟอร์/octanol ที่ 21oC CompanyLogo

12. ผลการทดลอง • ตาราง I. ค่าครึ่งชีวิตของวิธีการเตรียมเอนไซม์ pyruvate decarboxylase ที่แตกต่างกันจาก C. utilisในระบบบัฟเฟอร์/octanol ที่มีการกวนอย่างรวดเร็ว โดยไม่มี pyruvate ที่ 21°C (ให้ค่ากิจกรรมการทำงานเริ่มต้นต่อปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด,MOPS/KOH 2.5 โมล่าร์, pH 6.5,MgSO4 0.5 มิลลิโมล่าร์,TPPในชั้นบัฟเฟอร์ 0.5 โมล่าร์และ benzaldehydeในชั้น octanol 1.5 โมล่าร์) aไม่ได้ขจัดเศษเซลล์ออก n.d., ไม่ได้กำหนด CompanyLogo

13. การใช้สารเคมีต่างชนิดเพื่อการปรับปรุง PAC • การเติม chitin bovin serum albumin asolectinจะให้ผลการผลิต PACต่ำกว่าตัวควบคุม • การเติมไขมัน เซลล์จาก แคนนิด้า ยูทิลิส เศษเซลล์จาก แคนนิด้า ยูทิลิส ผนังเซลล์จากแซโคโรไมซิสเซเรวิซีอี้ ให้ผลการผลิต PACมากกว่าตัวควบคุม 1.5-2เท่า • การเติม sterol (ergosteol,5mm)และ phospholipidsให้ผลการผลิต PAC ให้ผลการผลิตPAC เพิ่มขึ้นไปถึง 2.4 – 2.8เท่า การเติม AOT 50 mmก็ให้ผลชนิดเดียว กัน CompanyLogo

14. ผลกระทบของ AOT ต่อความเสถียรของเอนไซม์ PDC CompanyLogo

15. จลนพลศาสตร์การผลิต PAC ในสภาวะที่มี AOT CompanyLogo

16. เส้นแนวโน้มการผลิต PAC โดยใช้เซลล์รวมตามเวลาที่ผ่านไป CompanyLogo

17. Thank You ! www.themegallery.com