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유전자 획득

유전자 획득. 대장균을 이용한 유전자 클로닝의 개요. 유전체의 분리 cDNA (complementary DNA) 란 무엇인가 ? Genomic DNA library / cDNA library 의 차이점은 ?. cDNA (complementary DNA) 합성과정. ?. Adaptor 를 이용한 거대 유전자의 삽입. Linker 의 이용. 만약 자르고자 하는 단편에 그 부분을 가지고 있다면 ?. Adaptor 의 이용. Adaptor 의 단점을 보완하는 방법. Screening.

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유전자 획득

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Presentation Transcript

  1. 유전자 획득

  2. 대장균을 이용한 유전자 클로닝의 개요

  3. 유전체의 분리 cDNA (complementary DNA) 란무엇인가? GenomicDNA library / cDNA library 의차이점은? cDNA (complementary DNA) 합성과정 ?

  4. Adaptor를이용한 거대 유전자의 삽입

  5. Linker의 이용 만약 자르고자 하는 단편에 그 부분을 가지고 있다면?

  6. Adaptor의 이용

  7. Adaptor의 단점을 보완하는 방법

  8. Screening

  9. 방서선을 이용한 probe의제작

  10. 비방서선을 이용한 probe의제작 Digoxigenin– DIG 디기탈리스식물에서 추출된 천연스테로이드 alkalinephosphatase 또는 peroxidase와 반응 dUTP를 이용하여 반응시켜줌 Fluorescein-dUTP Biotin 작은 유기분자로서 달걀흰자의 avidin과 결합 Biotin-dUTP를 이용

  11. probe의제작 방법 Nicktranslation labeling Randomhexamer priming

  12. Subtractive hybridization을 이용한 유전자의 분리

  13. What is PCR ? • Polymerase chain reaction was invented by Kary Mullis. He was awarded the Nobel Prize in Chemistry in 1993 for his invention. • The idea was to develop a process by which DNA could be artificially multiplied through repeated cycles of duplication driven by an enzyme called DNA polymerase. DNA polymerase taken from thermophilic bacteria grown in geysers at a temperature of over 110°C (230°F). Hot Springs at Yellowstone National Park.

  14. The exponential amplification of the gene in PCR

  15. 프라이머를 8mer로 했을경우  프라이머 결합부위는 48=65,536bp 당한번 정도로 전체 인간 게놈 3,000,000kb의 염기서열내에 이러한 8mer 부분이 46,000개가 존재 따라서, 한쌍의 8mer로 PCR을 할경우 인간 DNA에서 하나의 특이한 증폭산물을 얻기 어려움. 만약 17mer로 프라이머를 제작할 경우  17,179,869,184bp당 하나가 존재해서 인간 DNA에 한 부위에만 결합하여 특이한 부분 증폭 가능

  16. 적정온도의 결정 DNA의 이중결합이 파괴되는 일반적인 온도 94℃ 신장온도로서 Taq 중합효소의 적정온도 보다 약간 낮은 72℃ 프라이머가 주형에 결합하는 온도

  17. Tm= (4 X [G+C]) + (2 X [A+T]) ℃

  18. PCR 산물의 클로닝

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