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头孢氨苄原料药含量测定. 张庆英. 一、试剂及仪器. 头孢氨苄原料药 头孢氨苄对照品 高效液相色谱仪 流动相：水 - 甲醇 -3.86 ％醋酸钠溶液 -4 ％醋酸溶液（ 742:240:15:3 ）. 高效液相色谱法的应用： 定性：保留时间（ t R ）、相对保留时间（ t ′ R ） 定量：峰高（ h ）、峰面积（ A ）. 脱气. 泵. 进样阀. 色谱柱. 检测器. 收集器. 控制系统. 储液罐. 自动 进样. 数据处理系统. 二、实训内容. 对照品：头孢氨苄 统适应性实验：证明仪器工作良好 供试品：头孢氨苄粉末 + 流动相.
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头孢氨苄原料药含量测定 张庆英
一、试剂及仪器 • 头孢氨苄原料药 • 头孢氨苄对照品 • 高效液相色谱仪 • 流动相：水-甲醇-3.86％醋酸钠溶液-4％醋酸溶液（742:240:15:3）
高效液相色谱法的应用： • 定性：保留时间（tR）、相对保留时间（t′R） • 定量：峰高（h）、峰面积（A）
脱气 泵 进样阀 色谱柱 检测器 收集器 控制系统 储液罐 自动 进样 数据处理系统
二、实训内容 • 对照品：头孢氨苄 • 统适应性实验：证明仪器工作良好 • 供试品：头孢氨苄粉末+流动相
测定含量方法 外标法： 精密称取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量： 含量（Cx）=CRAX/AR 式中 ： AX 为供试品（或其杂质）峰面积或峰高 Cx为供试品（或其杂质）的浓度 AR 为供试品（或其杂质）峰面积或峰高 CR为供试品（或其杂质）的浓度
内标法： 加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： A<[s]>／C<[s]> 校正因子（f）＝─────── A<[R]>／C<[R]> 式中 A<[s]>为内标物质的峰面积或峰高； A<[R]>为对照品的峰面积或峰高； C<[s]>为内标物质的浓度； C<[R]>为对照品的浓度。
取含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分（或其杂质）和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： A<[x]> 含量(C<[x]>)＝f·─────── A<[s]>／C<[s]> 式中A<[x]>为供试品（或其杂质）峰面积或峰高； C<[x]>为供试品（或其杂质）的浓度。 f、A<[s]>和C<[s]>的意义同上。
抗生素的分类 （按结构与性质） β–内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、 大环内酯类、氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类、林可霉素类、其他抗生素类
β–内酰胺类抗生素 青霉素类
Na 结构与性质 （一）羧基 酸性 与碱金属(Na+、K+)成盐 易溶于水
旋光性 （二）手性C 青霉素类 C3 C5 C6 头孢菌素类 C6 C7 ﹡ ﹡ ﹡ ﹡ ﹡
头孢菌素类 母核有共轭体系 UV 青霉素类 母核无明显UV 多数有苯环取代基 （三）共轭体系
（四）β–内酰胺环 四元环张力大 不稳定性因素 酰胺键易水解 水溶液：不稳定 干燥纯净：稳定
K+、Na+反应 （一） 焰色→鲜黄色 + 醋酸氧铀锌→↓黄 Na+ 焰色→紫色 + 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白 K+ 鉴别
（二）呈色反应 1.羟肟酸铁反应 2.与H2SO4 - HNO3反应
△ 3. 茚三酮反应 α-氨基
（三）沉淀反应 1. 遇酸→↓ ↓ 在过量HCl或 有机溶剂中溶解
2. 有机胺盐反应 （1）重氮化 - 偶合反应 芳伯氨基 重氮化-偶合反应
IR法 2、 β-内酰胺环 酰胺 青霉素钠的红外光吸收图谱
碘量法 （一） 原理 1. ChP β-内酰胺类 定量过量 水解产物 （水解） 剩余
反应分两步进行 1. 水解反应 (按化学计算量进行) 2. 氧化-还原反应 (无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)
（二）电位配位滴定法（汞量法） 原理 1. （水解） 青霉素族 ChP
2.方法 Hg（NO3）2 NaOH HNO3 V样（总） 水解 醋酸盐缓冲液 PH4.6 滴定 样品 醋酸盐缓冲液 Hg（NO3）2 V空 PH4.6 滴定 以未经水解的样品作为空白
（三）酸碱滴定法 1.原理 青霉素类 NaOH 青霉噻唑酸（钠盐） △ +HCl +H2O NaOH(剩余) NaCl
（四）紫外-可见分光光度法 （五）HPLC 内标法+校正因子 外标法 特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）
