第四章中医动物实验研究

第四章中医动物实验研究

● 本章主要介绍： （1）动物实验的一般原则和方法。（2）证候动物模型与实验动物辨证。（3）动物实验在中医研究中的应用。 ● 学习本章节，要求大家重点掌握：（1）动物实验的一般原则和方法。（2）中医证候动物模型造模方法。（3）大鼠/小鼠的四诊和辨证方法。

动物实验是近代生命科学实验发展的重要方法，也是生命科学研究与教学的基本手段之一。动物实验是近代生命科学实验发展的重要方法，也是生命科学研究与教学的基本手段之一。动物实验也是实验中医学的重要组成部分和重要的研究方法及手段，无论对中医学数千年来所积累的疾病认识、丰富的防治经验进行验证和总结，对历代医家理法方药的研究，对中医学理论的研究和发展，还是对当前中医药学各个学科的教学、科研，对新的治疗方法（包括应用药物和非药物疗法）的创立与发展，乃至对新的中医药学理论体系的创立等，都是不可或缺的。

● 动物实验涉及1个最基本的问题，即： 中医药实验研究是否能采用动物实验？这个问题又涉及3个问题：（1）动物能不能替代人？ 1）大多实验动物与人类有许多相似的地方。涉及基因、蛋白、生理、生化、病理等方方面面，以往实验已充分地证明两者的相似性，且形成了医学实验由动物探索、筛选、毒性等过渡到临床观察的成功模式。麻雀虽小，五脏俱全；雄狮实验。 2）动物毕竟不是人。因此，凡涉及诊断、治疗等动物实验所获得的结论，最终还需要在人体上试验。

（2）医学实验，不采用动物实验行不行？ 临床开展人的实验有许多困难，甚至没有办法开展。诸如伦理道德限制，临床观察周期长、干扰因素多、研究费用大、研究工作量大、研究条件要求高、创伤性机制研究困难，以及难以开展大批量、重复的探索性实验。而动物实验显示出无可比拟的优势：没有关于人的伦理道德限制，实验周期短、干扰因素得以控制、研究费小、研究工作量小、研究条件要求低、可以开展创伤性机制研究，以及可以开展大批量、重复的探索性实验。因此，当代的医学实验不采用动物实验不行。

（3）中医学实验，不采用动物实验行不行？ 显然也不行。区别在于，中医学动物实验要求探索和发展能够满足中医特色的方法学、技术和理论。比如实验动物的望闻问切四诊、辨证论治、理法方药等。

第一节动物实验的一般原则和方法 通过长期的探索，动物实验的一般原则和方法业已明朗，并形成了“实验动物学”。

什么叫实验动物学？ 实验动物学（Laboratory Animal Sciences）是研究有关实验动物和动物实验的科学，对实验动物的生物特性、饲养繁殖、遗传育种、质量控制、疾病防治和开发应用，以及动物实验的规范和要求，形成了一整套完整的理论和方法。 1988年，国家科委颁布了2号令《实验动物管理条例》，成为我国第一部实验动物管理法规。以上这些理论和方法适用于中医动物实验。同时，中医的动物实验又有其自身特点，其研究、发展还将丰富实验动物学的内容。

一、实验动物的选择 什么叫实验动物？实验动物（Laboratory Animal，LA）是指以实验研究为目的，在一定的环境条件控制下，经过培养驯化，具有明确的生物学特性和清楚的遗传和微生物背景的动物。实验动物具有3大特点：遗传学特点、微生物与寄生虫的监控特点，以及应用特点。

采用普通动物，不采用实验动物行不行？ 不行。非实验动物存在：获得困难、疾病和不健康、饲养和营养不佳、个体差异大和遗传不稳定等。选择实验动物应遵循哪些具体原则？实验动物的选择通常遵循以下原则：① 功能、代谢、结构诸方面与人相似；② 标准化的实验动物；③ 解剖、生理特点符合实验目的要求；④ 存在某些特殊反应、对刺激敏感的实验动物；⑤ 与人类疾病的相关性较为密切；⑥ 易获得、经济实用：　

（一）尽量选用机能、代谢、结构诸方面与人相似的实验动物（一）尽量选用机能、代谢、结构诸方面与人相似的实验动物利用与人类某些相近的特征，有助于对人类疾病的实验、探索和推断。一般来说，动物的进化阶段愈高，功能、代谢、结构愈复杂，也就愈接近人类。如灵长类动物猴、猩、狒狒，是研究人类脊髓灰质炎、痢疾、肝炎、麻疹等疾病的理想动物，但价格昂贵，不易获得，饲养管理困难。还有树鼩、小型猪等。（二）选用标准化的实验动物什么叫标准化实验动物？标准化实验动物指遗传背景明确、饲养环境与动物体内的微生物得到控制、符合一定标准的实验动物。

为什么要选用标准化的实验动物？ 希望实验结果准确、能够重复，不受到其他因素干扰。标准化实验动物指：遗传学、微生物学、环境及营养控制而繁育的，排除细菌、病毒、寄生虫和潜在疾病对实验结果的影响，排除杂交、遗传学污染而造成的个体差异的实验动物。这也是同行交流、认同的前提。常用的实验动物有：近交系动物、突变系动物（自然发生的和基因敲除的）、系统杂交动物或封闭群动物。同时应对实验动物进行微生物控制，尽量使用无菌动物、已知菌动物、无特定病原体动物（后面有介绍）。

（三）选用解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物（三）选用解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物不同实验动物存在某些解剖、生理特点和差别，应适当选择、使用，避免误用。例如，大白鼠无胆囊、肝脏再生能力很强。大鼠与小鼠成熟早，繁殖周期短，产仔多，适用于避孕药、雌激素、胚胎学等研究。DBA小鼠对音响刺激非常敏感，闻电铃声后可出现特殊的发作痉挛，甚至死亡。

（四）选用存在某些特殊反应、对刺激敏感的实验动物（四）选用存在某些特殊反应、对刺激敏感的实验动物不同实验动物对刺激及其反应敏感度不同，应适当选择、使用，避免误用。包括对实验因素敏感的动物，与实验目的相适应的动物。例如，小鼠、大鼠及豚鼠的气管和支气管腺不发达，不宜慢性支气管炎或祛痰平喘药实验。小鼠和大鼠无呕吐反应。小鼠对吗啡呈现兴奋作用，可用于吗啡等麻醉药成瘾性实验。大鼠垂体-肾上腺系统发达，应急反应灵敏，适于做应急反应及肾上腺、卵巢等内分泌实验。豚鼠易于致敏，适用于过敏或变态反应实验。家兔体温恒定，调节灵敏，适用于致热原物质实验。

（五）选择与人类疾病的相关性较为密切的实验动物（五）选择与人类疾病的相关性较为密切的实验动物这些可提供研究病因学、流行病学、发病机制、预防和治疗的良好动物模型。如猴对痢疾杆菌敏感，其临床过程、病理变化等与人类似，用猴研究痢疾是最好的实验动物。许多自发性或诱发性疾病模型能局部或全部反映人类的疾病过程，这些疾病有的可经遗传学方法固定于动物品系之中，有的可在动物身上诱发复制。如无胸腺裸鼠、青光眼兔、肥胖症小鼠等免疫缺陷病、遗传性疾病，在一定程度上减少了人为因素，更接近自然的人类某些疾病，其应用价值很高。

（六）选择易获得、经济实用的实验动物 有些实验动物在某项研究中可能非常重要，但往往由于来源困难、价格昂贵，或者饲养管理难度大，难以大量推广应用。实验动物的发展趋势是小型化，许多啮齿类实验动物，由于体小，繁殖周期短，饲养管理容易，在生物医学实验中应用广泛。如小鼠、大鼠是医学研究中用量最大、用途最广的实验动物。在不影响实验质量的前提下，应选用来源广泛、最易获得、最经济实用的动物。

其中： 小鼠被普遍用于：1）各种治疗方法筛选性实验；2）药物毒性实验； 3）生物效应测定和药物效价比较实验；4）遗传性疾病的研究；5）避孕药和营养学实验研究；6）肿瘤、白血病研究；7）免疫学研究；8）传染性疾病研究；9）微生物、寄生虫病学的研究；10）镇咳药研究等。大鼠以其体积大，被用于外科实验、中耳内耳实验、行为学实验、神经-内分泌实验、放射医学实验等。豚鼠类似，且在营养学、免疫和变态反应等实验中常用。家兔以其体积大和生理病理特点，被用于心血管和肺心病实验、脂类代谢实验，发热解热实验，生理实验、眼科实验等。

（七）遵守动物实验的一般原则 动物实验要求遵守哪些原则？动物实验要求遵守的一般原则主要包括：品系和品种、等级、年龄、体重、性别、生理状态、健康情况、实验季节和昼夜过程，以及实验的重复与肯定，最大程度地保证实验结果的可靠性和重复性。

1．品系、品种 何谓品系或品种？在实验动物中，把同一种动物具有不同遗传特性的群体称为品系或品种：品系（strain）指来源明确，并采用某种交配方法繁殖，而具有相似的外貌、独特的生物学特征和稳定的遗传特性，可用于不同实验目的的动物群体。如近交系、封闭群（远交群）、突变系、系统杂交动物等。品种（breed）是人们根据不同需要而对动物进行改良、选择，即定向培育，并具有某种特定外形和生物学特性的动物群体，其特性能较稳定地遗传。如新西兰兔、青紫兰兔和日本大耳白兔等品种。

主要有哪些品系或品种？ 主要有近交系动物、杂交群动物、封闭群动物、突变系动物。何谓近交系动物？（1）近交系动物（纯系动物）：杂种动物经过相当于20代全同胞兄妹单线连续繁殖，形成的遗传上具有高度纯合性与稳定性，各条染色体上的基因趋于纯合，品系内个体差异趋于零，近交系数大于98.6%即为近交系动物。近交系动物在遗传上是均质的，保证了实验反应的稳定性，在医学研究上具有重要价值。常用近交系小鼠有BALB/c、C57BL/6、C3H、NZB、DBA/1、AFB等，大鼠有ACI、F344、GH等。

何谓杂交群动物？ （2）杂交群动物（系统杂交动物，杂交一代动物，F1动物）指两个近交品系动物之间进行有计划交配所获得的第一代动物。如C57BL/6J和DBA/2小鼠交配后培育的第一代动物即为BDF1或B6D2F1。由于F1有杂交优势，其生活力、疾病抵抗力、对慢性实验的耐受性、繁殖和饲养等均优于近交系；且仍具有遗传均一性，对各种实验结果重复性好，在国际上已广泛使用。

（3）封闭群动物（远交群动物）是一个长时期与外界隔离，不从外部引入新血缘，以非近亲随机交配方式（至少连续繁殖4代以上）的一个种群动物。因此封闭群动物的群体基因频率基本保持稳定不变，从而使群体在一定范围内保持有相对稳定的遗传特征。同时，封闭群动物的遗传组成又比较接近于自然状态下的动物群体结构，能较好地代表自然群体的遗传特性，所具有杂合特性避免了近交衰退的出现，因此其生活、生育力都比近交系强，具有繁殖率高，疾病抵抗力强等优点，可以大量生产，供应量充足。因此，封闭群动物一般适用于药物筛选、毒理安全试验和教学使用。目前，常见的封闭群动物有，昆明种小鼠、ICR小鼠、NIH小鼠，Wistar大鼠、SD大鼠（Sprague-Dawley）、Brown-Norway大鼠，以及新西兰兔等。（3）封闭群动物（远交群动物）是一个长时期与外界隔离，不从外部引入新血缘，以非近亲随机交配方式（至少连续繁殖4代以上）的一个种群动物。因此封闭群动物的群体基因频率基本保持稳定不变，从而使群体在一定范围内保持有相对稳定的遗传特征。同时，封闭群动物的遗传组成又比较接近于自然状态下的动物群体结构，能较好地代表自然群体的遗传特性，所具有杂合特性避免了近交衰退的出现，因此其生活、生育力都比近交系强，具有繁殖率高，疾病抵抗力强等优点，可以大量生产，供应量充足。因此，封闭群动物一般适用于药物筛选、毒理安全试验和教学使用。目前，常见的封闭群动物有，昆明种小鼠、ICR小鼠、NIH小鼠，Wistar大鼠、SD大鼠（Sprague-Dawley）、Brown-Norway大鼠，以及新西兰兔等。

（4）突变系动物：某些封闭群携带个别突变基因，称突变种，这些突变可能是以纯合或杂合的形式存在于群体之中，其中一些具有鲜明的人类疾病模型特征。目前还发展了大量的基因敲除小鼠，用于基础和应用研究。（4）突变系动物：某些封闭群携带个别突变基因，称突变种，这些突变可能是以纯合或杂合的形式存在于群体之中，其中一些具有鲜明的人类疾病模型特征。目前还发展了大量的基因敲除小鼠，用于基础和应用研究。采用品系或品种的实验动物，在于其遗传学特性稳定。此外一些遗传特征得到运用，如O3H品系小鼠的乳腺癌的发病率为97%，而Wistar品种大鼠肿瘤的自发率却很低。

2．等级（实验动物分级） 何谓等级？等级指实验动物按照微生物和寄生虫控制的等级，一般分为无菌级动物、悉生动物（已知菌动物）、无特定病原体动物（SPF动物）、清洁级动物和普通动物等几个等级：（1）无菌级动物（CF动物）：不携带微生物和寄生虫，由普通动物经无菌剖腹产手术，幼仔置于无菌隔离器中，由人工哺乳或由其他无菌动物代乳饲育而成。置于无菌隔离装置中保育，饲养管理严格按照无菌条件处理。

（2）悉生动物（已知菌动物，gnotobiotic animals，GN动物）：在无菌动物中人为地植入已知的一种或数种微生物的动物。置于无菌隔离装置中保育，饲养管理严格按照无菌条件处理。（3）无特定病原体动物（SPF动物）：动物不携带可能干扰实验的进行或结果的特定微生物和寄生虫，即SPF动物。SPF动物的种群来源于无菌剖腹产动物，在屏障系统中进行保种、饲育及使用，按国家标准，严格实施微生物和寄生虫控制。国际标准的实验动物。

何谓清洁级动物？ （4）清洁级动物：不带有一些传染病的病原微生物，及常见的体内寄生虫的实验动物。清洁级动物的引种应来源于更高等级的动物，应在温、湿度可控的亚屏障系统中，进行饲养、繁殖生产或使用。所使用的笼具、垫料、器具、饲料和饮水等，应当实行灭菌处理，动物设施应分区域设置，设计应符合人流、物流防止交叉感染和方便工作的原则，要建立严格管理制度和操作规范。清洁级动物已是我国目前主要使用的质量控制等级的动物，已被广泛地应用于生命科学研究、新药研制和安全评价等领域的动物实验之中，发挥了清洁级动物，易于质量控制，非实验因素干扰少，有较好的敏感性和可重复性的优点。鉴于当前大多实验系非感染性实验，以及考虑与自然接近、降低成本，清洁级动物使用得最多。

（5）普通动物：不携带主要的人兽共患病、自身的烈性传染病的病原体及体外寄生。普通级实验动物一般是在开放环境下饲养。目前，我国实验小鼠和大鼠的普通级已取消，豚鼠、兔、犬等仍保留。（5）普通动物：不携带主要的人兽共患病、自身的烈性传染病的病原体及体外寄生。普通级实验动物一般是在开放环境下饲养。目前，我国实验小鼠和大鼠的普通级已取消，豚鼠、兔、犬等仍保留。附：实验动物环境主要有开放系统、屏障系统、隔离系统：开放系统：专用房舍，自然通风，具有防虫、防鼠设施，笼具和垫料消毒，使用无污染饲料，人员进出有一定的防疫措施。适用于普通级动物。

屏障系统：主要是用于SPF级动物的饲育。有正压屏障构造、负压屏障构造（生物安全屏障系统），也有用层流架（正压/负压）或隔离器作SPF级屏障系统。与外界隔离，空气经三级过滤净化后才进入屏障设施之内，空气洁净度为10000级。通常应保持为正压，不低于20~50Pa，出风口设有防空气倒流装置。屏障系统设有清洁和污染走廊，进入系统的笼具、饲料、饮水、垫料、器械等一切物品都要经过严格的消毒灭菌，人员进入要经淋浴、更衣，使用专用的服装，进入的动物要有专用包装，也经严格的消毒处理。系统内的人员、物品和空气等采用单向固定的流通路线，有呼吸系统疾病和皮肤病的人员不能进入系统内。屏障系统：主要是用于SPF级动物的饲育。有正压屏障构造、负压屏障构造（生物安全屏障系统），也有用层流架（正压/负压）或隔离器作SPF级屏障系统。与外界隔离，空气经三级过滤净化后才进入屏障设施之内，空气洁净度为10000级。通常应保持为正压，不低于20~50Pa，出风口设有防空气倒流装置。屏障系统设有清洁和污染走廊，进入系统的笼具、饲料、饮水、垫料、器械等一切物品都要经过严格的消毒灭菌，人员进入要经淋浴、更衣，使用专用的服装，进入的动物要有专用包装，也经严格的消毒处理。系统内的人员、物品和空气等采用单向固定的流通路线，有呼吸系统疾病和皮肤病的人员不能进入系统内。

隔离系统：主要设备是隔离器，用于饲养SPF动物、无菌动物和悉生动物。隔离器可置于开放系统内运转，则要严格控制系统内环境的温、湿度。操作时，工作人员只能通过隔离器上的橡胶手套来进行饲养或实验。物品是通过包装消毒后，由灭菌渡舱或传递窗传入；动物是经由无菌剖腹产的方法进入；空气经高效过滤，保证隔离器内空气洁净度达100级，无菌并维持正压状态。隔离系统：主要设备是隔离器，用于饲养SPF动物、无菌动物和悉生动物。隔离器可置于开放系统内运转，则要严格控制系统内环境的温、湿度。操作时，工作人员只能通过隔离器上的橡胶手套来进行饲养或实验。物品是通过包装消毒后，由灭菌渡舱或传递窗传入；动物是经由无菌剖腹产的方法进入；空气经高效过滤，保证隔离器内空气洁净度达100级，无菌并维持正压状态。

图1 动物实验中心 图2 清洁级准备室图3 清洁级走廊图4 小鼠饲养室

3．年龄、体重 通常适用成年、同龄动物，体重一致动物。幼年、老年实验例外。 4．性别生殖和与性别相关疾病宜选用雌或雄动物，否则宜雌雄各半。此外复制胆结石应选用雌性动物，而氯仿仅对雄性小鼠肾脏造成损害。 5．生理状态一般选用无妊娠、哺乳等等无，特殊实验除外。

6．健康情况 必须选用健康动物进行实验。动物的健康标准：① 一般情况：体型丰满，发育良好，行动敏捷，眼睛有神，反应灵活，运动自如，食欲良好，眼球结膜无充血，瞳孔等圆清晰，鼻黏膜处无分泌物，无鼻翼扇动、打喷嚏、抓耳挠腮等情况。② 皮毛颜色：动物的皮毛清洁，被毛浓密有光泽且紧贴身体，无脱毛、蓬乱和真菌感染的现象。③ 腹式呼吸：动物腹式呼吸均匀，腹部无膨大隆起的现象。④ 外生殖器：动物外生殖器无损伤、无脓痂、无异味及黏性分泌物。⑤ 爪趾特征：无咬伤、无溃疡、无结痂等。

7．实验季节和昼夜过程 不同季节和不同昼夜，动物机体反应性会有一定改变，在实验动物选择中也应予以注意。 8．实验的重复与肯定由于不同种动物有不同的功能和代谢特点，所以在肯定一个实验结果时，往往采用两种以上动物进行比较观察，尤其将动物实验结果推断到人的实验时应该慎重。例如，所选的实验动物如一种为啮齿类动物，另一种应该为非啮齿类动物。常用的顺序是小鼠、大鼠、狗或猴。

二、中医动物实验研究的注意点 中医动物实验研究应注意哪些原则？（一）中医动物实验研究应以中医理论为指导学科特色使然。种瓜得瓜，种豆得豆。（二）中医动物实验研究应从中医临床出发满足临床需求，以及在临床经验基础上探索和发展。（三）中医动物实验研究应突出中医治疗原则各学科的治疗学理论、方法与特色。（四）中医证候动物模型不能照搬西医疾病动物模型不宜简单照搬。

第二节证候动物模型与实验动物辨证 何谓“中医动物模型”？中医动物模型是根据中医理论，对人类疾病原型的某些特征进行模拟复制，创造出的人工疾病和证候的实验动物。用于探讨证候的实质，揭示辨证论治规律，规范中药及复方使用，促进中医理论发展，认识人类疾病的发生/发展规律和研究防治措施。在这，首先涉及到疾病动物模型：

● 关于医学实验的动物模型 人类疾病动物模型（Animal models of human diseases）：是指为阐明人类疾病的发生机理及建立预防、诊断和治疗方法而制作的具有人类疾病模拟表现的实验动物。

1．人类疾病动物模型的作用： （1）人类的替难者，避免了在人身上进行实验所带来的风险。（2）可按研究者的需要获得实验材料。（3）缩短研究周期。（4）可控制各种实验条件，结果可比性强，重复性好。（5）可提供发病率较低的疾病材料。（6）有助于更全面认识疾病的本质。（7）药物的药效学研究和安全性评价。（8）为教学服务，提供直观生动的教学效果。

2．人类疾病动物模型的设计原则： 一个好的动物模型应具有以下特点（1）相似性：动物模型应与相应的人类疾病有类似之处，尽可能再现所要研究的人类疾病的病理变化。（2）重复性：理想的模型应是可重复、可标准化的。标准的动物、标准的环境、标准的饲养管理、标准的实验器材、标准的实验操作。（3）可靠性：复制模型应特异地、可靠地反映该种疾病或某种机能、代谢、结构变化，同时应具备该种疾病的主要症状和体征，并经受一系列检测得以证实。（4）适用性：复制模型应尽量考虑今后临床能应用和便于控制其疾病的发展，动物背景资料要完整，生命史能满足实验需要。

（5）易行性和经济性：动物经济而来源充足，便于转运，易于关养。在同等条件下，优先使用标准化的实验动物。（5）易行性和经济性：动物经济而来源充足，便于转运，易于关养。在同等条件下，优先使用标准化的实验动物。（6）安全性：动物模型应不对实验人员和其它人员的生命安全产生威胁。 3．人类疾病动物模型的分类（1）诱发性动物模型（experimental animal model）（2）自发性动物模型（spontaneous animal model）（3）抗疾病型动物模型（negative animal model）（4）生物医学动物模型（Biomedical animal model）以上疾病模型，在中医药实验中被广泛使用。

在中医药实验中，具有鲜明特点的是“证候动物模型”：在中医药实验中，具有鲜明特点的是“证候动物模型”：一、证候动物模型的开创和发展（一）证本质和证动物模型的开创和发展新中国成立后，中医药研究和发展对中医动物实验提出了要求。基于肾上腺皮质功能衰退，以及肾上腺皮质激素临床应用和应用中所发生的副作用，借鉴西医疾病模型建立的方法和思路，邝安堃等采用肾上腺皮质激素尝试创建了肾虚证候鼠模型，这对中医证候的实验室研究展现了全新的视角，提供了新的思路与方法。

20世纪70年代，证本质研究进入了全面铺开、向纵深发展的时期。脾本质和血瘀证本质的研究也相继启动、发展。80年代，不同证候动物模型的报道日渐增多。潜在的虚证被观察到，鉴于该阶段，大多四诊表现尚不明显，因而提出采用更为灵敏的实验室检测，即所谓微观辨证，甚至开始在临床尝试这样的辨证方法。20世纪70年代，证本质研究进入了全面铺开、向纵深发展的时期。脾本质和血瘀证本质的研究也相继启动、发展。80年代，不同证候动物模型的报道日渐增多。潜在的虚证被观察到，鉴于该阶段，大多四诊表现尚不明显，因而提出采用更为灵敏的实验室检测，即所谓微观辨证，甚至开始在临床尝试这样的辨证方法。

在以上证候动物模型研发普及取得积极成果的同时，也暴露出一些学术问题，比如：在以上证候动物模型研发普及取得积极成果的同时，也暴露出一些学术问题，比如：证候动物模型的建立与界定，存在不规范现象，如何实现证候动物模型的规范化？如何开展病证结合研究，以及如何解决证候规范化所引起的欠灵活性，从而使规范后的标准更符合中医辨证特色？单纯应用西医复制疾病模型的方法在证候模型建立中的局限性业已十分突出，如何从中医发病学角度入手复制符合中医理论的证模型？一些实验室指标检测开始暴露出对不同证候特异性不强的现象，等等。因此，如何筛选和寻找证的特异性指标，等等。学术界开始寻求新的对策、新的探索。

（二）中医证候动物模型的复制方法 中医证候动物模型的复制方法主要有哪些？主要有模拟中医传统病因、采用西医病因病理，以及依据中西医结合病因学说等3种类型： 1．模拟中医传统病因建立动物模型（1）单因素造模：如根据中医“恐伤肾”原理，采用猫吓孕鼠法，得到子代先天肾虚模型；用耗气破气理论，以中药（大黄、厚朴、枳实）灌喂大鼠，复制脾气虚动物模型；用人工控制的潮湿环境复制外湿证动物模型；以寒邪伤阳、迟脉主寒证的原理；用寒冷刺激法（大鼠在零下15℃的冷环境中，持续4h左右），复制“迟脉”模型等。

（2）复合因素造模：用睡眠剥夺的小站台法，模拟中医理论的“惊”和“劳”等病因，在大鼠身上建立心虚证模型；用中医先天不足和后天失养的病因，复制仔兔体弱易感动物模型，建模后，以“捋捏、三揉、三里求”的按摩手法复健，表明此法具有扶正祛邪的作用；采用麻黄汤发汗复加风寒刺激和高温发汗复加风寒刺激制作小鼠卫气虚动物模型，而玉屏风散对此模型具有纠正作用；根据血虚证常由于生血少和耗血多两个方面的原因，用放血和限制饮食法复制“血虚”动物模型等。（2）复合因素造模：用睡眠剥夺的小站台法，模拟中医理论的“惊”和“劳”等病因，在大鼠身上建立心虚证模型；用中医先天不足和后天失养的病因，复制仔兔体弱易感动物模型，建模后，以“捋捏、三揉、三里求”的按摩手法复健，表明此法具有扶正祛邪的作用；采用麻黄汤发汗复加风寒刺激和高温发汗复加风寒刺激制作小鼠卫气虚动物模型，而玉屏风散对此模型具有纠正作用；根据血虚证常由于生血少和耗血多两个方面的原因，用放血和限制饮食法复制“血虚”动物模型等。

2．采用西医病因病理复制动物模型 （1）化学因素刺激法：如采用灌注地塞米松法，建立家兔糖皮质激素受抑模型，并观察到中药生地能减轻由糖皮质激素对兔垂体-肾上腺皮质系统和形态的影响；由家兔耳缘静脉注入10%高分子右旋糖酐液复制“血瘀”动物模型，实验证明川芎注射液对“血瘀”动物具有较好的治疗作用；采用胃饲大鼠适量秋水仙碱后，出现了一系列典型的脾气虚证候群及符合脾虚证的一些生化、组织指标的相应变化，运用补中益气汤可使这些病理改变得到有效的防治。

（2）生物因素刺激法：取新西兰小黑鼠与昆明小白鼠第五代杂交鼠具有自身IgG和抗核抗体的特点，经血清或组织液诱导形成类似人类内伤痹证的病理模型；以“气管内接种”肺炎双球菌作造模因素，初步建立了家兔邪热壅肺证动物模型，该实验用宣肺透热的代表方剂-麻杏石甘汤进行治疗，证实了麻杏石甘汤对邪热壅肺的治疗效应；在建立巴氏杆菌性家兔温病气营传变模型及小鼠模型的基础上，观察解毒凉营护阴注射液在阻断温病气营传变中的治疗作用，结果提示该药能够明显降低模型动物的高热，改善症状，控制病变，减轻病损，延长存活时间，从而达到阻断气营传变，促进机体恢复的治疗作用。（2）生物因素刺激法：取新西兰小黑鼠与昆明小白鼠第五代杂交鼠具有自身IgG和抗核抗体的特点，经血清或组织液诱导形成类似人类内伤痹证的病理模型；以“气管内接种”肺炎双球菌作造模因素，初步建立了家兔邪热壅肺证动物模型，该实验用宣肺透热的代表方剂-麻杏石甘汤进行治疗，证实了麻杏石甘汤对邪热壅肺的治疗效应；在建立巴氏杆菌性家兔温病气营传变模型及小鼠模型的基础上，观察解毒凉营护阴注射液在阻断温病气营传变中的治疗作用，结果提示该药能够明显降低模型动物的高热，改善症状，控制病变，减轻病损，延长存活时间，从而达到阻断气营传变，促进机体恢复的治疗作用。

（3）物理、机械因素刺激法：用结扎大鼠一侧大脑中动脉（MCAO）造成局部灶性脑缺血模型，通过对MACO大鼠神经病学、被动性条件反射、脑梗死面积及脑组织病理学等多项指标的检查测定，显示出醒脑开窍针法对局灶性脑缺血的明显治疗作用；取体外直肠半结扎法建造“肺与大肠相表里”实验动物模型，模型鼠所出现的反应性肺损害，大承气汤对其有明显促修复作用，验证了“肺与大肠相表里”。（3）物理、机械因素刺激法：用结扎大鼠一侧大脑中动脉（MCAO）造成局部灶性脑缺血模型，通过对MACO大鼠神经病学、被动性条件反射、脑梗死面积及脑组织病理学等多项指标的检查测定，显示出醒脑开窍针法对局灶性脑缺血的明显治疗作用；取体外直肠半结扎法建造“肺与大肠相表里”实验动物模型，模型鼠所出现的反应性肺损害，大承气汤对其有明显促修复作用，验证了“肺与大肠相表里”。

（4）综合因素刺激法：采用地塞米松、呋喃苯胺酸和大肠杆菌内毒素联合造模的方法，制作温病营热阴伤证家兔动物模型，方法简便，而且模型家兔在证候表现和病理改变上与传统中医理论相关性较高；用静注Pb-Acet和5-羟色胺（5-HT），同时口灌LPS的方法，对大鼠进行肠源性内毒素血症（EETM）造模，而大承气汤对EETM模型出现的病理损害具有明显的保护作用；以氟氢可的松和肾上腺素使大鼠处于阴虚火旺状态，复制慢性血瘀模型等。（4）综合因素刺激法：采用地塞米松、呋喃苯胺酸和大肠杆菌内毒素联合造模的方法，制作温病营热阴伤证家兔动物模型，方法简便，而且模型家兔在证候表现和病理改变上与传统中医理论相关性较高；用静注Pb-Acet和5-羟色胺（5-HT），同时口灌LPS的方法，对大鼠进行肠源性内毒素血症（EETM）造模，而大承气汤对EETM模型出现的病理损害具有明显的保护作用；以氟氢可的松和肾上腺素使大鼠处于阴虚火旺状态，复制慢性血瘀模型等。

3．依据中西医结合病因学说建造动物模型 如以Ⅱ型胶原免疫所致关节炎动物模型为基础，以风寒湿为痹证外因，肾虚为痹证内因的学说为依据，利用中西医结合肾本质研究的成果，采用复合因子方法制作痹证动物模型；用饮食不节、劳倦过度等因素造成了大白鼠脾虚证模型，在此基础上并用氯化铝（AlCl）复制了Alzheimer 型痴呆疾病模型，补益脾胃方药对其具有较好的疗效；采用中剂量链脲佐菌素腹腔内注射及肥甘饮食持续喂养10周的方法，复制实验性糖尿病大鼠模型（消渴病）；以给动物灌服寒凉药及结扎冠状动脉并逐渐缩窄升主动脉口径，制作家兔充血性心力衰竭少阴病阳虚水停证模型，加味真武汤注射可明显降低模型家兔血浆内皮素水平，是治疗该病证的作用机制之一，等等。

（三）动物模型研究存在的问题及展望 通过几十年的探索，中医的实验动物，尤其是证动物模型研究取得了空前的成就，同时，也暴露出了一些问题，主要表现为以下几方面。 1．如何发展和完善实验动物的诊法与辨证在临床上中医通过“望、闻、问、切”四诊相参可以搜集到较为完整丰富的辨证资料，但长期以来，由于实验动物既无法“问”，也不好“切”，“望”和“闻”也不存在一个规范的标准，因此动物模型很难用四诊方法进行辨证和评价。

第四章 中医动物实验研究