Somite

1. Somite

2. Prolifération • Test d’incorporation du BrdU • Marquage de la Phosphohistone H3  La prolifération n’est pas affectée • Comptage  accumulation due à un défaut de migration

3. Apoptose • Marquage Caspase 3 activée • E10.5 • Lèvre ventrale DM

4. Apoptose • E12.5 • Cellules redirigées ventralement

5. Expression des marqueurs myogéniques primordiaux Pax3  Met  Lbx

6. Expression de Pax3 • Hybridation in situ • E10.5 • Caudal: correct • Perturbations en allant vers le pôle antérieur • Pas de délamination dans le limb bud

7. Expression de Pax3 • Niveau: bourgeon membre postérieur • Niveau: bourgeon membre antérieur • Pas de délamination + aggravation du phénotype • Perte expression dans les lèvres dorsales et ventrales

8. Pax3 est régulé par Six1-4 dans la lèvre ventrale dudermomyotome • Bourgeon membre postérieur • Perte expression Dorsale et Ventrale • Expression réduite à lèvre caudale

9. Expression de Met • Caudal OK • Défauts en allant vers le pôle antérieur • Perte de l’expression épaxiale • Expression ectodermique

10. Régulation de Met par Six1 et 4, indépendamment de Pax3 • Faible expression Post dans le limb bud alors que Pax3 toujours présent Expression réduite dans le dermomyotome Pas d’expression dans le Ant limb bud

11. Expression de Lbx1 • Perte d’expression : - chorde hypoglossale - bourgeon de membre antérieur

12. Lbx1 • Expression faible: - quelques somites au niveau du bourgeon de membre postérieur

13. Bandshift • Test de retard sur gel • Mise en évidence des interactions ADN-protéines

14. Bandshift • Interaction entre Six1 et le promoteur de lbx1 • Interaction entre Six1, Eya1 et le promoteur de lbx1 •  Régulation directe?

15. Expression de Pax7 • Peu de différences • Baisse d’expression à hauteur du bourgeon de membre antérieur

16. Localisation de la protéine Pax3 • E10.5 , dermomyotome • Immunofluorescence • Région caudale • Co-expression Six1 et Pax3 • Phénotype normal

17. Localisation de la protéine Pax3 • Bourgeon membre postérieur, somites caudales • Co-expression dans la région qui ne migre pas

18. Localisation de la protéine Pax3 • Membre postérieur, somites rostrales • Les protéines ne co-localisent plus • Perte d’expression de Pax3 antérieurement

19. Localisation de la protéine Pax3 • Membre antérieur • Mauvaise localisation de Pax3, désorganisation , pas d’entrée dans le limb bud

20.  Perte d’identité des cellules sans Pax3 et migration anormale • Laminine:  cellules à destinée musculaire • En présence de Pax3, expression de laminine normale • Myotome organisé En absence de Pax3, myotome désorganisé

21. Gènes MRFs • Myf5, MyoD1, Myogénine, Mrf4: gènes de détermination myogénique = facteurs de transcription de la famille Mrf • Exprimés dans le myotome, avant la différenciation des cellules

22. Gènes MRFs • Diminution expression Myf5 • Diminution expression myogénine

23. Gènes MRFs • Diminution expression MyoD • Disparition Mrf4  Les protéines Six régulent les gènes mrfs

24. Six et FGFs • Baisse d’expression de Fgf6 et du récepteur à Fgf4

25. Six et FGFs • Scleraxis sous le contrôle de Fgf • Formation des vertèbres et des cotes • Baisse d’expression  signalling de Fgf est altéré.

26. Conclusion/Discussion • Protéines Six contrôlent: • Pax3 dans la lèvre ventrale • la délamination et la migration des précurseurs myogéniques hypaxiaux En absence de Pax3, perte d’identité cellulaire, mauvaise migration et la mort pas apoptose • Semblent contrôler • directement Met, indépendamment de Pax3 • directement Lbx1 • Absence de Six entraîne une baisse d’expression: - des Mrfs - des Fgfs • Fonctions partagées entre Six1 et Six4 • Somites rostrales plus affectées que caudales  différents pathways myogéniques

27. Conclusion/Discussion