hodowle tkankowe kom rki macierzyste n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Hodowle tkankowe, komórki macierzyste PowerPoint Presentation
Download Presentation
Hodowle tkankowe, komórki macierzyste

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 54

Hodowle tkankowe, komórki macierzyste - PowerPoint PPT Presentation


  • 189 Views
  • Uploaded on

Hodowle tkankowe, komórki macierzyste. Typy hodowli. Pierwszorzędowe = pierwotne Wtórne Linie komórkowe Linie unieśmiertelnione telomeraza onkogeny onkowirusy nowotworowe. Pojęcia. Medium = pożywka Zdefiniowane Niezdefiniowane Bezsurowicze Skład:

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Hodowle tkankowe, komórki macierzyste' - keilah


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
typy hodowli
Typy hodowli
  • Pierwszorzędowe = pierwotne
  • Wtórne
  • Linie komórkowe
  • Linie unieśmiertelnione
    • telomeraza
    • onkogeny
    • onkowirusy
    • nowotworowe
poj cia
Pojęcia
  • Medium = pożywka
    • Zdefiniowane
    • Niezdefiniowane
    • Bezsurowicze
  • Skład:
    • Aminokwasy – 9 egzogennych (His, Ile, Leu, Liz, Met, Phe, Thr, Trp, Val); dodatkowo Cys, Gln, Tyr
    • Witaminy
    • Sole,glukoza
    • Surowica – zawiera insulinę, transferynę
    • Czerwień fenolowa
    • Dodatki: IL-2 dla limfocytów T, erytropoetyna dla erytrocytów
warunki hodowli
Warunki hodowli
  • Temperatura
  • Tlen, dwutlenek węgla
  • pH
  • Wilgotność powietrza
hodowle imituj ce warunki fizjologiczne
Hodowle imitujące warunki fizjologiczne
  • ko-kultury
  • hodowle podtrzymujące

z ang. „feeder layers”

  • hodowle 3D na odpowiednich matrycach
  • hodowle uniemożliwiające adhezję
izolacja kom rek
Izolacja komórek

Oddzielenie od macierzy międzykomórkowej i rozbicie na pojedyncze komórki

rozdrobnienie mechaniczne tkanki

trawienie enzymami proteolitycznymi

traktowanie EDTA –wiąże jony wapnia potrzebne do kontaktu komórka-komórka

Rozbicie komórek

szok osmotyczny

ultradźwięki

przecieranie przez sita

homogenizacja

rozdzia frakcji
Rozdział frakcji
  • Cytometr przepływowy z sorterem
  • Chemotaksja
  • Adhezja
  • Wirowanie
  • Obecność markerów – antygenów powierzchniowych
  • Tworzenie CFU
schemat izolacji immunomagnetycznej
Schemat izolacji immunomagnetycznej

Selekcja

pozytywna

Selekcja

negatywna

slide12

Izolacja chemotaktyczna

Komórki jednojądrowe ze szpiku kostnego

SDF-1

LIF

Medium

HGF

wirowanie
Wirowanie
  • W gradiencie gęstości:
    • frakcje wędrują w zależności od rozmiaru i kształtu gdy użyje się niskiego gradientu cukru (5-20%);
    • w zależności od gęstości frakcji, gdy użyje się wysokiego gradientu cukru (20-70%)
  • W gradiencie prędkości:
    • frakcje wędrują w zależności od ciężaru – im mniejsza frakcja tym większej prędkościtrzeba użyć
liczenie kom rek
Liczenie komórek
  • cytometr
  • Komora Burkera
  • Średnia ze zliczeń
  • Gęstość komórek /cm3:
    • C=n* 105

n- ilość zliczonych komórek

okre lenie ywotno ci
Określenie żywotności
  • Błękit trypanu – martwe-niebieskie jądra
  • Bromek etydyny – martwe-jądra czerwone
  • Jodek propydyny- martwe – jądro czerwone
  • Dwuoctan fluoresceiny – żywe – zielona fluorescencja cytoplazmy
kom rki macierzyste
Komórki macierzyste
  • Typy
    • Embrionalne ESC
    • Somatyczne
    • Z krwi pępowinowej
cechy kom rki macierzystej
Cechy komórki macierzystej
  • Nieograniczona ilość podziałów
  • Zdolność do różnicowania
  • Zdolność samoodnawiania

Świat nauki 05/2002

podzia y
Podziały
  • Bardzo rzadkie
  • Symetryczne
  • Asymetryczne
  • Regulacja

Świat nauki 07/1999

typy kom rek macierzystych
Typy komórek macierzystych
  • Totipotencjalne
  • Pluripotencjalne
  • Multipotencjalne
  • Unipotencjalne

www.wi.mit.edu

blastocysta
Blastocysta
  • Blastocysta =

trofoblast + węzeł zarodkowy

  • Trofoblast tworzy łożysko
  • Komórki węzła zarodkowego tworzą 3 listki zarodkowe

www.kumc.edu

blastocysta1
Blastocysta
  • 0,1 –0,2 mm średnicy
  • 100 –150 komórek

www.kumc.edu

hodowla
Hodowla
  • Komórki węzła zarodkowego
  • Warstwa odżywcza z inaktywowanych fibroblastów mysich
  • Surowica bydlęca

Świat nauki 06/1999

slide24
zwiększenie aktywności

alkalicznej fosfatazy

tworzenie ognisk mineralizacji

zmiana morfologii i gromadzenie kropli tłuszczu

zmiana morfologii i odkładanie proteoglikanów

slide25
ZALETY:

Pluripotencjalne

Zgodność antygenowa – brak odrzutu

WADY:

Trudna hodowla

Nieprzewidywalny kierunek różnicowania

Potworniaki 20%

Problemy etyczne

ESC
klonowanie terapeutyczne
Klonowanie terapeutyczne
  • Jądro komórki somatycznej wprowadzane do pozbawionego jądra oocytu
  • Cytoplazma oocytu „odmładza” jądro
  • Embrion hodowany do stadium blastocysty

www.biochem18.stanford.edu

problemy
Problemy
  • Źródło oocytów
  • Nieznana wydajność tej techniki
  • Wydajność 14% -na 1 linię 280 oocytów
  • Oocyty zwierzęce

www.lef.org

partenogeneza
Partenogeneza
  • Niezapłodniony oocyt pobudzany do rozwoju
  • Podwójny zestaw chromosomów dawcy oocytu
  • Komórki pluripotencjalne

www.bedfordresearch.org

odr nicowanie
Odróżnicowanie
  • Izolacja enzymów oocytu „odmładzających” jądro
  • Iniekcja do komórki hematopoetycznej
  • Komórki odzyskują pluripotencjalność

www.ohsu.edu

p odowe kom rki macierzyste fsc
Płodowe komórki macierzyste FSC
  • 5-9 tygodniowe płody
  • Izolacja komórek linii płciowej
  • Pierwotne komórki zarodkowe EG

www.molbio.princeton.edu

migracja esc do organizmu matki
Migracja ESC do organizmu matki
  • Zaostrzenie chorób autoimmunolo – gicznych
  • Migracja do miejsca uszkodzenia i regeneracja tkanek – ochrona matki

Świat nauki 12/2005

krew p powinowa
Krew pępowinowa
  • Alternatywne źródło krwiotwórczych SC
  • Przeszczepy autogeniczne i allogeniczne
  • Możliwość bankowania
  • 130 tys. porcji zbankowanych
  • 3500 przeszczepów

www.hemastem.com

krew p powinowa1
ZALETY:

Dostępność i czas

Bezpieczna metoda pobrania

Większa pula dostępnych dawców

Młode SC

Mniej nasilone GvH

Minimalne ryzyko zakażenia CMV

Brak dylematów moralnych

WADY:

Porcja 100 ml bezpieczna dla biorcy 30 kg

Opóźnione zasiedlanie szpiku

Ryzyko obciążeń genetycznych

Nieznany wpływ bankowania

Mniej SC niż w szpiku i krwi mobilizowanej

Krew pępowinowa
mo liwo ci zastosowania krwi p powinowej
Możliwości zastosowania krwi pępowinowej
  • Leczenie białaczek
  • Leczenie pacjentów po chemioterapii lub radioterapii
  • Uzyskanie komórek nerwowych
  • Uzyskanie komórek mezenchymalnych, trzustkowych i hepatocytów

www.waisman.wisc.edu

banki krwi p powinowej
PUBLICZNE:

Krew sklasyfikowana pod względem HLA

Przeszczepy allogeniczne

Ponoszą wszystkie koszty

Ogólnodostępny rejestr dawców

Dowolny biorca

KOMERCYJNE:

Przeszczepy autogeniczne lub w obrębie rodziny

Nie ponosi kosztów

Ryzyko zakończenia działalności i zniszczenia komórek

Banki krwi pępowinowej
somatyczne kom rki macierzyste
Somatyczne komórki macierzyste
  • Niezróżnicowane
  • Ograniczona proliferacja
  • Liczba z wiekiem maleje
  • Efekt starzenia
  • Dostosowanie do niszy tkankowej
  • Nie tworzą potworniaków
  • Stan uśpienia

www.rsna.org

wyst powanie somatycznych sc
Występowanie somatycznych SC
  • szpik
  • mięśnie – komórki satelitarne
  • skóra
  • jelito
  • wątroba
  • mózg
wykorzystanie somatycznych sc
ZALETY:

Brak dylematów etycznych

Nie tworzą się potworniaki

WADY:

Trudność pozyskania

Brak zgodności tkankowej

Efekt starzenia

W stanach chorobowych lub martwicy mniejsza liczba

Wykorzystanie somatycznych SC
przeszczepy
Przeszczepy
  • Autologiczne
  • Allogeniczne
  • Ksenogeniczne
  • Narządów
  • Tkanek
  • komórek
mo liwo ci wykorzystania
Możliwości wykorzystania
  • Badania embriogenezy
  • Badania nieprawidłowego rozwoju
  • Badania działania genów
  • Testowanie leków
  • Badanie teratogenów
  • Zastosowania medyczne

www.kumc.edu

ograniczenia
Ograniczenia
  • Możliwość odrzutu przeszczepu allogenicznego
  • Linie hodowane na mysich fibroblastach i surowicy cielęcej – możliwość transmisji patogenów
  • SC pobierają mysie białko i prezentują je na swojej powierzchni – odrzucenieprzeszczepu
  • Trudności uzyskania, hodowli i różnicowania
  • Kontrowersje etyczne

www.zaman.com

oparzenia
Oparzenia
  • Skóra wyhodowana in vitro dostępna komercyjnie
  • Przeszczep odtwarza włosy i gruczoły łojowe
  • Prawidłowy układ strefy wzrostu

www.times.hankooki.com

zawa serca
Zawał serca
  • W Polsce 100 tys. rocznie
  • Nekroza kardiomiocytów
  • Blizna łącznotkankowa
  • Przebudowa ściany

Świat nauki 12/2004

ssc w terapii pozawa owej pr by przedkliniczne
SSC w terapii pozawałowej -próby przedkliniczne
  • Myszy, szczury, owce, świnie
  • Poprawa kurczliwości
  • Indukcja angiogenezy
  • Prawidłowe ułożenie
  • Ochrona przed dalszą degeneracją
  • Po miesiącu 38% blizny zastąpione tkanką mięśniową

www.worldhealthspecialists.org

badania kliniczne
Badania kliniczne
  • Poznań i Paryż
  • Podanie podczas bypassów lub przezskórnie
  • Makrofagi + SC
  • Większość komórek nie przeżywa
  • Zwiększenie frakcji wyrzutowej z 35% do 42%

www.dir.nhlbi.nih.gov

cukrzyca typu i
Cukrzyca typu I
  • SSC trzustkowe
  • Różnicowanie ESC w komórki wysepek trzuskowych
  • Produkcja insuliny
  • Możliwy przeszczep w nie fizjologicznej lokalizacji – pod torebkę nerki

www.stemcells.nih.gov

uszkodzenia wzroku
Uszkodzenia wzroku
  • Stosowana terapia
  • SSC z rąbka rogówki
  • In vitro hodowana błonka wszczepiana w miejsce uszkodzenia
  • Oparzenia rogówki

www.stemcell.umn.edu

choroba parkinsona
Choroba Parkinsona
  • ok. 300 pacjentów
  • ESC lub SSC
  • Tworzyły połączenia neuronalne, produkcja dopaminy
  • 50% redukcja objawów
  • Efekt utrzymywał sięprzez 5-10 lat
  • 90-95% komórek zamiera po przeszczepie
  • Na 1 pacjenta potrzeba 6 płodów

www.stemcells.nih.gov

udar m zgu oraz uszkodzenia rdzenia kr gowego
Udar mózgu oraz uszkodzenia rdzenia kręgowego
  • Podanie dożylne
  • Angiogeneza, neurogeneza, regeneracja funkcjonalna
  • Wydzielają czynniki neuropoezy

www.rsna.org

slide50
Zęby
  • Badania na myszach
  • SC z miazgi zębów mądrości
  • 15 – 20% miało prawidłowy układ tkanek
  • Ograniczenia:
    • Źródło
    • Rozwój w szczęce dorosłego
    • Tworzenie korzeni
    • Przewidywalna wielkość i kształt

Świat nauki 9/2005

hodowla narz d w
Hodowla narządów
  • Nerka:
    • Autologiczna
    • Na kolagenowym rusztowaniu
    • Po 12 tygodniach produkowała mocz
  • Wątroba
  • Pęcherz moczowy

www.obgyn.net

slide52
CD34+ 2,5% marker SC
  • CD133+ 1,1% marker SC
  • CD33+ 45% marker komórek hematopoetycznych
  • CD71+ 6% marker limfocytów
  • CD105+ 0,7% marker komórek szpiku
  • CD19+ 24% marker limfocytów B
  • CD14+ 7,8% marker monocytów
  • CD3+ 34% marker limfocytów T